| 摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-10页 |
| 术语及符号说明 | 第10-11页 |
| 目录 | 第11-17页 |
| 第1章 绪论 | 第17-39页 |
| ·微生物基因组学研究现状 | 第17-19页 |
| ·脂环酸芽孢杆菌研究进展 | 第19-28页 |
| ·脂环酸芽孢杆菌的分离 | 第19页 |
| ·脂环酸芽孢杆菌的命名和分类 | 第19-20页 |
| ·脂环酸芽孢杆菌的鉴定 | 第20-25页 |
| ·脂环酸芽孢杆菌基因组研究概况 | 第25-27页 |
| ·脂环酸芽孢杆菌酶资源的开发研究现状 | 第27-28页 |
| ·羧酸酯酶的研究进展 | 第28-37页 |
| ·羧酸酯酶的分类 | 第28-29页 |
| ·细菌羧酸酯酶的家族划分及其功能 | 第29-31页 |
| ·羧酸酯酶水解羧酸酯键的机制 | 第31-32页 |
| ·羧酸酯酶对杀虫剂的解毒作用 | 第32页 |
| ·羧酸酯酶对氨基甲酸酯类农药的水解 | 第32-33页 |
| ·羧酸酯酶对拟除虫菊酯类农药的水解 | 第33-35页 |
| ·羧酸酯酶对有机磷类农药的水解 | 第35-36页 |
| ·羧酸酯酶其他方面应用 | 第36-37页 |
| ·本课题的研究目的、意义和主要内容 | 第37-39页 |
| 第2章 A.tengchongensis CGMCC1504 全基因组测序及分析 | 第39-102页 |
| ·材料 | 第39-40页 |
| ·菌株 | 第39页 |
| ·主要试剂 | 第39页 |
| ·主要仪器 | 第39-40页 |
| ·方法 | 第40-50页 |
| ·A. tengchongensis CGMCC1504 基因组 DNA 的提取 | 第40-41页 |
| ·测序文库的构建 | 第41页 |
| ·Solexa 双末端测序 | 第41页 |
| ·A. tengchongensis CGMCC1504 基因组的分析 | 第41-48页 |
| ·羧酸酯酶 CarE3 和 CarE5 的生物信息学分析 | 第48-50页 |
| ·结果 | 第50-92页 |
| ·A. tengchongensis CGMCC1504 基因组 DNA 的提取 | 第50-51页 |
| ·测序文库的质检 | 第51-52页 |
| ·测序与组装结果 | 第52页 |
| ·A. tengchongensis CGMCC1504 的基因组序列分析总体概况 | 第52-54页 |
| ·KEGG 代谢途径分析 | 第54-62页 |
| ·COG 功能分类 | 第62页 |
| ·GO 功能分类 | 第62-65页 |
| ·CRISPR 预测分析 | 第65-67页 |
| ·基因岛的预测 | 第67-68页 |
| ·前噬菌体的预测 | 第68页 |
| ·共线性分析 | 第68-72页 |
| ·Core 和 Pan 基因分析 | 第72-75页 |
| ·A. tengchongensis CGMCC1504 糖苷水解酶和酯酶的统计 | 第75-80页 |
| ·CarE3 和 CarE5 基因序列分析 | 第80页 |
| ·CarE3 和 CarE5 一级结构的预测 | 第80-82页 |
| ·CarE3 和 CarE5 二级结构的预测 | 第82-85页 |
| ·CarE3 和 CarE5 多序列比对和保守结构域分析 | 第85-88页 |
| ·CarE3 和 CarE5 蛋白家族的分类 | 第88-89页 |
| ·CarE3 和 CarE5 三级结构的预测 | 第89-92页 |
| ·讨论 | 第92-100页 |
| ·本章小结 | 第100-102页 |
| 第3章 羧酸酯酶 CarE3 和 CarE5 的克隆表达及酶学性质的研究 | 第102-124页 |
| ·材料 | 第102-103页 |
| ·菌株和质粒 | 第102页 |
| ·主要试剂 | 第102-103页 |
| ·主要仪器 | 第103页 |
| ·方法 | 第103-112页 |
| ·菌株培养及总基因组 DNA 的提取 | 第103页 |
| ·常用试剂的配制 | 第103-104页 |
| ·培养基 | 第104-105页 |
| ·大肠杆菌 DH5 和 BL21(DE3)感受态细胞的制备 | 第105页 |
| ·重组质粒 pET28D3 和 pET28D5 的构建 | 第105-107页 |
| ·pET28D3 和 pET28D5 阳性克隆子的筛选与鉴定 | 第107-108页 |
| ·重组羧酸酯酶 CarE3 和 CarE5 在大肠杆菌中的诱导表达 | 第108页 |
| ·重组羧酸酯酶 CarE3 和 CarE5 的纯化和鉴定 | 第108-109页 |
| ·Bradford 法蛋白定量 | 第109-110页 |
| ·羧酸酯酶活性的测定(萘酚法) | 第110-111页 |
| ·重组羧酸酯酶 CarE3 和 CarE5 的酶学性质初步研究 | 第111-112页 |
| ·结果 | 第112-121页 |
| ·PCR 扩增 CarE3 和 CarE5 的完整基因 | 第112-113页 |
| ·重组质粒 pET28D3 和 pET28D5 的构建 | 第113页 |
| ·pET28D3 和 pET28D5 阳性克隆子的筛选与鉴定 | 第113-114页 |
| ·重组羧酸酯酶 CarE3 和 CarE5 在大肠杆菌中的诱导表达 | 第114页 |
| ·重组羧酸酯酶 CarE3 和 CarE5 的纯化和鉴定 | 第114-115页 |
| ·重组羧酸酯酶 CarE3 和 CarE5 蛋白含量的测定 | 第115-116页 |
| ·羧酸酯酶活性的测定 | 第116-117页 |
| ·重组羧酸酯酶 CarE3 和 CarE5 最适反应温度及温度稳定性 | 第117-118页 |
| ·重组羧酸酯酶 CarE3 和 CarE5 最适反应 pH 及 pH 稳定性 | 第118-119页 |
| ·金属离子及化学试剂对重组羧酸酯酶 CarE3 和 CarE5 的影响 | 第119-121页 |
| ·重组羧酸酯酶 CarE3 和 CarE5 的动力学参数及比活力 | 第121页 |
| ·讨论 | 第121-122页 |
| ·本章小结 | 第122-124页 |
| 第4章 重组羧酸酯酶 CarE3 和 CarE5 降解农药的研究 | 第124-140页 |
| ·材料 | 第124页 |
| ·主要试剂 | 第124页 |
| ·主要仪器 | 第124页 |
| ·方法 | 第124-129页 |
| ·重组羧酸酯酶 CarE3 和 CarE5 对拟除虫菊酯类农药的降解 | 第126-127页 |
| ·重组羧酸酯酶 CarE3 和 CarE5 对氨基甲酸酯类农药的降解 | 第127-128页 |
| ·重组羧酸酯酶 CarE3 和 CarE5 对有机磷类农药的降解 | 第128-129页 |
| ·结果 | 第129-135页 |
| ·农药的标准曲线、回收率及检测限 | 第129-132页 |
| ·重组羧酸酯酶 CarE3 和 CarE5 对拟除虫菊酯类农药的降解 | 第132-133页 |
| ·重组羧酸酯酶 CarE3 和 CarE5 对氨基甲酸酯类农药的降解 | 第133-134页 |
| ·重组羧酸酯酶 CarE3 和 CarE5 对有机磷类农药的降解 | 第134-135页 |
| ·讨论 | 第135-139页 |
| ·本章小结 | 第139-140页 |
| 第5章 羧酸酯酶 CarE3 和 CarE5 细胞表面展示体系的构建及分析 | 第140-164页 |
| ·材料 | 第140-143页 |
| ·菌株和质粒 | 第140-142页 |
| ·主要试剂 | 第142-143页 |
| ·主要仪器 | 第143页 |
| ·方法 | 第143-149页 |
| ·常用试剂的配制 | 第143页 |
| ·培养基 | 第143页 |
| ·羧酸酯酶融合 inaK-N/NC 重组质粒的构建 | 第143-145页 |
| ·羧酸酯酶融合 inaK-N/NC 以及 gfp 重组质粒的构建 | 第145-146页 |
| ·全细胞酶活性的测定 | 第146-147页 |
| ·细胞表面定位分析 | 第147-148页 |
| ·IPTG 最佳诱导浓度和诱导时间 | 第148页 |
| ·不同碳链长度底物活性测定 | 第148页 |
| ·全细胞在常温下酶活性的变化 | 第148-149页 |
| ·结果 | 第149-161页 |
| ·PCR 扩增冰核蛋白基因 inak-N/NC | 第149页 |
| ·羧酸酯酶融合 inaK-N/NC 重组质粒的构建 | 第149-150页 |
| ·羧酸酯酶融合 inaK-N/NC 的阳性克隆子筛选与鉴定 | 第150页 |
| ·羧酸酯酶融合 inaK-N/NC 在大肠杆菌中的诱导表达 | 第150-151页 |
| ·PCR 扩增绿色荧光蛋白基因 gfp | 第151-152页 |
| ·羧酸酯酶融合 inaK-N/NC 以及 gfp 重组质粒的构建 | 第152页 |
| ·羧酸酯酶融合 inaK-N/NC 以及 gfp 阳性克隆子筛选 | 第152-153页 |
| ·羧酸酯酶融合 inaK-N/NC 以及 gfp 在大肠杆菌中的诱导表达 | 第153页 |
| ·细胞表面定位分析 | 第153-157页 |
| ·IPTG 最佳诱导浓度和诱导时间 | 第157-159页 |
| ·不同碳链长度底物活性的测定 | 第159页 |
| ·全细胞在常温下酶活性的变化 | 第159-161页 |
| ·讨论 | 第161-162页 |
| ·本章小结 | 第162-164页 |
| 第6章 总结和展望 | 第164-168页 |
| ·总结 | 第164-166页 |
| ·创新点 | 第166页 |
| ·展望 | 第166-168页 |
| 参考文献 | 第168-180页 |
| 附录 | 第180-192页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文和研究成果 | 第192-193页 |
| 致谢 | 第193页 |
