| 摘要 | 第1-7页 |
| Abstract | 第7-18页 |
| 第一章 绪论 | 第18-29页 |
| 第一节 酶和酶抑制剂 | 第18-20页 |
| ·酶的基本概念和特性 | 第18页 |
| ·酶的分类 | 第18-19页 |
| ·酶的抑制剂及其分类 | 第19-20页 |
| 第二节 酶抑制剂药物 | 第20-27页 |
| ·酶抑制剂类药物的来源 | 第21-22页 |
| ·来源于天然化合物 | 第21页 |
| ·来源于化学合成物 | 第21-22页 |
| ·酶抑制剂类药物 | 第22-27页 |
| ·抗心血管疾病类抑制剂 | 第22-24页 |
| ·抗肿瘤类酶抑制剂 | 第24-26页 |
| ·治疗糖尿病类的酶抑制剂 | 第26页 |
| ·抗病毒类酶抑制剂药物 | 第26-27页 |
| ·抗炎症类酶抑制剂药物 | 第27页 |
| ·其它类型的酶抑制剂 | 第27页 |
| 第三节 课题的提出 | 第27-29页 |
| 第二章 GCASE抑制剂的戈谢病分子伴侣机制研究 | 第29-89页 |
| 第一节 课题背景和意义(溶酶体贮积症和戈谢病) | 第29-37页 |
| ·溶酶体贮积症 | 第29-32页 |
| ·糖原贮积疾病 | 第31页 |
| ·粘多糖贮积疾病 | 第31页 |
| ·脂质贮积疾病 | 第31-32页 |
| ·戈谢病的类型 | 第32页 |
| ·戈谢病的治疗方法 | 第32-34页 |
| ·对症治疗 | 第32-33页 |
| ·酶替代疗法 | 第33页 |
| ·底物降低疗法 | 第33-34页 |
| ·GCase与分子伴侣疗法 | 第34-36页 |
| ·分子伴侣疗法的发展 | 第36-37页 |
| 第二节 材料与方法 | 第37-60页 |
| ·实验材料 | 第37-43页 |
| ·细胞及菌株 | 第37-38页 |
| ·基因片段及载体 | 第38页 |
| ·主要试剂 | 第38-40页 |
| ·实验仪器 | 第40页 |
| ·培养基的配制 | 第40-41页 |
| ·核酸电泳相关溶液的配制 | 第41页 |
| ·蛋白电泳相关溶液的配制 | 第41-42页 |
| ·Western blot相关溶液的配制 | 第42页 |
| ·酶活测定相关溶液 | 第42-43页 |
| ·实验方法 | 第43-60页 |
| ·真核表达载体pCDNA3.1/myc-hisA-GCase的构建 | 第43-47页 |
| ·真核表达载体pCDNA3.1/myc-hisA-GCase的的表达、纯化 | 第47-53页 |
| ·化合物对重组GCase抑制作用的测试 | 第53-55页 |
| ·GCase蛋白的脉冲酶解验 | 第55页 |
| ·细胞培养 | 第55-56页 |
| ·化合物对细胞增殖抑制的实验(MTT实验) | 第56-57页 |
| ·化合物对商品化糖苷酶的选择性抑制实验 | 第57页 |
| ·化合物对人皮肤成纤维细胞溶酶体中糖苷酶抑制的实验 | 第57-58页 |
| ·化合物对戈谢病人细胞中GCase酶活的影响实验 | 第58页 |
| ·免疫印迹实验 | 第58-59页 |
| ·免疫荧光双重染色实验 | 第59页 |
| ·化合物11和GCase的Docking实验 | 第59-60页 |
| 第三节 GCase抑制剂对重组GCase的抑制 | 第60-73页 |
| ·小分子化合物的合成 | 第60页 |
| ·重组GCase的表达 | 第60-66页 |
| ·真核表达载体pCDNA3.1/myc-hisA-GCase的构建 | 第61-62页 |
| ·真核表达载体pCDNA3.1/myc-hisA-GCase的瞬时表达 | 第62-64页 |
| ·GCase在细胞的大量表达和纯化 | 第64-66页 |
| ·各化合物对重组GCase混酶的抑制效果 | 第66页 |
| ·各化合物对商品化重组GCase的抑制效果 | 第66-73页 |
| 第四节 GCase抑制剂对商品化的其它糖苷酶的抑制 | 第73-78页 |
| ·各个商品化糖苷酶的酶学特性研究 | 第73-77页 |
| ·不同糖苷酶的特定4-甲基伞形酮荧光底物K_m值的测定 | 第73-75页 |
| ·不同糖苷酶对特定4-甲基伞形酮荧光底物反应时间的摸索 | 第75-77页 |
| ·各个化合物对不同商品化糖苷酶的抑制活性测试 | 第77-78页 |
| 第五节 GCase抑制剂对人细胞溶酶体中糖苷酶的选择性 | 第78-80页 |
| ·各个化合物对人溶酶体中各糖苷酶的抑制活性测试 | 第78-79页 |
| ·各个化合物对人皮肤成纤维细胞的抑制活性 | 第79-80页 |
| 第六节 分子伴侣增强戈谢病人成淋巴细胞中GCase的活性 | 第80-82页 |
| ·各化合物对戈谢病人N370S和L444P细胞中GCase酶活性的影响 | 第80-81页 |
| ·各化合物对戈谢病人N370S细胞中GCase表达量的影响 | 第81-82页 |
| 第七节 化合物能稳定重组GCase(Imiglucerase)的蛋白结构 | 第82-83页 |
| 第八节 化合物11与GCase活性位点结合模式的计算机模拟 | 第83-85页 |
| 第九节 化合物11促进N370S突变体蛋白的成熟和胞内转运 | 第85-87页 |
| 第十节 本章总结 | 第87-89页 |
| 第三章 HDAC抑制剂生物活性和抗肿瘤机制研究 | 第89-129页 |
| 第一节 课题背景 | 第89-103页 |
| ·组蛋白去乙酰化酶及其分类 | 第89-91页 |
| ·组蛋白去乙酰化酶的晶体结构及催化机理 | 第91-93页 |
| ·组蛋白去乙酰化酶与肿瘤的关系 | 第93-94页 |
| ·组蛋白去乙酰化酶抑制剂 | 第94-99页 |
| ·HDAC抑制剂与其他药物联合用药 | 第99-103页 |
| ·HDAC抑制剂和其它转录调节因子 | 第100页 |
| ·HDAC抑制剂与传统的化疗药物 | 第100页 |
| ·HDAC抑制剂与死亡受体配体 | 第100-101页 |
| ·HDAC抑制剂和激酶抑制剂 | 第101页 |
| ·HDAC抑制剂和蛋白酶体降解调节子 | 第101-102页 |
| ·HDAC抑制剂与辐射 | 第102-103页 |
| 第二节 材料与方法 | 第103-107页 |
| ·实验材料 | 第103页 |
| ·实验方法 | 第103-107页 |
| ·化合物对Hela细胞核中HDAC粗酶的抑制 | 第104-106页 |
| ·细胞周期的测定 | 第106页 |
| ·细胞凋亡的测定 | 第106-107页 |
| ·TUNEL染色实验 | 第107页 |
| ·急性毒性试验 | 第107页 |
| ·裸鼠体内移植瘤模型的建立 | 第107页 |
| 第三节 HDAC抑制剂筛选和Z-13抗肿瘤机制研究结果 | 第107-122页 |
| ·HDAC抑制剂的合成 | 第107-108页 |
| ·化合物生物活性测试 | 第108-113页 |
| ·X-系列化合物生物活性测试 | 第109-111页 |
| ·Z-系列化合物生物活性测试 | 第111-113页 |
| ·化合物Z-13的抗肿瘤机制研究 | 第113-122页 |
| ·Z-13对不同肿瘤细胞增殖的抑制 | 第113-115页 |
| ·Z-13对肿瘤细胞中组蛋白乙酰化水平的影响 | 第115-116页 |
| ·Z-13对MDA-MB-231细胞周期影响 | 第116-118页 |
| ·Z-13对MDA-MB-231细胞凋亡的影响 | 第118页 |
| ·Z-13对细胞周期和凋亡相关蛋白表达的影响 | 第118-119页 |
| ·Z-13的急性毒性实验结果 | 第119-120页 |
| ·Z-13对体内肿瘤生长的抑制作用 | 第120-122页 |
| 第四节 SAHA和Taxol联合用药对乳腺癌细胞的影响 | 第122-128页 |
| ·SAHA和Taxol联合作用对不同乳腺癌细胞增殖的影响 | 第122-125页 |
| ·SAHA和Taxol联合作用对细胞周期和凋亡的影响 | 第125页 |
| ·SAHA和Taxol联合作用对细胞周期和凋亡相关蛋白的影响 | 第125-127页 |
| ·SAHA和Taxol联合作用对体内肿瘤生长的影响 | 第127-128页 |
| 第五节 本章总结 | 第128-129页 |
| 第四章 OGA抑制剂生物活性研究 | 第129-148页 |
| 第一节 引言 | 第129-138页 |
| ·O-GlcNAc糖基化的发现 | 第129-130页 |
| ·O-GlcNAc糖基化的特点 | 第130-131页 |
| ·O-GlcNAc糖基化对细胞生理活动的影响 | 第131-132页 |
| ·介导细胞信号转导 | 第131-132页 |
| ·营养感应 | 第132页 |
| ·压力应激 | 第132页 |
| ·O-GlcNAc糖基化与疾病 | 第132-136页 |
| ·糖尿病 | 第133-134页 |
| ·心血管疾病 | 第134页 |
| ·癌症 | 第134-135页 |
| ·神经退行性疾病 | 第135-136页 |
| ·O-GlcNAcase(OGA)蛋白 | 第136-137页 |
| ·O-GlcNAcase(OGA)抑制剂研究进展 | 第137-138页 |
| 第二节 实验方法 | 第138页 |
| 第三节 结果与讨论 | 第138-147页 |
| ·不同亚型OGA蛋白的表达 | 第138-140页 |
| ·不同亚型OGA的酶学特性研究 | 第140-141页 |
| ·烷基咪唑类化合物对OGA生物活性的影响 | 第141-143页 |
| ·烷基咪唑类化合物对fOGA酶活的抑制 | 第141-142页 |
| ·化合物7对细胞中蛋白O-GlcNAc水平的影响 | 第142-143页 |
| ·三唑环类化合物对OGA生物活性的影响 | 第143-147页 |
| ·三唑环类化合物的合成 | 第143-144页 |
| ·三唑环类化合物对fOGA的抑制活性 | 第144-146页 |
| ·三唑环类化合物对nOGA的抑制活性 | 第146-147页 |
| 第四节 本章小结 | 第147-148页 |
| 参考文献 | 第148-164页 |
| 致谢 | 第164-165页 |
| 个人简历及在学期间发表的学术论文与研究成果 | 第165-166页 |
