| 摘要 | 第1-8页 |
| ABSTRACT | 第8-16页 |
| 主要縮略词简表 | 第16-17页 |
| 1 前言 | 第17-21页 |
| 2 材料与方法 | 第21-53页 |
| ·材料 | 第21-30页 |
| ·细胞系和组织样本 | 第21-22页 |
| ·菌株和质粒载体 | 第22页 |
| ·试剂 | 第22-29页 |
| ·主要仪器 | 第29-30页 |
| ·方法 | 第30-53页 |
| ·生物信息学分析 | 第30页 |
| ·基因组DNA的提取 | 第30-31页 |
| ·胶回收(按试剂盒说明书步骤进行) | 第31-32页 |
| ·转化反应 | 第32-33页 |
| ·载体的构建 | 第33-35页 |
| ·质粒、siRNA转染目的细胞 | 第35页 |
| ·慢病毒转染目的细胞 | 第35-36页 |
| ·核心启动子检测 | 第36-37页 |
| ·甲基转移酶SssⅠ处理DNA | 第37页 |
| ·凝胶迁移率实验(EMSA) | 第37-38页 |
| ·染色质免疫共沉淀实验ChIP检测 | 第38-41页 |
| ·基因组DNA的亚硫酸氢钠修饰 | 第41-42页 |
| ·亚硫酸氢钠测序法(Bisulfite Genomic Sequencing,BGS) | 第42页 |
| ·甲基化特异性PCR(Methylated specific PCR,MSP) | 第42-43页 |
| ·组织及细胞RNA制备及cDNA的转录 | 第43-45页 |
| ·差异RT-PCR | 第45-46页 |
| ·细胞蛋白制备 | 第46-47页 |
| ·Western blot检测 | 第47页 |
| ·免疫荧光实验 | 第47-48页 |
| ·流式细胞术检测基因蛋白表达水平 | 第48页 |
| ·肿瘤细胞生长实验 | 第48-49页 |
| ·软琼脂集落生成实验 | 第49页 |
| ·MTT法检测细胞活力 | 第49-50页 |
| ·MTT法检测药物对细胞毒性的IC50 | 第50页 |
| ·LDH法测量细胞毒性 | 第50-51页 |
| ·TUNEL技术检测细胞凋亡 | 第51页 |
| ·Hoechst 33258染色检测细胞凋亡 | 第51-52页 |
| ·乳酸生成实验 | 第52页 |
| ·耗氧量检测 | 第52页 |
| ·ROS检测 | 第52页 |
| ·统计学分析 | 第52-53页 |
| 3 结果 | 第53-95页 |
| ·NOR1的转录调控规律及氧化应激敏感性表达 | 第53-74页 |
| ·NOR1基因启动子的定位及克隆 | 第53-59页 |
| ·NOR1基因在鼻咽癌中甲基化沉默 | 第59-66页 |
| ·NOR1基因启动子区域的转录调控机制及氧化应激敏感性表达 | 第66-74页 |
| ·NOR1对鼻咽癌生物学行为的影响 | 第74-81页 |
| ·NOR1基因抑制恶性肿瘤细胞生长和增殖 | 第74-75页 |
| ·NOR1基因抑制恶性肿瘤细胞自噬分子表达和自噬行为 | 第75-78页 |
| ·NOR1表达抑制肿瘤细胞的能量代谢 | 第78-81页 |
| ·NOR1基因对氧化应激状态下细胞自噬/凋亡分子开关的调节 | 第81-95页 |
| ·NOR1增加氧化应激状态下细胞毒性,降低细胞活力 | 第81页 |
| ·NOR1通过抑制氧化应激诱导的细胞自噬,促进细胞凋亡 | 第81-91页 |
| ·NOR1增加化肿瘤细胞的化疗敏感性 | 第91-95页 |
| 4 讨论 | 第95-107页 |
| ·抑癌基因NOR1是一个在鼻咽癌中甲基化沉默的氧化应激反应性蛋白 | 第95-98页 |
| ·抑癌基因NOR1启动子在鼻咽癌中甲基化沉默 | 第95-96页 |
| ·抑癌基因NOR1是一个氧化应激反应性蛋白,功能与氧化应激相关 | 第96-98页 |
| ·抑癌基因NOR1的生物学功能 | 第98-101页 |
| ·抑癌基因NOR1同时抑制肿瘤生长和自噬 | 第98-100页 |
| ·抑癌基因NOR1通过抑制自噬来抑制肿瘤细胞能量代谢,发挥抑癌的作用 | 第100-101页 |
| ·抑癌基因NOR1通过抑制细胞自噬,促进氧化应激诱导的肿瘤细胞凋亡 | 第101-103页 |
| ·抑癌基因NOR1通过线粒体凋亡途径促进氧化应激诱导的肿瘤细胞凋亡 | 第103-104页 |
| ·抑癌基因NOR1与顺铂协同抑制自噬,增强鼻咽癌细胞对顺铂的化疗敏感性 | 第104-107页 |
| 结论 | 第107-108页 |
| 参考文献 | 第108-117页 |
| 综述 | 第117-128页 |
| 参考文献 | 第124-128页 |
| 攻读博士学位期间主要研究成果 | 第128-129页 |
| 致谢 | 第129页 |
