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AtRhoGDI1调控植物细胞形态发生及脱落酸信号传导的功能研究

论文主要创新点第1-7页
目录第7-10页
摘要第10-13页
ABSTRACT第13-16页
1 文献综述第16-43页
   ·植物小G蛋白信号通路的研究进展第16-22页
     ·ROP小G蛋白在植物生长发育以及各个生理过程中的作用第16-18页
     ·ROP信号通路的下游效应因子第18-20页
     ·鸟苷酸交换因子(GEF)对ROP活性的调控第20-21页
     ·GTP酶激活蛋白(GAP)对ROP活性的调控第21-22页
   ·鸟苷酸解离抑制因子(RhoGDI)对小G蛋白ROP信号通路的调控机理第22-26页
     ·哺乳动物RhoGDI对Rho GTPase的调控第22-25页
     ·RhoGDI在植物生长发育中的作用第25-26页
   ·植物激素脱落酸的研究进展第26-42页
     ·脱落酸的合成与代谢第26-31页
       ·脱落酸的合成第26-29页
       ·脱落酸的代谢第29-31页
     ·脱落酸信号通路的研究第31-42页
       ·脱落酸受体的研究第31-34页
       ·脱落酸信号通路的研究第34-42页
   ·本研究的目的和意义第42-43页
2 材料与方法第43-59页
   ·材料第43-49页
     ·植物材料第43页
     ·菌株与质粒第43-45页
     ·引物名称和序列第45-46页
     ·所用工具酶及试剂盒第46页
     ·抗体第46页
     ·培养基第46-48页
     ·其他主要生物学试剂第48-49页
   ·实验方法第49-59页
     ·拟南芥植株的培养以及表型分析第49-51页
       ·拟南芥的培养以及突变体的鉴定第49-50页
       ·超表达转基因植株的构建第50-51页
     ·分子生物学与生化实验方法第51-55页
       ·基因克隆与载体构建第51页
       ·质粒的提取第51-52页
       ·植物基因组DNA提取第52页
       ·植物总RNA的提取第52页
       ·半定量RT-PCR第52页
       ·蛋白质的原核表达第52-53页
       ·拟南芥总蛋白的提取第53页
       ·Western blot(免疫印迹)实验第53-54页
       ·体外磷酸化实验第54页
       ·蛋白质Pull-down实验第54页
       ·小G蛋白GDP交换实验第54-55页
       ·蛋白质双向电泳实验第55页
     ·细胞生物学方法第55-59页
       ·拟南芥叶肉原生质体的分离和转化第55-56页
       ·荧光显微镜的观察第56页
       ·激光扫描共聚焦显微镜的观察第56页
       ·FRET(荧光共振能量转移)实验第56-57页
       ·ABA诱导的气孔关闭实验第57页
       ·GUS染色的组织化学分析第57-58页
       ·基因枪瞬时转化第58-59页
3 结果与分析第59-114页
   ·突变体及转基因植株的鉴定以及GDI基因的组织表达分布第59-61页
   ·gdi1突变体及GDI1超表达转基因植株的表型分析第61-66页
     ·gdi1突变体及GDI1超表达转基因植株的初步表型分析第61-62页
     ·gdi1突变体及GDI1超表达转基因植株的表皮细胞形态观察第62-66页
   ·GDI1蛋白的亚细胞定位第66-68页
   ·GDI1与ROP的相互作用第68-75页
     ·体外蛋白质Pull-down实验检测GDI1与不同ROP的相互作用第68-69页
     ·双分子荧光互补实验验证GDI与不同ROP的相互作用第69-70页
     ·体内FRET研究GDI1与不同形式的ROP的相互作用第70-73页
     ·GDI1转基因植株与ROP转基因植株杂交后代的表型分析第73-75页
   ·GDI1对叶片表皮细胞微丝及微管细胞骨架的影响第75-79页
   ·GDI1的磷酸化修饰及其功能作用第79-84页
     ·双向电泳检测GDI1的磷酸化修饰及质谱鉴定GDI的磷酸化位点第79-80页
     ·GDI1的磷酸化修饰对其功能作用的影响第80-84页
   ·钙离子依赖蛋白激酶对GDI1的磷酸化调控第84-86页
     ·利用体外磷酸化实验验证CPK3对GDI1的磷酸化修饰作用第84页
     ·CPK3与GDI1的蛋白质相互作用的分析第84-86页
   ·药理学实验检验钙离子信号对叶表皮细胞形态的影响第86-88页
   ·小结与讨论关于GDI1在细胞形态发生中功能的研究第88-93页
     ·小结第88-90页
     ·讨论第90-93页
   ·GDI1在ABA诱导的气孔关闭信号通路中的功能第93-97页
     ·gdi1缺失突变体及GDI1超表达转基因植株在ABA诱导气孔关闭过程中的表型第93-96页
     ·GDI1超表达植株气孔对ABA的超敏感反应可被CA-rop6恢复第96-97页
   ·GDI1对ABA诱导的保卫细胞中细胞骨架稳定性的影响第97-103页
     ·实时观测ABA对保卫细胞微丝骨架构架的影响第97-98页
     ·在3D水平上精细分析ABA诱导的保卫细胞中微丝骨架的重排第98-100页
     ·GDI1对ABA诱导的保卫细胞微丝细胞骨架重排的影响第100-103页
   ·GDI1的活性受到ABA信号分子之一的SnRK2.6激酶的调控第103-110页
     ·激酶SnRK2.6可在三个磷酸化位点上对GDI1蛋白进行修饰第103-104页
     ·激酶SnRK2.6与GDI1相互作用的分析第104-106页
     ·GDI1的磷酸化增强了它对ROP6-GDP释放的抑制第106-107页
     ·ABA通过受体PYR蛋白质复合体调控SnRK2.6对GDI1的磷酸化修饰第107-110页
   ·小结与讨论_GDI1在ABA诱导的气孔关闭信号通路中的功能第110-114页
     ·小结第110-111页
     ·讨论第111-114页
4 参考文献第114-131页
5 在读期间发表和整理的文章第131-132页
6 致谢第132页

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