| 摘要 | 第1-4页 |
| Abstract | 第4-11页 |
| 引言 | 第11-12页 |
| Ⅰ 文献综述 | 第12-27页 |
| 一、 我国棉花种质资源研究概况 | 第12-16页 |
| （一） 棉花种质资源的收集和保存 | 第12-13页 |
| （二） 棉花种质资源的鉴定和评价 | 第13页 |
| （三） 棉花种质资源的创新 | 第13-14页 |
| （四） 我国棉花种质资源研究发展方向 | 第14-16页 |
| 二、 转基因技术在棉花种质创新中的应用 | 第16-19页 |
| （一） 转化方法 | 第17-18页 |
| 1 .基因枪法 | 第17页 |
| 2 .农杆菌介导法 | 第17页 |
| 3 .花粉管通道法 | 第17-18页 |
| （二） 棉花转基因育种中导入的外源基因 | 第18-19页 |
| 1 .抗虫基因 | 第18页 |
| 2 .抗除草剂基因 | 第18页 |
| 3 .抗病基因 | 第18页 |
| 4 .抗逆基因 | 第18-19页 |
| 5 .品质改良基因 | 第19页 |
| 三、 棉籽含油量研究概况及高油棉花育种的可行性 | 第19-21页 |
| （一） 棉籽油组分 | 第19-20页 |
| （二） 棉籽含油量的遗传特性 | 第20页 |
| （三） 棉籽含油量与棉花其它品质性状间的关系 | 第20页 |
| （四） 提高棉籽油含量及改良脂肪酸成分的可行性策略 | 第20-21页 |
| 四、 低酚棉育种发展概况 | 第21-22页 |
| 五、 RNAi 及其在植物中的应用 | 第22-24页 |
| （一） RNAi 的作用机制 | 第22-23页 |
| （二） RNAi 在植物中的应用 | 第23-24页 |
| 1 .RNAi 在植物功能基因组学研究中的应用 | 第23页 |
| 2 .RNAi 在植物品质改良研究中的应用 | 第23页 |
| 3 .RNAi 在植物抗病虫害研究中的应用 | 第23-24页 |
| 六、 磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶在植物生理代谢中的作用 | 第24-25页 |
| 七、 (+)-δ-杜松烯合成酶简述 | 第25-27页 |
| Ⅱ 研究内容 | 第27-76页 |
| 第一章 棉花种子α-球蛋白启动子的克隆及载体构建 | 第27-44页 |
| 1 实验材料 | 第27-28页 |
| ·植物材料 | 第27页 |
| ·试剂 | 第27-28页 |
| ·菌株和载体 | 第28页 |
| ·培养基 | 第28页 |
| 2 方法 | 第28-34页 |
| ·棉花种子α-球蛋白启动子的克隆 | 第28-30页 |
| ·棉花种子α-球蛋白启动子引物设计与合成 | 第28-29页 |
| ·棉花种子α-球蛋白启动子的 PCR 扩增 | 第29页 |
| ·PCR 产物与 pEASY-T1 载体连接 | 第29页 |
| ·感受态细胞的制备 | 第29-30页 |
| ·大肠杆菌的转化 | 第30页 |
| ·阳性克隆检测 | 第30页 |
| ·棉花种子α-球蛋白启动子的植物双元表达载体的构建 | 第30-32页 |
| ·含有 infusion 接头的α-球蛋白启动子片段制备 | 第30-31页 |
| ·线性双元载体制备： | 第31页 |
| ·CTE235-Insert 和 CTE235-Vector 的连接 | 第31页 |
| ·大肠杆菌的转化 | 第31页 |
| ·阳性克隆检测 | 第31-32页 |
| ·农杆菌介导 CTE235-3 转化烟草 | 第32-34页 |
| ·根癌农杆菌 LBA4404 感受态细胞的制备 | 第32页 |
| ·转化根癌农杆菌 LBA4404 | 第32-33页 |
| ·工程菌的制备 | 第33页 |
| ·叶盘法进行烟草的遗传转化 | 第33-34页 |
| ·转基因烟草的检测 | 第34页 |
| 3 结果与分析 | 第34-42页 |
| ·α-球蛋白启动子的克隆 | 第34-35页 |
| ·α-球蛋白启动子 PCR 扩增片段的序列分析 | 第35-39页 |
| ·α-球蛋白启动子的植物双元表达载体的构建 | 第39-40页 |
| ·工程菌的制备 | 第40-41页 |
| ·农杆菌介导法转化烟草 | 第41-42页 |
| 4 讨论 | 第42-44页 |
| 第二章 棉花 PEPC 基因的克隆和 RNAi 载体的构建 | 第44-62页 |
| 1 实验材料 | 第44-45页 |
| ·植物材料 | 第44页 |
| ·试剂 | 第44-45页 |
| ·菌株和载体 | 第45页 |
| ·培养基 | 第45页 |
| 2 方法 | 第45-51页 |
| ·棉花 PEPC 基因的克隆 | 第45-46页 |
| ·棉花 PEPC 基因引物设计与合成 | 第45页 |
| ·PCR 扩增 | 第45-46页 |
| ·PCR 产物与 pEASY-T1 载体连接 | 第46页 |
| ·大肠杆菌的转化 | 第46页 |
| ·阳性克隆检测 | 第46页 |
| ·PEPC 基因 RNAi 载体的构建 | 第46-51页 |
| ·CTE235-3 载体的部分 GUS 的缺失 | 第47-48页 |
| ·将 CTE236-37 载体中插入 PEPC 基因反向序列 | 第48-50页 |
| ·将 CTE237-9 载体中插入 PEPC 基因正向序列 | 第50-51页 |
| ·农杆菌介导 CTE235-3 转化棉花愈伤组织 | 第51页 |
| ·棉花愈伤组织的制备 | 第51页 |
| ·工程菌的制备 | 第51页 |
| ·棉花愈伤组织的遗传转化 | 第51页 |
| 3 结果与分析 | 第51-61页 |
| ·棉花 PEPC 基因的克隆及检测 | 第51-54页 |
| ·棉花 PEPC 基因的 RNAi 载体构建 | 第54-59页 |
| ·工程菌的制备 | 第59-60页 |
| ·棉花愈伤组织的转化 | 第60-61页 |
| 4 讨论 | 第61-62页 |
| 第三章 棉花(+)-δ-杜松烯合成酶基因的克隆与 RNAi 载体构建 | 第62-76页 |
| 1 实验材料 | 第62-63页 |
| ·植物材料 | 第62-63页 |
| ·试剂 | 第63页 |
| ·菌株和载体 | 第63页 |
| ·培养基 | 第63页 |
| 2 方法 | 第63-68页 |
| ·棉花(+)-δ-杜松烯合成酶基因的克隆 | 第63-65页 |
| ·棉花(+)-δ-杜松烯合成酶基因引物设计与合成 | 第63-64页 |
| ·PCR 扩增 | 第64页 |
| ·PCR 产物与 pEASY-T1 载体连接 | 第64页 |
| ·大肠杆菌的转化 | 第64页 |
| ·阳性克隆检测 | 第64-65页 |
| ·棉花(+)-δ-杜松烯合成酶基因 RNAi 载体的构建 | 第65-67页 |
| ·(+)-δ-杜松烯合成酶基因正向、反向序列的 PCR 扩增 | 第65-66页 |
| ·CTE236-37 中插入(+)-δ-杜松烯合成酶基因正向序列 | 第66页 |
| ·CTF579-1 中插入(+)-δ-杜松烯合成酶基因反向序列 | 第66-67页 |
| ·农杆菌介导 CTE235-3 转化棉花愈伤组织 | 第67-68页 |
| ·工程菌的制备 | 第67页 |
| ·棉花愈伤组织的遗传转化 | 第67-68页 |
| 3 结果与分析 | 第68-74页 |
| ·棉花(+)-δ-杜松烯合成酶基因的克隆及检测 | 第68-69页 |
| ·棉花(+)-δ-杜松烯合成酶基因 RNAi 载体的构建 | 第69-73页 |
| ·工程菌的制备 | 第73页 |
| ·棉花下胚轴遗传转化 | 第73-74页 |
| 4 讨论 | 第74-76页 |
| 结论 | 第76-77页 |
| 参考文献 | 第77-90页 |
| 致谢 | 第90页 |
