| 摘要 | 第1-8页 |
| Abstract | 第8-11页 |
| 縮略词(Abbreviation) | 第11-12页 |
| 第一章 文献综述 | 第12-18页 |
| ·胸膜肺炎放线杆菌概述 | 第12-15页 |
| ·病原学 | 第12页 |
| ·流行病学 | 第12-13页 |
| ·猪传染性胸膜肺炎的致病机理 | 第13页 |
| ·胸膜肺炎放线杆菌毒力因子研究进展 | 第13-15页 |
| ·双组份调控系统 | 第15-18页 |
| ·双组份调控系统概述 | 第15页 |
| ·胸膜肺炎放线杆菌TCS研究现状 | 第15-16页 |
| ·CpxA/R双组份调控系统研究现状 | 第16-18页 |
| 第二章 研究目的与意义 | 第18-19页 |
| 第三章 材料与方法 | 第19-39页 |
| ·实验材料 | 第19-25页 |
| ·菌种、质粒和培养条件 | 第19-21页 |
| ·各种酶类和试剂 | 第21-22页 |
| ·培养基以及抗生素的配制 | 第22页 |
| ·主要溶液的配制 | 第22-25页 |
| ·实验方法 | 第25-39页 |
| ·胸膜肺炎放线杆菌基因组的提取 | 第25页 |
| ·PCR产物或酶切产物的回收与纯化 | 第25-26页 |
| ·连接产物的转化 | 第26页 |
| ·质粒的小量制备 | 第26-27页 |
| ·质粒的大量制备(碱裂解法) | 第27-28页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的制备(氯化钙法) | 第28页 |
| ·胸膜肺炎放线杆菌电转化 | 第28-29页 |
| ·Southern blotting | 第29-30页 |
| ·RNA的抽提 | 第30-31页 |
| ·SLW01菌株中CpxA、CpxR基因上下游同源臂的扩增与鉴定 | 第31-32页 |
| ·重组转移质粒pEM-CpxA/R的构建 | 第32-33页 |
| ·突变株△CpxA/R的构建 | 第33-34页 |
| ·△CpxA/R互补菌株C△CpxA/R的构建与鉴定 | 第34-35页 |
| ·双基因缺失突变株△CpxA/R与互补菌株C△CpxA/R的生物学特性分析 | 第35-36页 |
| ·实时荧光定量差异基因的筛选 | 第36-38页 |
| ·反应调节蛋白CpxR的表达纯化 | 第38页 |
| ·SDS-PAGE蛋白凝胶电泳 | 第38-39页 |
| 第四章 结果与分析 | 第39-53页 |
| ·双组份调控系统CPXA/R基因结构分析 | 第39页 |
| ·CPXAR双基因上下游同源臂的扩增 | 第39-40页 |
| ·重组转移自杀性质粒PEM-CPXA/R的构建与鉴定 | 第40-41页 |
| ·双基因缺失突变株△CPXA/R的筛选和PCR鉴定 | 第41-42页 |
| ·△CPXA/R双基因缺失突变株的测序鉴定和SOUTHERN BLOT鉴定 | 第42-43页 |
| ·测序鉴定 | 第42页 |
| ·△CpxA/R双基因缺失突变株的Southern blot鉴定 | 第42-43页 |
| ·双基因缺失突变株△CPXA/R的遗传稳定性分析 | 第43-44页 |
| ·△CPXA/R互补菌株CACPXA/R的构建与鉴定 | 第44-45页 |
| ·双基因缺失突变株△CPXA/R的生长特性分析 | 第45-46页 |
| ·双基因缺失突变株△CPXA/R的溶血活性分析 | 第46-47页 |
| ·双基因缺失突变株△CPXA/R的小鼠致病力分析 | 第47页 |
| ·细菌透射电镜 | 第47-48页 |
| ·细胞吞噬试验 | 第48-49页 |
| ·细胞黏附试验 | 第49-50页 |
| ·细胞侵入试验 | 第50-51页 |
| ·荧光定量PCR | 第51-52页 |
| ·反应调控蛋白CPXR的表达 | 第52-53页 |
| 第五章 讨论 | 第53-55页 |
| ·两步单交换法构建缺失突变株 | 第53页 |
| ·APP中CPXA/R双组份调控系统可能的功能 | 第53-54页 |
| ·后续展望 | 第54-55页 |
| 第六章 结论 | 第55-56页 |
| 参考文献 | 第56-61页 |
| 致谢 | 第61-62页 |
| 附表：11个被筛选基因QRT-PCR差异表达情况 | 第62-63页 |
