| 摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-11页 |
| 英文缩略表 | 第11-12页 |
| 第一章 引言 | 第12-26页 |
| ·BVDV病原学 | 第12-13页 |
| ·BVDV流行病学 | 第13-14页 |
| ·传染源 | 第13页 |
| ·传播途径 | 第13页 |
| ·易感动物 | 第13页 |
| ·国外BVDV流行状况 | 第13-14页 |
| ·国内BVDV流行状况 | 第14页 |
| ·BVDV检测方法 | 第14-17页 |
| ·病毒分离 | 第14-15页 |
| ·电镜观察 | 第15页 |
| ·微量血清中和实验 | 第15页 |
| ·酶联免疫吸附试验(ELISA) | 第15-16页 |
| ·分子生物学技术 | 第16-17页 |
| ·BVDV的分子生物学 | 第17-20页 |
| ·5’-UTR | 第17页 |
| ·3’-UTR | 第17页 |
| ·开放阅读框(ORF) | 第17-20页 |
| ·BVDV疫苗研究 | 第20-25页 |
| ·疫苗在BVDV控制中的应用 | 第20-22页 |
| ·BVDV疫苗免疫应答 | 第22-23页 |
| ·BVDV疫苗使用涉及事项 | 第23-25页 |
| ·BVDV疫苗研究的展望 | 第25页 |
| ·研究目的与意义 | 第25-26页 |
| 第二章 国内BVDV E2基因的分子克隆与序列测定 | 第26-36页 |
| 摘要 | 第26页 |
| ·材料 | 第26-27页 |
| ·毒株、生物样品、商品血清 | 第26页 |
| ·细胞系、菌株 | 第26页 |
| ·主要仪器 | 第26页 |
| ·主要试剂 | 第26-27页 |
| ·引物 | 第27页 |
| ·试验方法 | 第27-31页 |
| ·毒株的传代培养 | 第27页 |
| ·样品RNA的提取 | 第27页 |
| ·E2基因的RT-PCR扩增 | 第27-28页 |
| ·PCR扩增产物的回收 | 第28页 |
| ·PCR产物与pGEM-T载体的连接 | 第28-29页 |
| ·DH5 a感受态细胞的制备 | 第29页 |
| ·连接产物的转化 | 第29页 |
| ·单克隆菌落的筛选 | 第29页 |
| ·质粒DNA的提取 | 第29-30页 |
| ·重组质粒的鉴定 | 第30页 |
| ·重组质粒的序列测定 | 第30-31页 |
| ·序列的拼接、筛选以及修正 | 第31页 |
| ·实验结果 | 第31-35页 |
| ·毒株的传代培养 | 第31页 |
| ·E2基因的PCR扩增 | 第31-32页 |
| ·重组质粒的电泳鉴定 | 第32页 |
| ·重组质粒的PCR鉴定 | 第32-33页 |
| ·PCR检测结果以及获得的BVDV E2全长序列 | 第33-35页 |
| ·讨论 | 第35-36页 |
| 第三章 中国BVDV E2全长基因的生物信息学分析 | 第36-55页 |
| 摘要 | 第36页 |
| ·实验方法 | 第36-39页 |
| ·针对BVDV E2区段的系统发育学分析 | 第36-37页 |
| ·针对中国BVDV分离株全长E2区段进行的系统溯源分析(TMRCA) | 第37-38页 |
| ·BVDV E2的同源性分析 | 第38页 |
| ·BVDV E2序列间进化距离分析 | 第38页 |
| ·BVDV E2序列间相似性以及同源重组分析 | 第38页 |
| ·BVDV E2序列间保守/特异性位点分析以及多序列比对 | 第38页 |
| ·BVDV E2推导氨基酸序列间同义/反义突变分析 | 第38页 |
| ·BVDV E2推导氨基酸序列的理化性质分析 | 第38-39页 |
| ·BVDV E2推导氨基酸序列糖基化位点的分析 | 第39页 |
| ·BVDV E2推导氨基酸序列的抗原表位分析 | 第39页 |
| ·实验结果 | 第39-50页 |
| ·针对BVDV E2区段的系统发育学分析 | 第39-44页 |
| ·针对全长E2区段进行的系统溯源分析 | 第44-45页 |
| ·BVDV E2序列间进化距离分析 | 第45页 |
| ·BVDV E2序列间保守/特异性位点分析 | 第45页 |
| ·BVDV E2推导氨基酸序列间同义/反义突变分析 | 第45-47页 |
| ·BVDV E2推导氨基酸序列的理化性质分析 | 第47-49页 |
| ·BVDV E2推导氨基酸序列糖基化位点的分析 | 第49-50页 |
| ·讨论 | 第50-55页 |
| 第四章 BVDV E2区段中和表位的表达与反应原性分析 | 第55-61页 |
| 摘要 | 第55页 |
| ·材料 | 第55-56页 |
| ·表位基因 | 第55页 |
| ·载体、菌株、阳性血清 | 第55页 |
| ·主要仪器 | 第55页 |
| ·主要试剂 | 第55-56页 |
| ·试验方法 | 第56-58页 |
| ·含有表位基因的重组质粒的构建 | 第56-57页 |
| ·目的片段的小量表达 | 第57页 |
| ·目的片段的大量表达 | 第57页 |
| ·重组蛋白的分离纯化 | 第57-58页 |
| ·表位蛋白的ELISA鉴定 | 第58页 |
| ·结果 | 第58-59页 |
| ·重组蛋白的分时段表达 | 第58页 |
| ·目的蛋白的纯化 | 第58-59页 |
| ·表位蛋白的ELISA分析 | 第59页 |
| ·讨论 | 第59-61页 |
| 第五章 全文结论 | 第61-62页 |
| 参考文献 | 第62-70页 |
| 附录 | 第70-83页 |
| 致谢 | 第83-84页 |
| 作者简历 | 第84页 |
