| 论文创新点 | 第1-9页 |
| 中文摘要 | 第9-11页 |
| Abstract | 第11-14页 |
| 第一章 前言 | 第14-45页 |
| 1 疫苗抗原表达系统 | 第14-24页 |
| ·疫苗抗原表达系统比较 | 第14-16页 |
| ·毕赤酵母表达系统 | 第16-24页 |
| 2 EV71病毒研究现状 | 第24-32页 |
| ·EV71病毒 | 第24-26页 |
| ·EV71与手足口病 | 第26-27页 |
| ·EV71病毒预防策略 | 第27-32页 |
| 3 EBV病毒研究现状 | 第32-45页 |
| ·EBV病毒 | 第32-37页 |
| ·EBV与肿瘤发生 | 第37-39页 |
| ·EBV及其相关疾病的防治方法 | 第39-45页 |
| 第二章 重组VP1蛋白诱导抗病毒免疫反应 | 第45-79页 |
| 1 材料与方法 | 第45-58页 |
| ·实验材料 | 第45页 |
| ·溶液配制 | 第45-46页 |
| ·VP1真核表达载体的构建 | 第46-48页 |
| ·重组VP1表达菌株的构建与筛选 | 第48-50页 |
| ·重组蛋白的诱导表达及纯化 | 第50页 |
| ·BCA蛋白质定量分析 | 第50页 |
| ·SDS-PAGE与Western blot检测 | 第50-51页 |
| ·动物实验 | 第51页 |
| ·小鼠免疫血清中IgG和IgM水平检测 | 第51-52页 |
| ·小鼠脾脏淋巴细胞增殖反应检测 | 第52-53页 |
| ·小鼠脾脏细胞因子检测 | 第53-56页 |
| ·外周血单核细胞的分离 | 第56页 |
| ·细胞计数 | 第56-57页 |
| ·流式细胞仪检测 | 第57页 |
| ·EV71病毒培养 | 第57页 |
| ·蔗糖密度梯度离心法分离纯化EV71病毒 | 第57页 |
| ·病毒中和实验 | 第57页 |
| ·小鼠被动保护实验 | 第57-58页 |
| ·统计学分析 | 第58页 |
| 2 实验结果 | 第58-76页 |
| ·VP1密码子优化 | 第58-60页 |
| ·重组VP1的真核表达及纯化 | 第60-65页 |
| ·VP1诱导小鼠体液免疫反应 | 第65-66页 |
| ·病毒中和实验 | 第66-67页 |
| ·被动保护实验 | 第67-68页 |
| ·VP1刺激小鼠脾脏淋巴细胞增殖 | 第68-69页 |
| ·VP1刺激细胞因子水平的变化 | 第69-74页 |
| ·VP1促进小鼠脾脏和外周血T细胞的增多 | 第74-76页 |
| 3 讨论 | 第76-78页 |
| ·重组VP1在毕赤酵母系统中高效表达 | 第76页 |
| ·重组VP1诱导小鼠体液与细胞免疫应答 | 第76-77页 |
| ·重组VP1作为EV71候选疫苗的应用前景 | 第77-78页 |
| 4 本章小结 | 第78-79页 |
| 第三章 毕赤酵母表达的EBV核抗原EBNA1的免疫原性研究 | 第79-107页 |
| 1 实验方法 | 第79-87页 |
| ·序列优化与合成 | 第79页 |
| ·真核表达载体的构建及鉴定 | 第79-80页 |
| ·重组表达菌株的构建与筛选 | 第80页 |
| ·重组E1△GA的真核表达和纯化 | 第80-81页 |
| ·BCA蛋白定量法 | 第81页 |
| ·细胞培养 | 第81页 |
| ·小鼠免疫实验 | 第81-82页 |
| ·ELISA检测小鼠免疫血清中IgG和IgM水平 | 第82页 |
| ·小鼠脾脏淋巴细胞的分离与培养 | 第82页 |
| ·淋巴细胞增殖实验 | 第82-83页 |
| ·免疫小鼠脾脏细胞因子检测 | 第83-85页 |
| ·外周血单核细胞的分离 | 第85-86页 |
| ·细胞计数 | 第86页 |
| ·流式细胞仪检测淋巴细胞亚群比例 | 第86页 |
| ·统计学分析 | 第86页 |
| ·序列提交 | 第86-87页 |
| 2 实验结果 | 第87-104页 |
| ·E1AGA序列优化 | 第87-88页 |
| ·真核表达载体的构建与鉴定 | 第88-89页 |
| ·重组E1△GA的真核表达 | 第89-92页 |
| ·重组E1△GA的大量表达及纯化 | 第92-94页 |
| ·重组E1△GA诱导小鼠体液免疫反应 | 第94-96页 |
| ·E1△GA刺激小鼠脾脏淋巴细胞增殖 | 第96页 |
| ·E1△GA对脾脏细胞因子水平的影响 | 第96-101页 |
| ·E1△GA促进小鼠脾脏和外周血中T细胞的增多 | 第101-104页 |
| 3 讨论 | 第104-106页 |
| ·在真核系统中成功大量表达E1△GA蛋白 | 第104-105页 |
| ·密码子优化能够提高外源蛋白表达水平 | 第105页 |
| ·重组E1△GA蛋白的免疫原性研究 | 第105-106页 |
| ·重组E1△GA作为EBV疫苗的应用价值 | 第106页 |
| 4 本章小结 | 第106-107页 |
| 第四章 EBV包膜糖蛋白gp350在毕赤酵母中的表达 | 第107-116页 |
| 1 实验方法 | 第107-109页 |
| ·EBV包膜糖蛋白gp350序列合成 | 第107页 |
| ·真核表达载体pPICZαA-gp350的构建 | 第107-108页 |
| ·重组表达载体的鉴定 | 第108页 |
| ·重组gp350表达菌株的构建及鉴定 | 第108页 |
| ·真核重组载体的诱导表达 | 第108-109页 |
| ·SDS-PAGE与Western blot检测 | 第109页 |
| 2 实验结果 | 第109-115页 |
| ·gp350晶体结构与序列优化 | 第109-111页 |
| ·重组表达载体的构建 | 第111-113页 |
| ·重组gp350的诱导表达 | 第113-115页 |
| 3 讨论 | 第115-116页 |
| 参考文献 | 第116-137页 |
| 攻博期间发表的科研成果 | 第137-138页 |
| 致谢 | 第138-139页 |