| 摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-15页 |
| 第1章 绪论 | 第15-38页 |
| 1 文献综述 | 第15-35页 |
| ·茶氨酸的研究进展 | 第15-30页 |
| ·茶氨酸的概述 | 第15-16页 |
| ·茶氨酸的制取方法 | 第16-21页 |
| ·茶氨酸的检测方法 | 第21-23页 |
| ·茶氨酸在茶树体内的分布规律 | 第23页 |
| ·茶氨酸在茶树体内的代谢途径 | 第23-28页 |
| ·影响茶树茶氨酸含量的理化因子 | 第28-30页 |
| ·植物中功能酶基因及相关的调控因子的分子研究方法 | 第30-35页 |
| ·传统的生物化学方法 | 第30-31页 |
| ·基于设计与蛋白质序列保守区域互补的探针筛选 | 第31页 |
| ·转座子标签法克隆基因 | 第31页 |
| ·功能基因组方法 | 第31-35页 |
| 2 引言 | 第35-38页 |
| ·茶氨酸的研究现状及目前存在的问题 | 第35-36页 |
| ·本研究的目的和意义 | 第36-37页 |
| ·本研究的主要内容 | 第37-38页 |
| 第2章 茶树高质量RNA提取方法的建立 | 第38-45页 |
| 1 引言 | 第38页 |
| 2 材料与方法 | 第38-41页 |
| ·材料 | 第38-39页 |
| ·植物材料 | 第38页 |
| ·试剂 | 第38页 |
| ·仪器 | 第38-39页 |
| ·提取总RNA方法 | 第39-40页 |
| ·异硫氰酸胍法 | 第39页 |
| ·改良的Trizol试剂分离法 | 第39页 |
| ·柱式Trizol总RNA抽提试剂盒 | 第39-40页 |
| ·改良的 CTAB 法 | 第40页 |
| ·不同方法提取总RNA的电泳显示 | 第40页 |
| ·总 RNA 纯度测定 | 第40-41页 |
| ·cDNA第1链的合成 | 第41页 |
| ·特异条带的PCR扩增反应 | 第41页 |
| ·特异引物的设计和合成 | 第41页 |
| ·PCR反应 | 第41页 |
| 3 结果与分析 | 第41-43页 |
| ·不同方法提取总RNA的电泳显示和纯度测定 | 第41-42页 |
| ·根部RNA反转录形成的cDNA | 第42-43页 |
| ·特异条带的PCR扩增反应 | 第43页 |
| 4 小结与讨论 | 第43-45页 |
| 第3章 茶树幼根cDNA文库的构建及ESTs分析 | 第45-66页 |
| 1 引言 | 第45页 |
| 2 材料与方法 | 第45-47页 |
| ·材料 | 第45-46页 |
| ·方法 | 第46-47页 |
| ·总RNA的提取 | 第46页 |
| ·cDNA第1链的合成与LD-PCR | 第46页 |
| ·cDNA的纯化、SfiⅠ消化及分级分离 | 第46-47页 |
| ·cDNA与pBluescriptⅡSK﹡的连接与转化 | 第47页 |
| ·阳性质粒的提取和ESTs序列测定分析 | 第47页 |
| ·序列分析和功能分类 | 第47页 |
| 3 结果与分析 | 第47-60页 |
| ·总RNA的提取、第1链的合成及LD-PCR | 第47-48页 |
| ·cDNA的纯化与回收 | 第48页 |
| ·cDNA文库的质量参数 | 第48-49页 |
| ·ESTs测序结果分析 | 第49页 |
| ·ESTs聚类及比对分析 | 第49-55页 |
| ·Blast2go注释结果 | 第55-60页 |
| 4 小结与讨论 | 第60-66页 |
| 第4章 茶氨酸含量差异材料的筛选 | 第66-78页 |
| 1 引言 | 第66页 |
| 2 材料与方法 | 第66-69页 |
| ·材料 | 第66页 |
| ·主要仪器设备 | 第66页 |
| ·试剂 | 第66-67页 |
| ·试验方法 | 第67-69页 |
| ·茶树愈伤组织的培养及相关外源物的诱导 | 第67页 |
| ·茶苗水培的(NH_4)_2SO_4诱导 | 第67页 |
| ·茶树遮阴及遮阴与水杨酸、盐酸乙胺组合诱导 | 第67-68页 |
| ·茶树不同品种嫩叶中茶氨酸含量的比较 | 第68页 |
| ·样品制备 | 第68页 |
| ·色谱条件 | 第68页 |
| ·氨基酸混标的配制及试样衍生 | 第68-69页 |
| ·数据统计分析 | 第69页 |
| 3 结果与分析 | 第69-76页 |
| ·茶树愈伤组织的培养 | 第69-70页 |
| ·氨基酸、盐酸乙胺标准曲线的制作 | 第70-71页 |
| ·愈伤组织中添加相关外源物的茶氨酸含量变化 | 第71-74页 |
| ·添加前体物盐酸乙胺后的茶氨酸含量变化 | 第71-73页 |
| ·添加不同浓度的谷氨酰胺、丙氨酸、谷氨酸钠后的茶氨酸含量变化 | 第73页 |
| ·添加不同浓度的NO供体硝普钠后的茶氨酸含量变化 | 第73-74页 |
| ·水培苗新生根的诱导及其营养液中添加(NH_4)_2SO_4的茶氨酸含量变化 | 第74-75页 |
| ·遮阴及遮阴与水杨酸、盐酸乙胺组合诱导对茶树根部茶氨酸含量的影响 | 第75-76页 |
| ·不同品种茶树嫩叶中茶氨酸含量的比较 | 第76页 |
| 4 小结与讨论 | 第76-78页 |
| 第5章 茶愈伤组织实时定量 PCR 分析中内参基因选取和方法建立 | 第78-88页 |
| 1 引言 | 第78页 |
| 2 材料与方法 | 第78-81页 |
| ·材料 | 第78-79页 |
| ·主要试剂与仪器 | 第79页 |
| ·RNA 的提取 | 第79-80页 |
| ·持家基因的特异引物设计 | 第80页 |
| ·cDNA 第 1 链的合成、实时定量 PCR 扩增效率与特异性分析 | 第80-81页 |
| ·持家基因表达稳定性分析及合适内参基因的选取 | 第81页 |
| 3 结果与分析 | 第81-86页 |
| ·RNA浓度测定及质量鉴定 | 第81-82页 |
| ·持家基因引物扩增效率与特异性 | 第82-84页 |
| ·持家基因的稳定性评价 | 第84-86页 |
| 4 小结与讨论 | 第86-88页 |
| 第6章 茶氨酸代谢相关基因的差异表达分析 | 第88-98页 |
| 1 引言 | 第88页 |
| 2 材料与方法 | 第88-93页 |
| ·材料 | 第88页 |
| ·主要试剂与仪器 | 第88-89页 |
| ·RNA的提取 | 第89页 |
| ·RT-PCR反应的特异性片段获取 | 第89-91页 |
| ·茶氨酸代谢相关基因的特异引物设计 | 第91页 |
| ·cDNA 第 1 链的合成、实时定量 PCR 扩增效率与特异性分析 | 第91页 |
| ·茶氨酸代谢相关的目的基因在盐酸乙胺诱导处理和对照材料中的表达分析 | 第91-93页 |
| 3 结果与分析 | 第93-97页 |
| ·GOGAT 和 GDH cDNA 片段的克隆 | 第93-95页 |
| ·目的基因的引物扩增效率与特异性分析 | 第95页 |
| ·茶氨酸代谢相关的基因在对照和处理愈伤组织不同生长期的表达差异分析 | 第95-97页 |
| 4 小结与讨论 | 第97-98页 |
| 第7章 结论与展望 | 第98-101页 |
| 1 主要研究结果 | 第98-99页 |
| 2 展望 | 第99-100页 |
| 3 主要创新点 | 第100-101页 |
| 参考文献 | 第101-112页 |
| 附录 | 第112-129页 |
| 致谢 | 第129-130页 |
| 作者简介 | 第130页 |
| 在读期间发表的论著及科研成果 | 第130页 |
