| 摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-11页 |
| 第1章 绪论 | 第11-27页 |
| 1. 组蛋白去乙酰化酶 | 第11-18页 |
| 2. 转录因子 GATA1 | 第18-24页 |
| 3. 红细胞发育及细胞系 | 第24-25页 |
| 4. GATA1 和 HDAC1 在红细胞发育中的研究意义 | 第25页 |
| 5. 实验技术 | 第25-27页 |
| 第2章 工团 GATA1 和 HDAC1 的直接作用 | 第27-50页 |
| 第1节 GST-HDAC1 和 GST-GATA1 突变蛋白的表达与纯化 | 第27-37页 |
| ·实验材料及仪器 | 第27-28页 |
| ·实验方法 | 第28-30页 |
| ·实验过程与结果 | 第30-36页 |
| ·pGex-2TK-HDAC1 不同突变体质粒的构建及 GST-HDAC1 突变蛋白的表达 | 第31-32页 |
| ·pGex-4T-1-GATA1 不同突变质粒的构建及 GST-GATA1 突变蛋白的表达 | 第32-33页 |
| ·GST-HDAC1 突变蛋白及 GST-GATA1 突变蛋白的纯化 | 第33-36页 |
| ·小结 | 第36-37页 |
| 第2节 GATA1 和 HDAC1 在体外的直接作用 | 第37-44页 |
| ·实验材料和仪器 | 第37页 |
| ·实验方法 | 第37-38页 |
| ·体外转录翻译合成35S 标记蛋白 | 第37页 |
| ·GST Pull Down 实验 | 第37-38页 |
| ·实验过程与结果 | 第38-43页 |
| ·~35S-HDAC1 与35S-GATA1 的体外合成 | 第38页 |
| ·GST-GATA1 与35S-HDAC1 的体外 Pull down 实验 | 第38-39页 |
| ·确定与 HDAC1 作用的 GATA1 的结构域 | 第39-41页 |
| ·GST-HDAC1 与 35S-GATA1 的体外 Pull-down 实验 | 第41页 |
| ·确定与 GATA1 作用的 HDAC1 的结构域 | 第41-43页 |
| ·小结 | 第43-44页 |
| 第3节 GATA1 和 HDAC1 在体内的作用 | 第44-50页 |
| ·实验材料 | 第44页 |
| ·实验方法 | 第44-47页 |
| ·脂质体 lipofectamine 2000 转染细胞 | 第44-45页 |
| ·G1E-ER4 和 G1E2 细胞培养 | 第45-46页 |
| ·细胞冻存 | 第46页 |
| ·提取细胞抽提液 | 第46页 |
| ·Bradford 法测定蛋白浓度 | 第46-47页 |
| ·免疫沉淀（Immunoprecipitation，IP） | 第47页 |
| ·实验过程与结果 | 第47-49页 |
| ·GATA1 可以和 HDAC1 在过表达的细胞株中相互作用 | 第47-49页 |
| ·GATA1 免疫沉淀复合物中包含 HDAC1 | 第47-48页 |
| ·HDAC1 免疫沉淀复合物中包含 GATA1 | 第48-49页 |
| ·GATA1 和 HDAC1 在细胞系中的相互作用 | 第49页 |
| ·小结 | 第49-50页 |
| 第3章 红细胞分化过程中 HDACs 的作用 | 第50-93页 |
| 第1节 HDAC1 在红细胞系分化过程中的活性改变 | 第50-61页 |
| ·实验材料 | 第50-51页 |
| ·实验方法 | 第51-54页 |
| ·CD34+细胞培养 | 第51-52页 |
| ·检测去乙酰化酶活性 | 第52页 |
| ·脂质体 lipofectamine 2000 转染细胞 | 第52-53页 |
| ·报告基因荧光素酶检测实验 luciferase reporter assay | 第53页 |
| ·全 RNA 提取 | 第53页 |
| ·逆转录合成 cDNA | 第53-54页 |
| ·实验过程与结果 | 第54-60页 |
| ·HDAC1 在红细胞系分化过程中的活性改变 | 第54-55页 |
| ·HDAC1 在红细胞分化过程中的乙酰化修饰 | 第55-60页 |
| ·小结 | 第60-61页 |
| 第2节 HDAC1 在红细胞分化中的作用 | 第61-82页 |
| ·实验材料 | 第61-62页 |
| ·实验方法 | 第62-69页 |
| ·构建 pLKO.1-HDAC1shRNA 质粒 | 第62-63页 |
| ·shRNA lentivirus 病毒的包装 | 第63-64页 |
| ·优化处理细胞的 puromycin 浓度 | 第64页 |
| ·lentivirus 病毒的感染以及阳性细胞的筛选 | 第64-65页 |
| ·retrovirus 病毒的包装 | 第65-66页 |
| ·优化处理细胞的 G418 浓度 | 第66页 |
| ·retrovirus 病毒的感染以及阳性细胞的筛选 | 第66-67页 |
| ·单克隆阳性细胞的筛选 | 第67页 |
| ·稳定过表达目的蛋白的阳性细胞富集 | 第67页 |
| ·报告基因荧光素酶检测实验 luciferase reporter assay | 第67-68页 |
| ·染色质免疫沉淀（Chromatin Immunoprecipitation，IP） | 第68-69页 |
| ·实验过程与结果 | 第69-81页 |
| ·乙酰化的 HDAC1 可以促进 GATA1 相关靶基因的激活 | 第69-76页 |
| ·HDAC1 及乙酰化 HDAC1 在细胞分化中在靶基因上游调控区域的分布 | 第76-81页 |
| ·小结 | 第81-82页 |
| 第3节 HDAC6 在红细胞分化末期的作用 | 第82-93页 |
| ·实验材料 | 第82-83页 |
| ·实验方法 | 第83页 |
| ·全 RNA 提取 | 第83页 |
| ·May-Grunwald Giemsa 染色 | 第83页 |
| ·MEL 细胞在 fibronectin 上的诱导分化 | 第83页 |
| ·实验过程与结果 | 第83-91页 |
| ·红细胞终末分化中 HDACs 的表达水平 | 第83-85页 |
| ·HDAC6 在终末分化中的作用 | 第85-91页 |
| ·小结 | 第91-93页 |
| 第4章 结论 | 第93-97页 |
| 参考文献 | 第97-105页 |
| 附录 | 第105-109页 |
| 作者简介及科研成果 | 第109页 |
