| 中文摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-11页 |
| 符号说明 | 第11-12页 |
| 第一章 文献综述 | 第12-23页 |
| 1 多基因联合抵抗病毒研究进展 | 第12-13页 |
| 2 神经氨酸酶基因及其蛋白的研究进展 | 第13-16页 |
| ·神经氨酸酶的结构 | 第13-14页 |
| ·神经氨酸酶的生物学功能 | 第14页 |
| ·NA的研究进展 | 第14-16页 |
| 3 Mx基因及其蛋白的研究进展 | 第16-20页 |
| ·Mx蛋白基因的发现和命名 | 第16页 |
| ·不同动物Mx蛋白的发现 | 第16页 |
| ·Mx蛋白的结构 | 第16-17页 |
| ·Mx蛋白的表达调控 | 第17-18页 |
| ·Mx蛋白的抗病毒机理 | 第18页 |
| ·禽类Mx蛋白的研究进展 | 第18-20页 |
| ·Mx基因的研究展望 | 第20页 |
| 4 睾丸注射法在鸡的抗病育种中的应用 | 第20-22页 |
| 5 本研究的目的及意义 | 第22-23页 |
| 第二章 NA、Mx基因的克隆及其真核双表达载体构建 | 第23-41页 |
| 1. 材料与方法 | 第23-27页 |
| ·材料 | 第23-25页 |
| ·菌种与质粒 | 第23页 |
| ·主要试剂 | 第23-24页 |
| ·其他常用试剂配制 | 第24页 |
| ·引物设计与合成 | 第24-25页 |
| ·方法 | 第25-27页 |
| ·NA、Mx基因cDNA的合成及扩增 | 第25页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的制备 | 第25页 |
| ·NA、Mx基因的T-A克隆 | 第25页 |
| ·pVITRO_2-Mx-NA双基因真核共表达质粒的构建 | 第25-27页 |
| ·pVITRO_2-NA真核表达质粒的构建 | 第25-26页 |
| ·pVITRO_2-Mx真核表达质粒的构建 | 第26页 |
| ·pVITRO_2-Mx-NA双基因真核表达质粒的构建 | 第26-27页 |
| ·NA、Mx基因基因编码区(CDS)的生物信息学分析 | 第27页 |
| 2. 结果 | 第27-38页 |
| ·NA和Mx基因的克隆 | 第27-29页 |
| ·pVITRO_2-Mx-NA双基因真核共表达载体的鉴定 | 第29-30页 |
| ·pVITRO_2-NA真核表达质粒的构建 | 第29页 |
| ·pVITRO_2-Mx真核表达质粒的构建 | 第29页 |
| ·pVITRO_2-Mx-NA双基因真核表达质粒的构建 | 第29-30页 |
| ·NA和Mx基因生物信息学分析结果 | 第30-38页 |
| ·NA基因序列分析结果 | 第30-34页 |
| ·Mx基因序列分析结果 | 第34-38页 |
| 3. 分析与讨论 | 第38-39页 |
| 4. 结论 | 第39-41页 |
| 第三章 体外重组“PVITRO_2-Mx-NA”的表达以及亚细胞定位的研究 | 第41-49页 |
| 1. 材料和方法 | 第41-44页 |
| ·材料 | 第41-42页 |
| ·实验材料 | 第41页 |
| ·主要试剂 | 第41-42页 |
| ·方法 | 第42-44页 |
| ·基因免疫制备鸡Mx基因抗体血清 | 第42-44页 |
| ·质粒的大量制备 | 第42页 |
| ·免疫方法 | 第42页 |
| ·细胞转染 | 第42-43页 |
| ·转染pcDNA3.0-Mx后NIH-3T3细胞的筛选 | 第43页 |
| ·IFA检测抗体血清 | 第43-44页 |
| ·Mx、NA基因蛋白亚细胞定位 | 第44页 |
| ·细胞转染及抗性细胞的筛选 | 第44页 |
| ·IFA检测重组Mx、NA蛋白的表达 | 第44页 |
| 2. 结果 | 第44-47页 |
| ·真核表达载体的鉴定结果 | 第44-45页 |
| ·RT-PCR检测Mx蛋白在3T3细胞中的表达 | 第45-46页 |
| ·IFA检测抗血清效价 | 第46页 |
| ·RT-PCR检测转染重组质粒细胞Mx、NA基因mRNA的表达 | 第46-47页 |
| ·IFA检测重组Mx和NA蛋白的表达 | 第47页 |
| 3. 分析与讨论 | 第47-48页 |
| 4. 结论 | 第48-49页 |
| 第四章 重组表达载体抗病活性的研究 | 第49-58页 |
| 1. 材料和方法 | 第49-51页 |
| ·材料 | 第49页 |
| ·载体、菌株、细胞及病毒 | 第49页 |
| ·主要试剂 | 第49页 |
| ·方法 | 第49-51页 |
| ·细胞转染 | 第49页 |
| ·RT-PCR检测Mx、NA基因在mRNA水平的表达 | 第49-50页 |
| ·NDV接种细胞及其TCID_(50)测定 | 第50-51页 |
| ·新城疫病毒的接种培养与获取 | 第50页 |
| ·制备单层CEF细胞 | 第50-51页 |
| ·新城疫病毒感作CEF及TCID_(50)的测定 | 第51页 |
| ·抗NDV活性检测 | 第51页 |
| 2. 结果 | 第51-56页 |
| ·RT-PCR检测转染重组质粒细胞Mx、NA基因mRNA的表达 | 第51-52页 |
| ·新城疫病毒TCID_(50)测定 | 第52-53页 |
| ·抗NDV试验结果 | 第53-56页 |
| 3. 讨论与分析 | 第56-57页 |
| 4. 结论 | 第57-58页 |
| 第五章 睾丸注射法制备抗病转基因鸡 | 第58-68页 |
| 1 材料与方法 | 第58-62页 |
| ·试验材料 | 第59页 |
| ·质粒和试验动物 | 第59页 |
| ·实验器材 | 第59页 |
| ·主要试剂 | 第59页 |
| ·其他常用试剂配制 | 第59页 |
| ·方法 | 第59-62页 |
| ·pVITRO_2-Mx-NA线性化质粒制备 | 第59-60页 |
| ·睾丸注射 | 第60页 |
| ·人工授精 | 第60页 |
| ·PCR检测 | 第60-61页 |
| ·Western blot检测Mx和NA蛋白的表达 | 第61-62页 |
| 2. 结果 | 第62-65页 |
| ·pVITRO_2-Mx-NA质粒线性酶切 | 第62页 |
| ·精液品质检测 | 第62页 |
| ·精液基因组PCR结果 | 第62-63页 |
| ·F1代的检测 | 第63-65页 |
| ·血液PCR检测 | 第63-64页 |
| ·Western blot检测结果 | 第64-65页 |
| 3. 分析与讨论 | 第65-67页 |
| ·脂质体在睾丸注射法中的重要性 | 第65页 |
| ·睾丸注射法制备转基因鸡 | 第65-67页 |
| 4. 结论 | 第67-68页 |
| 全文结论 | 第68-69页 |
| 参考文献 | 第69-79页 |
| 附录1 | 第79-81页 |
| 附录2 | 第81-82页 |
| 致谢 | 第82-83页 |
| 硕士期间发表的论文 | 第83-84页 |
