| 中文摘要 | 第1-9页 |
| Abstract | 第9-10页 |
| 1 引言 | 第10-23页 |
| ·生防细菌的生物防治机制 | 第10-15页 |
| ·生防细菌中芽孢杆菌的研究现状 | 第10-12页 |
| ·几种抗菌活性物质简介 | 第12-15页 |
| ·生防细菌的生物膜形成、芽孢形成、抗菌活性及运动性之间的关系 | 第15-21页 |
| ·生物膜简介 | 第15-16页 |
| ·芽孢杆菌生物膜形成与芽孢形成的关系 | 第16-17页 |
| ·芽孢杆菌生物膜形成与抗菌活性物质的产生的关系 | 第17-19页 |
| ·芽孢杆菌生物膜形成与运动性的关系 | 第19-21页 |
| ·基因打靶技术 | 第21-22页 |
| ·同源重组技术 | 第21-22页 |
| ·结合了反向筛选标记的两步交换同源重组 | 第22页 |
| ·本研究的目的和意义 | 第22-23页 |
| 2 材料与方法 | 第23-36页 |
| ·材料 | 第23-25页 |
| ·菌株与质粒 | 第23页 |
| ·溶液及培养基配制 | 第23-24页 |
| ·培养基配制 | 第23页 |
| ·溶液配制 | 第23-24页 |
| ·仪器与试剂 | 第24-25页 |
| ·主要仪器 | 第24页 |
| ·生化及分子生物学试剂 | 第24-25页 |
| ·试验方法 | 第25-36页 |
| ·B.amyloliquefaciens PEBA20抗菌活性相关基因检测 | 第25-30页 |
| ·基因组DNA的提取(CTAB/NaCl法) | 第25页 |
| ·抗菌活性相关基因的PCR扩增 | 第25-27页 |
| ·琼脂糖凝胶电泳检测PCR产物 | 第27页 |
| ·PCR产物回收 | 第27-28页 |
| ·PCR回收产物和pMD18-T克隆载体的连接 | 第28页 |
| ·E.coli DH5α感受态的制备(采用CaCl_2法) | 第28-29页 |
| ·连接产物转化E.coli DH5α | 第29页 |
| ·菌落PCR检测 | 第29页 |
| ·质粒提取 | 第29-30页 |
| ·序列测定 | 第30页 |
| ·序列分析 | 第30页 |
| ·spoOA基因突变株的初步构建 | 第30-36页 |
| ·spoOA基因突变株构建方法设计 | 第30-31页 |
| ·突变引物设计 | 第31-32页 |
| ·spoOA同源前、后臂及spoOA基因的PCR扩增 | 第32-33页 |
| ·同源前臂spoOAF与同源后臂spoOAR的克隆 | 第33页 |
| ·spoOAF与spoOAR的单酶切 | 第33页 |
| ·spoOAF与spoOAR酶切产物的连接 | 第33页 |
| ·spoOAF-spoOAR及spoOA基因与pMD18-T连接 | 第33-34页 |
| ·spoOAF-spoOAR-pMD18-T和spoOA-pMD18-T的转化及验证 | 第34页 |
| ·自杀质粒pWM91的提取 | 第34页 |
| ·spoOAF-spoOAR重组质粒与pWM91质粒的BamH Ⅰ酶切 | 第34页 |
| ·酶切产物的乙醇沉淀 | 第34-35页 |
| ·乙醇沉淀产物Not Ⅰ酶切 | 第35页 |
| ·spoOAF-spoOAR重组质粒与pWM91质粒的双酶切产物的连接 | 第35页 |
| ·spoOAF-spoOAR-pWM91转化E.coli S17-1并验证 | 第35-36页 |
| ·序列分析 | 第36页 |
| 3 结果与分析 | 第36-49页 |
| ·PEBA20抗菌活性相关基因的检测 | 第36-40页 |
| ·基因组DNA的提取 | 第36页 |
| ·抗菌活性相关基因的PCR扩增 | 第36-37页 |
| ·抗菌活性相关基因的克隆 | 第37-38页 |
| ·抗菌活性相关基因的序列分析 | 第38-40页 |
| ·spoOA基因突变株的初步构建 | 第40-49页 |
| ·spoOA基因的生物信息学分析 | 第40-43页 |
| ·spoOA基因的克隆 | 第40页 |
| ·spoOA基因的序列分析 | 第40-43页 |
| ·同源前臂spoOAF与同源后臂spoOAR的PCR扩增 | 第43-44页 |
| ·同源前臂spoOAF与同源后臂spoOAR的克隆 | 第44页 |
| ·spoOAF-spoOAR的构建 | 第44-45页 |
| ·自杀质粒pWM91的提取 | 第45-46页 |
| ·spoOAF-spoOAR-pWM91的构建 | 第46页 |
| ·spoOAF-spoOAR重组质粒与pWM91质粒的BamH Ⅰ与Not Ⅰ双酶切 | 第46页 |
| ·spoOAF-spoOAR与pWM91质粒双酶切产物的连接及转化E.coli S17-1 | 第46页 |
| ·PEBA20的spoOA基因缺失突变基因序列分析 | 第46-49页 |
| 4 讨论 | 第49-52页 |
| ·PEBA20抗菌活性相关基因检测 | 第49-50页 |
| ·spoOA基因突变株的初步构建 | 第50-52页 |
| ·spoOA基因对多种细胞进程的作用 | 第50-51页 |
| ·spoOA基因突变株的构建 | 第51-52页 |
| 5 结论 | 第52-53页 |
| 参考文献 | 第53-65页 |
| 附录 | 第65-66页 |
| 致谢 | 第66-67页 |
| 攻读学位期间发表论文情况 | 第67页 |
