| 摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-10页 |
| 英文缩略词表 | 第10-11页 |
| 第1章 绪论 | 第11-19页 |
| ·乳腺生物反应器 | 第11-12页 |
| ·转基因技术 | 第12-15页 |
| ·核显微注射法 | 第13页 |
| ·精子介导的基因转移 | 第13页 |
| ·核移植转基因 | 第13-15页 |
| ·人溶菌酶的研究现状 | 第15-19页 |
| ·人溶菌酶的概述 | 第15页 |
| ·人溶菌酶的来源 | 第15-16页 |
| ·人溶菌酶的应用 | 第16-19页 |
| 第2章 牛aS1-casein-hLYZ杂合基因座抓捕载体的构建 | 第19-47页 |
| ·实验材料 | 第19-22页 |
| ·菌株、载体、感受态细胞及引物 | 第19-20页 |
| ·试剂盒、工具酶等 | 第20页 |
| ·培养基、抗生素和相关试剂 | 第20-21页 |
| ·实验仪器 | 第21-22页 |
| ·人工合成引物 | 第22页 |
| ·实验方法 | 第22-25页 |
| ·质粒制备 | 第22-23页 |
| ·限制性内切酶酶切 | 第23页 |
| ·DNA片段凝胶回收 | 第23-24页 |
| ·DNA片段纯化(TAKARA试剂盒) | 第24-25页 |
| ·线性化载体与插入片段的连接反应 | 第25页 |
| ·实验步骤 | 第25-36页 |
| ·基因抓捕载体的制备 | 第25-29页 |
| ·连续三步基因抓捕 | 第29-36页 |
| ·载体构建实验结果 | 第36-41页 |
| ·在骨架载体pBR322上插入PGK-neomycin(简称Neo) | 第36-38页 |
| ·在载体pBR322-XBN-P-neo上插入Kana | 第38-40页 |
| ·基因抓捕载体pBR322-gaprepair的鉴定 | 第40-41页 |
| ·三步连续基因抓捕结果 | 第41-45页 |
| ·牛αS1-casein的3’端调控序列的抓捕 | 第41-42页 |
| ·hLYZ基因组编码序列的抓捕 | 第42-43页 |
| ·牛αS1-casein的5’端调控序列的抓捕 | 第43-44页 |
| ·测序 | 第44-45页 |
| ·讨论 | 第45-47页 |
| 第3章 牛αS1-casein-hLYZ杂合基因座的表达鉴定 | 第47-67页 |
| ·材料 | 第47-49页 |
| ·实验动物 | 第47-48页 |
| ·实验仪器 | 第48页 |
| ·试剂与耗材 | 第48页 |
| ·试剂配制 | 第48-49页 |
| ·方法 | 第49-60页 |
| ·显微注射DNA的制备 | 第49-50页 |
| ·转基因鼠的制备 | 第50-51页 |
| ·受精卵显微注射 | 第51-52页 |
| ·小鼠基因组DNA的制备 | 第52页 |
| ·转基因小鼠的PCR鉴定 | 第52-53页 |
| ·转基因小鼠Southern-Blot分析 | 第53-56页 |
| ·转基因小鼠乳汁中hLYZ表达的鉴定 | 第56-59页 |
| ·转基因小鼠乳汁中人hLYZ的浓度测定(ELISA法) | 第59-60页 |
| ·实验结果 | 第60-64页 |
| ·“牛αS1-casein—hLYZ”杂合基因座载体的显微注射结果 | 第60页 |
| ·转基因小鼠PCR鉴定 | 第60-61页 |
| ·转基因小鼠Southern-Blot鉴定 | 第61-62页 |
| ·转基因小鼠乳汁中人LYZ的SDS-PAGE考马斯亮蓝染色结果 | 第62页 |
| ·转基因小鼠乳汁中人LYZ的Western Blot分析 | 第62-63页 |
| ·转基因小鼠乳汁中人LYZ的含量测定(ELISA) | 第63-64页 |
| ·讨论 | 第64-67页 |
| 结论 | 第67-69页 |
| 参考文献 | 第69-73页 |
| 致谢 | 第73-75页 |
| 攻读硕士学位期间的研究成果 | 第75页 |
