| 中文摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-10页 |
| 文献综述 | 第10-18页 |
| 1 草莓镶脉病毒 | 第10-12页 |
| ·草莓镶脉病毒分布及危害 | 第10页 |
| ·草莓镶脉病毒侵染寄主后的症状 | 第10页 |
| ·草莓镶脉病毒的基因组结构 | 第10-11页 |
| ·草莓镶脉病毒编码的蛋白及功能 | 第11-12页 |
| ·草莓镶脉病毒的寄主及传播途径 | 第12页 |
| 2 草莓镶脉病毒侵染性克隆的构建 | 第12-14页 |
| ·病毒侵染性克隆构建的意义 | 第12-13页 |
| ·病毒侵染性克隆构建的种类 | 第13-14页 |
| ·病毒侵染性克隆接种方法 | 第14页 |
| 3 基因的原核表达与抗血清制备 | 第14-18页 |
| ·原核表达系统 | 第15-16页 |
| ·蛋白纯化 | 第16页 |
| ·多克隆抗体 | 第16-18页 |
| 引言 | 第18-19页 |
| 材料与方法 | 第19-31页 |
| 1 试验材料 | 第19页 |
| ·植物材料、载体和菌种 | 第19页 |
| ·生物试剂 | 第19页 |
| ·常用缓冲溶液和培养基 | 第19页 |
| ·抗生素 | 第19页 |
| ·仪器设备 | 第19页 |
| 2 试验方法 | 第19-31页 |
| ·植物总 DNA 的提取 | 第19-20页 |
| ·植物总 RNA 的提取 | 第20页 |
| ·提 RNA 的准备工作 | 第20页 |
| ·Trizol 抽提液提取总 RNA 方法 | 第20页 |
| ·cDNA 的合成 | 第20-21页 |
| ·PCR 扩增 | 第21页 |
| ·DNA 的克隆技术 | 第21-24页 |
| ·PCR 产物回收和纯化 | 第21-22页 |
| ·PCR 产物的连接 | 第22页 |
| ·载体去磷酸化 | 第22页 |
| ·感受态细胞的制备 | 第22-23页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的少量制备（CaCl2法） | 第22-23页 |
| ·农杆菌感受态细胞的少量制备 | 第23页 |
| ·连接产物的转化 | 第23-24页 |
| ·连接产物转化大肠杆菌 | 第23页 |
| ·连接产物转化农杆菌 | 第23-24页 |
| ·阳性克隆的 PCR 鉴定 | 第24页 |
| ·质粒提取 | 第24页 |
| ·重组质粒的鉴定 | 第24-25页 |
| ·草莓镶脉病毒侵染性克隆构建策略 | 第25-29页 |
| ·重组载体 pBin-0.5SVBV 的构建 | 第25页 |
| ·重组载体 pBin-1.5SVBV 的构建 | 第25-27页 |
| ·SVBV 侵染性克隆的验证 | 第27-28页 |
| ·SVBV 侵染性克隆转化农杆菌 | 第28页 |
| ·侵染性克隆菌液浸润本氏烟叶片 | 第28页 |
| ·基因枪轰击 | 第28-29页 |
| ·病毒基因的 PCR 检测 | 第29页 |
| ·草莓镶脉病毒 ORF Ⅵ 基因的原核表达及抗血清的制备 | 第29-31页 |
| ·SVBV ORF Ⅵ 基因的扩增 | 第29页 |
| ·重组原核表达载体构建及验证 | 第29页 |
| ·SVBV ORF Ⅵ 基因的表达和 P6 蛋白的纯化 | 第29-30页 |
| ·重组蛋白检测 | 第30页 |
| ·重组蛋白抗血清制备及效价测定 | 第30页 |
| ·SDS-PAGE 和 Western Blot 分析 | 第30页 |
| ·ELISA 检测 ORF Ⅵ 基因及突变体在本氏烟中的表达 | 第30-31页 |
| 结果与分析 | 第31-39页 |
| 1 草莓镶脉病毒侵染性克隆构建 | 第31-35页 |
| ·重组质粒 pBin-0.5 SVBV 的验证 | 第31-32页 |
| ·重组质粒 pBin-1.5 SVBV 的验证 | 第32-33页 |
| ·SVBV 侵染性克隆转化农杆菌 | 第33页 |
| ·基因枪轰击和瞬时浸润接种后的症状观察 | 第33-34页 |
| ·侵染系统叶 SVBV 的 PCR 检测 | 第34-35页 |
| 2 草莓镶脉病毒 ORF Ⅵ 基因原核表达及抗血清的制备 | 第35-39页 |
| ·SVBV ORF Ⅵ 基因的克隆 | 第35页 |
| ·重组原核表达载体构建及酶切验证 | 第35-36页 |
| ·SVBV ORF Ⅵ 基因的表达及 P6 蛋白的纯化 | 第36-37页 |
| ·重组蛋白抗血清的制备及效价测定 | 第37页 |
| ·抗血清的制备 | 第37页 |
| ·Western Blot 分析 | 第37页 |
| ·ELISA 检测 ORF Ⅵ 基因及突变体在本氏烟中的表达 | 第37-39页 |
| 讨论 | 第39-43页 |
| 1 SVBV 侵染性克隆构建 | 第39-42页 |
| ·影响病毒侵染性克隆构建的因素 | 第39-42页 |
| ·SVBV 全长的获得 | 第39-40页 |
| ·pBin-1.5SVBV 的构建 | 第40页 |
| ·SVBV 侵染性克隆的接种方法 | 第40-41页 |
| ·载体的去磷酸化 | 第41-42页 |
| 2 SVBV ORF Ⅵ 基因原核表达和抗血清制备 | 第42-43页 |
| 结论 | 第43-44页 |
| 参考文献 | 第44-49页 |
| 附录 A：常用缓冲液及培养基配方法 | 第49-54页 |
| 附录 B：常用的抗生素和激素及使用浓度 | 第54页 |
| 附录 C：常用化学试剂、分子生物学试剂及仪器 | 第54-56页 |
| 附录 D：本文所用的重要缩写词及中文对照 | 第56-57页 |
| 致谢 | 第57-58页 |
| 作者简介及发表文章 | 第58页 |
