摘要 | 第1-6页 |
Abstract | 第6-17页 |
第1章 绪论 | 第17-48页 |
·课题的学术背景及其理论与实际意义 | 第17-18页 |
·国内外文献综述 | 第18-43页 |
·抗虫基因研究与应用概况 | 第18-20页 |
·苏云金杆菌(Bacillus thuringiensis Bt )杀虫晶体蛋白基因研究应用进展 | 第20-25页 |
·植物细胞核基因组遗传转化研究概况 | 第25-27页 |
·植物叶绿体基因组遗传转化研究进展 | 第27-42页 |
·甜菜(Beta vulgaris L.)遗传转化研究进展 | 第42-43页 |
·叶绿体遗传转化中存在的主要问题 | 第43-45页 |
·课题来源及主要研究内容 | 第45-48页 |
·课题来源 | 第45页 |
·主要研究内容 | 第45-48页 |
第2章 实验材料与方法 | 第48-67页 |
·实验材料 | 第48-50页 |
·植物材料 | 第48页 |
·试剂与工具酶 | 第48页 |
·菌株与质粒 | 第48-49页 |
·培养基 | 第49页 |
·仪器设备 | 第49-50页 |
·引物合成与测序 | 第50页 |
·实验方法 | 第50-67页 |
·甜菜再生体系优化及对抗生素抗性筛选 | 第50-52页 |
·甜菜叶绿体 DNA 提取方法建立及同源片段的克隆 | 第52-57页 |
·抗虫 Bt 基因 cry1Ac 甜菜叶绿体转化载体构建及转化 | 第57-61页 |
·转基因再生植株分子检测 | 第61-65页 |
·转基因甜菜后代抗性基因遗传特性分析 | 第65-66页 |
·叶绿体遗传转化机理初探 | 第66-67页 |
第3章 甜菜再生体系优化与抗性筛选及同源片段的克隆 | 第67-98页 |
·甜菜高效再生体系的建立 | 第67-68页 |
·甜菜抗生素抗性筛选 | 第68-74页 |
·卡那霉素对甜菜叶柄分化的影响 | 第70-71页 |
·壮观霉素对甜菜叶柄分化的影响 | 第71-72页 |
·甜菜叶柄对两种抗生素的敏感程度比较 | 第72-74页 |
·甜菜叶绿体 DNA 提取方法建立 | 第74-75页 |
·甜菜叶绿体 DNA 分离与纯化 | 第74-75页 |
·ctDNA 的限制性内切酶分析 | 第75页 |
·甜菜叶绿体基因组同源片段的克隆与序列分析 | 第75-92页 |
·甜菜叶绿体 atpB-rbcL 基因间隔区的克隆与序列分析 | 第75-76页 |
·甜菜 rbcL 基因克隆与序列分析及同源性 | 第76-83页 |
·甜菜 atpB 基因的克隆与序列分析及同源性 | 第83-92页 |
·甜菜叶绿体同源片段 rps7/rps12 及 ndhB 的克隆与序列分析 | 第92页 |
·关于高效再生体系建立与抗性筛选及同源片段克隆的讨论 | 第92-97页 |
·甜菜高效再生体系的建立 | 第92-93页 |
·甜菜抗生素抗性筛选 | 第93-94页 |
·甜菜叶绿体 DNA 提取方法 | 第94-95页 |
·甜菜叶绿体同源片段的克隆与序列分析 | 第95-97页 |
·本章小结 | 第97-98页 |
第4章 抗虫 Bt 基因 cry1Ac 甜菜叶绿体转化载体构建及转化 | 第98-109页 |
·抗虫 Bt 基因甜菜叶绿体转化载体构建 | 第98-105页 |
·Bt 基因的测序与序列分析 | 第98页 |
·甜菜叶绿体同源片段中间载体 pSKAR 构建 | 第98-100页 |
·重组质粒 pRC16APT 的构建 | 第100-102页 |
·甜菜叶绿体转化载体 pSKARBt 的构建 | 第102-105页 |
·基因枪转化甜菜及转基因植株的获得 | 第105-106页 |
·基因枪转化甜菜及抗性筛选培养 | 第105-106页 |
·转化植株的同质化筛选 | 第106页 |
·关于遗传转化及转化体同质化筛选的讨论 | 第106-108页 |
·叶绿体转化载体构建及转化 | 第106-107页 |
·转基因植株同质化的筛选 | 第107-108页 |
·本章小结 | 第108-109页 |
第5章 抗虫 Bt 基因 cry1Ac 在甜菜叶绿体中的表达与遗传特性分析 | 第109-125页 |
·甜菜转基因植株的 PCR 检测 | 第109-112页 |
·筛选标记基因 aadA 的检测 | 第109页 |
·目的基因 Bt 的检测 | 第109-111页 |
·目的基因定点整合及转化植株同质化程度的检测 | 第111-112页 |
·转基因植株的 Southern blot 分析 | 第112-114页 |
·以 aadA 基因为探针的 Southern 杂交鉴定 | 第112-113页 |
·以 Bt 基因片段为探针的 Southern 杂交 | 第113-114页 |
·以同源片段为探针的 Southern 杂交鉴定 | 第114页 |
·转基因植株的 Northern blot 检测 | 第114页 |
·转基因植株的 Western blot 检测 | 第114-116页 |
·生物杀虫实验 | 第116-118页 |
·Bt 毒蛋白在工程菌中的表达 | 第116页 |
·Bt 毒蛋白在甜菜叶绿体中的表达 | 第116-118页 |
·转基因甜菜后代抗性基因遗传特性分析 | 第118-121页 |
·转基因植株 T1 种子壮观霉素抗性检测 | 第118页 |
·转基因甜菜后代抗虫 Bt 基因 cry1Ac PCR 检测 | 第118-119页 |
·转基因甜菜后代的生物杀虫实验 | 第119-121页 |
·关于转基因植株分子检测及遗传特性的讨论 | 第121-123页 |
·转基因植株的 PCR 检测 | 第121-122页 |
·总 RNA 的提取纯化 | 第122页 |
·转基因植株生物杀虫试验及生物安全性 | 第122-123页 |
·转基因甜菜后代抗虫基因的遗传特性 | 第123页 |
·本章小结 | 第123-125页 |
第6章 叶绿体遗传转化机理研究 | 第125-137页 |
·筛选标记基因的选取与目的基因整合几率间的关系 | 第125-129页 |
·甜菜叶绿体表达载体 pSKARbar 的构建 | 第125-127页 |
·基因枪法转化甜菜及转基因抗性植株获得 | 第127-129页 |
·转基因植株的 PCR 检测 | 第129页 |
·转基因植株除草剂抗性测试 | 第129页 |
·同源片段的选取与目的基因整合几率间的关系 | 第129-133页 |
·甜菜叶绿体转化载体 pSKRPNDBt 的构建 | 第130-132页 |
·基因枪法转化甜菜及转基因抗性植株获得 | 第132-133页 |
·转基因植株的 PCR 检测 | 第133页 |
·关于叶绿体遗传转化机理研究的讨论 | 第133-136页 |
·筛选标记基因的选取与目的基因转化效率间的关系 | 第134-135页 |
·同源片段的选取与目的基因整合几率间的关系 | 第135-136页 |
·本章小结 | 第136-137页 |
结论 | 第137-139页 |
参考文献 | 第139-148页 |
附录 | 第148-150页 |
攻读学位期间发表的学术论文 | 第150-152页 |
致谢 | 第152-153页 |
个人简历 | 第153-154页 |