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抗虫Bt基因cry1Ac甜菜叶绿体遗传转化与表达研究

摘要第1-6页
Abstract第6-17页
第1章 绪论第17-48页
   ·课题的学术背景及其理论与实际意义第17-18页
   ·国内外文献综述第18-43页
     ·抗虫基因研究与应用概况第18-20页
     ·苏云金杆菌(Bacillus thuringiensis Bt )杀虫晶体蛋白基因研究应用进展第20-25页
     ·植物细胞核基因组遗传转化研究概况第25-27页
     ·植物叶绿体基因组遗传转化研究进展第27-42页
     ·甜菜(Beta vulgaris L.)遗传转化研究进展第42-43页
   ·叶绿体遗传转化中存在的主要问题第43-45页
   ·课题来源及主要研究内容第45-48页
     ·课题来源第45页
     ·主要研究内容第45-48页
第2章 实验材料与方法第48-67页
   ·实验材料第48-50页
     ·植物材料第48页
     ·试剂与工具酶第48页
     ·菌株与质粒第48-49页
     ·培养基第49页
     ·仪器设备第49-50页
     ·引物合成与测序第50页
   ·实验方法第50-67页
     ·甜菜再生体系优化及对抗生素抗性筛选第50-52页
     ·甜菜叶绿体 DNA 提取方法建立及同源片段的克隆第52-57页
     ·抗虫 Bt 基因 cry1Ac 甜菜叶绿体转化载体构建及转化第57-61页
     ·转基因再生植株分子检测第61-65页
     ·转基因甜菜后代抗性基因遗传特性分析第65-66页
     ·叶绿体遗传转化机理初探第66-67页
第3章 甜菜再生体系优化与抗性筛选及同源片段的克隆第67-98页
   ·甜菜高效再生体系的建立第67-68页
   ·甜菜抗生素抗性筛选第68-74页
     ·卡那霉素对甜菜叶柄分化的影响第70-71页
     ·壮观霉素对甜菜叶柄分化的影响第71-72页
     ·甜菜叶柄对两种抗生素的敏感程度比较第72-74页
   ·甜菜叶绿体 DNA 提取方法建立第74-75页
     ·甜菜叶绿体 DNA 分离与纯化第74-75页
     ·ctDNA 的限制性内切酶分析第75页
   ·甜菜叶绿体基因组同源片段的克隆与序列分析第75-92页
     ·甜菜叶绿体 atpB-rbcL 基因间隔区的克隆与序列分析第75-76页
     ·甜菜 rbcL 基因克隆与序列分析及同源性第76-83页
     ·甜菜 atpB 基因的克隆与序列分析及同源性第83-92页
     ·甜菜叶绿体同源片段 rps7/rps12 及 ndhB 的克隆与序列分析第92页
   ·关于高效再生体系建立与抗性筛选及同源片段克隆的讨论第92-97页
     ·甜菜高效再生体系的建立第92-93页
     ·甜菜抗生素抗性筛选第93-94页
     ·甜菜叶绿体 DNA 提取方法第94-95页
     ·甜菜叶绿体同源片段的克隆与序列分析第95-97页
   ·本章小结第97-98页
第4章 抗虫 Bt 基因 cry1Ac 甜菜叶绿体转化载体构建及转化第98-109页
   ·抗虫 Bt 基因甜菜叶绿体转化载体构建第98-105页
     ·Bt 基因的测序与序列分析第98页
     ·甜菜叶绿体同源片段中间载体 pSKAR 构建第98-100页
     ·重组质粒 pRC16APT 的构建第100-102页
     ·甜菜叶绿体转化载体 pSKARBt 的构建第102-105页
   ·基因枪转化甜菜及转基因植株的获得第105-106页
     ·基因枪转化甜菜及抗性筛选培养第105-106页
     ·转化植株的同质化筛选第106页
   ·关于遗传转化及转化体同质化筛选的讨论第106-108页
     ·叶绿体转化载体构建及转化第106-107页
     ·转基因植株同质化的筛选第107-108页
   ·本章小结第108-109页
第5章 抗虫 Bt 基因 cry1Ac 在甜菜叶绿体中的表达与遗传特性分析第109-125页
   ·甜菜转基因植株的 PCR 检测第109-112页
     ·筛选标记基因 aadA 的检测第109页
     ·目的基因 Bt 的检测第109-111页
     ·目的基因定点整合及转化植株同质化程度的检测第111-112页
   ·转基因植株的 Southern blot 分析第112-114页
     ·以 aadA 基因为探针的 Southern 杂交鉴定第112-113页
     ·以 Bt 基因片段为探针的 Southern 杂交第113-114页
     ·以同源片段为探针的 Southern 杂交鉴定第114页
   ·转基因植株的 Northern blot 检测第114页
   ·转基因植株的 Western blot 检测第114-116页
   ·生物杀虫实验第116-118页
     ·Bt 毒蛋白在工程菌中的表达第116页
     ·Bt 毒蛋白在甜菜叶绿体中的表达第116-118页
   ·转基因甜菜后代抗性基因遗传特性分析第118-121页
     ·转基因植株 T1 种子壮观霉素抗性检测第118页
     ·转基因甜菜后代抗虫 Bt 基因 cry1Ac PCR 检测第118-119页
     ·转基因甜菜后代的生物杀虫实验第119-121页
   ·关于转基因植株分子检测及遗传特性的讨论第121-123页
     ·转基因植株的 PCR 检测第121-122页
     ·总 RNA 的提取纯化第122页
     ·转基因植株生物杀虫试验及生物安全性第122-123页
     ·转基因甜菜后代抗虫基因的遗传特性第123页
   ·本章小结第123-125页
第6章 叶绿体遗传转化机理研究第125-137页
   ·筛选标记基因的选取与目的基因整合几率间的关系第125-129页
     ·甜菜叶绿体表达载体 pSKARbar 的构建第125-127页
     ·基因枪法转化甜菜及转基因抗性植株获得第127-129页
     ·转基因植株的 PCR 检测第129页
     ·转基因植株除草剂抗性测试第129页
   ·同源片段的选取与目的基因整合几率间的关系第129-133页
     ·甜菜叶绿体转化载体 pSKRPNDBt 的构建第130-132页
     ·基因枪法转化甜菜及转基因抗性植株获得第132-133页
     ·转基因植株的 PCR 检测第133页
   ·关于叶绿体遗传转化机理研究的讨论第133-136页
     ·筛选标记基因的选取与目的基因转化效率间的关系第134-135页
     ·同源片段的选取与目的基因整合几率间的关系第135-136页
   ·本章小结第136-137页
结论第137-139页
参考文献第139-148页
附录第148-150页
攻读学位期间发表的学术论文第150-152页
致谢第152-153页
个人简历第153-154页

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