| 摘要 | 第1-9页 |
| ABSTRACT | 第9-15页 |
| 第一章 绪论 | 第15-30页 |
| ·蛋白质内含子的发现 | 第15页 |
| ·蛋白质内含子的分类 | 第15-17页 |
| ·标准蛋白质内含子 | 第16页 |
| ·微小蛋白质内含子 | 第16页 |
| ·断裂蛋白质内含子 | 第16-17页 |
| ·蛋白质内含子的结构特征 | 第17页 |
| ·蛋白质内含子的自我剪接机理及断裂机制 | 第17-20页 |
| ·蛋白质内含子的应用 | 第20-26页 |
| ·自我断裂标签 | 第20-21页 |
| ·介导毒素蛋白的制备 | 第21-22页 |
| ·蛋白连接 | 第22-23页 |
| ·介导环肽的制备 | 第23-24页 |
| ·基因治疗 | 第24页 |
| ·用于结构和功能的研究 | 第24-25页 |
| ·生物传感器 | 第25-26页 |
| ·总结 | 第26-27页 |
| 参考文献 | 第27-30页 |
| 第二章 材料与方法 | 第30-40页 |
| ·实验材料 | 第30-35页 |
| ·室菌株 | 第30页 |
| ·实验试剂 | 第30-31页 |
| ·培养基和常用试剂的配制 | 第31-35页 |
| ·实验技术 | 第35-40页 |
| ·感受态制备 | 第35页 |
| ·凝胶回收 | 第35-36页 |
| ·质粒提取 | 第36页 |
| ·蛋白变性凝胶电泳(SDS-PAGE) | 第36-37页 |
| ·基因克隆 | 第37-38页 |
| ·融合蛋白亲和纯化 | 第38-40页 |
| 第三章 严谨型控制的基于断裂蛋白质内含子双ELP系统 | 第40-53页 |
| ·引言 | 第40-41页 |
| ·材料与方法 | 第41-43页 |
| ·克隆构建 | 第41-42页 |
| ·蛋白表达与纯化 | 第42页 |
| ·蛋白活性检与分析 | 第42-43页 |
| ·结果 | 第43-47页 |
| ·标准两步法纯化 | 第43-45页 |
| ·一步法纯化 | 第45页 |
| ·蛋白活性测试 | 第45-47页 |
| ·断裂蛋白质内含子系统在体内的稳定性 | 第47页 |
| ·讨论 | 第47-51页 |
| 参考文献 | 第51-53页 |
| 第四章 小肽控制的蛋白质内含子的非层析自我断裂标签 | 第53-63页 |
| ·引言 | 第53-54页 |
| ·材料与方法 | 第54-55页 |
| ·克隆构建 | 第54页 |
| ·蛋白表达与纯化 | 第54-55页 |
| ·蛋白活性与浓度测试 | 第55页 |
| ·结果 | 第55-58页 |
| ·系统构建 | 第55-56页 |
| ·系统优化 | 第56-58页 |
| ·讨论 | 第58-61页 |
| 参考文献 | 第61-63页 |
| 第五章 利用Zn~(2+)控制蛋白质内含子的断裂活性 | 第63-75页 |
| ·引言 | 第63-64页 |
| ·材料与方法 | 第64-66页 |
| ·克隆构建 | 第64页 |
| ·蛋白表达 | 第64-65页 |
| ·突变体对Zn~(2+)的敏感度测试 | 第65页 |
| ·数据分析 | 第65-66页 |
| ·结果 | 第66-71页 |
| ·讨论 | 第71-73页 |
| 参考文献 | 第73-75页 |
| 第六章 新型的温度敏感型C端断裂蛋白质内含子 | 第75-94页 |
| ·引言 | 第75-76页 |
| ·材料与方法 | 第76-78页 |
| ·克隆构建 | 第76-77页 |
| ·蛋白表达与纯化 | 第77页 |
| ·蛋白质质谱鉴定 | 第77-78页 |
| ·结果 | 第78-89页 |
| ·突变库的筛选 | 第78-79页 |
| ·I~A与I~G突变体的断裂动力学比较 | 第79-86页 |
| ·基于I~G突变的自我断裂标签用于蛋白质纯化 | 第86-87页 |
| ·I~G突变蛋白质内含子介导的环化应用 | 第87-89页 |
| ·讨论 | 第89-92页 |
| 参考文献 | 第92-94页 |
| 第七章 利用细菌传感器系统检测TRβ突变体以及其突变对配体结合的影响 | 第94-113页 |
| ·引言 | 第94-95页 |
| ·材料与方法 | 第95-98页 |
| ·材料来源 | 第95-96页 |
| ·克隆构建 | 第96-97页 |
| ·细菌传感器的培养以及生长表现型 | 第97页 |
| ·数据分析 | 第97-98页 |
| ·结果 | 第98-104页 |
| ·兴奋剂检测 | 第99-102页 |
| ·拮抗剂测试 | 第102-104页 |
| ·讨论 | 第104-109页 |
| 参考文献 | 第109-113页 |
| 第八章 总结与展望 | 第113-117页 |
| ·总结 | 第113-114页 |
| ·展望 | 第114-117页 |
| 博士期间发表论文和参加科研情况说明 | 第117-118页 |
| 致谢 | 第118-120页 |
| 符号说明 | 第120-121页 |
