| 摘要 | 第1-7页 |
| ABSTRACT | 第7-13页 |
| 第1章 绪论 | 第13-21页 |
| ·γ-氨基丁酸的结构与性质 | 第13页 |
| ·γ-氨基丁酸的分布 | 第13-14页 |
| ·GABA的生理功能 | 第14-15页 |
| ·控制哮喘 | 第14页 |
| ·改善神经机能 | 第14页 |
| ·降低血压 | 第14页 |
| ·增进和活化肝肾功能 | 第14-15页 |
| ·其他功能 | 第15页 |
| ·制备GABA的方法 | 第15-18页 |
| ·化学制备法 | 第15页 |
| ·生物法合成 | 第15-18页 |
| ·谷氨酸脱羧酶的研究进展 | 第18-19页 |
| ·谷氨酸脱羧酶的分布及其结构 | 第18页 |
| ·谷氨酸脱羧酶基因的克隆与表达 | 第18-19页 |
| ·研究目的及研究思路 | 第19-21页 |
| ·研究目的 | 第19-20页 |
| ·技术路线 | 第20-21页 |
| 第2章 纸层析与分光光度法测定发酵液中GABA含量的研究 | 第21-27页 |
| ·引言 | 第21页 |
| ·实验材料 | 第21-22页 |
| ·主要试剂 | 第21-22页 |
| ·主要仪器设备 | 第22页 |
| ·主要试剂配制 | 第22页 |
| ·方法 | 第22-24页 |
| ·定性测定GABA的主要步骤 | 第22-23页 |
| ·发酵液中GABA的定量测定 | 第23-24页 |
| ·样品处理 | 第23页 |
| ·标准品GABA最大吸收峰波长确定 | 第23页 |
| ·绘制标准曲线 | 第23页 |
| ·精确度试验 | 第23-24页 |
| ·结果与讨论 | 第24-25页 |
| ·纸层析法 | 第24页 |
| ·最佳吸收波长的选择 | 第24页 |
| ·标准曲线 | 第24-25页 |
| ·精密度试验 | 第25页 |
| ·小结 | 第25-27页 |
| 第3章 产 γ-氨基丁酸乳酸菌菌株的筛选 | 第27-34页 |
| ·引言 | 第27页 |
| ·材料和方法 | 第27-28页 |
| ·实验材料 | 第27页 |
| ·实验药品 | 第27-28页 |
| ·实验仪器 | 第28页 |
| ·培养基 | 第28页 |
| ·方法 | 第28-29页 |
| ·乳酸菌的分离 | 第28-29页 |
| ·乳酸菌的筛选 | 第29页 |
| ·乳酸菌菌株的鉴定 | 第29页 |
| ·分析方法 | 第29页 |
| ·结果与分析 | 第29-33页 |
| ·菌落形态与生理生化特性 | 第29-30页 |
| ·产GABA乳酸菌筛选 | 第30-31页 |
| ·3#菌株的鉴定 | 第31-33页 |
| ·菌株菌落及个体形态特征 | 第31页 |
| ·16SrDNA的PCR扩增 | 第31-32页 |
| ·16SrDNA序列分析 | 第32-33页 |
| ·BLAST同源性比较 | 第33页 |
| ·小结 | 第33-34页 |
| 第4章 高产 γ-氨基丁酸乳酸菌菌株的诱变选育 | 第34-42页 |
| ·前言 | 第34页 |
| ·实验材料 | 第34-35页 |
| ·菌种来源 | 第34页 |
| ·实验药品 | 第34页 |
| ·培养基配制 | 第34-35页 |
| ·实验方法 | 第35-37页 |
| ·出发菌株产GABA能力的测定 | 第35页 |
| ·菌种的活化 | 第35页 |
| ·静置发酵 | 第35页 |
| ·发酵液中GABA含量的测定 | 第35页 |
| ·产 γ-氨基丁酸菌株的诱变方法 | 第35-37页 |
| ·紫外诱变 | 第35-36页 |
| ·突变菌株的筛选 | 第36页 |
| ·NTG诱变 | 第36-37页 |
| ·正突变菌株的筛选 | 第37页 |
| ·复合诱变 | 第37页 |
| ·遗传稳定性测定 | 第37页 |
| ·结果与讨论 | 第37-41页 |
| ·出发菌株产GABA能力 | 第37页 |
| ·最佳紫外诱变时间的选择 | 第37-38页 |
| ·亚硝基胍浓度的选择 | 第38页 |
| ·紫外诱变正突变株的筛选 | 第38-39页 |
| ·亚硝基胍诱变正突变株的筛选 | 第39-40页 |
| ·紫外-亚硝基胍复合诱变 | 第40-41页 |
| ·小结 | 第41-42页 |
| 第5章 粪肠球菌HX-3细胞转化制备 γ-氨基丁酸条件的优化 | 第42-50页 |
| ·前言 | 第42页 |
| ·材料与方法 | 第42-44页 |
| ·材料 | 第42页 |
| ·培养基 | 第42-43页 |
| ·Enterococcus faecalis HX-3细胞转化制备GABA | 第43页 |
| ·不同时间发酵液中GABA浓度与酶活力关系 | 第43页 |
| ·底物浓度在转化过程中对GABA含量的影响 | 第43页 |
| ·PLP浓度在转化过程中对对GABA含量的影响 | 第43页 |
| ·pH对转化过程中对GABA含量的影响 | 第43-44页 |
| ·温度对转化过程中对GABA含量的影响 | 第44页 |
| ·对所选因素进行正交试验优化 | 第44页 |
| ·Enterococcus faecalis HX-3细胞转化生产能力的测试 | 第44页 |
| ·结果与分析 | 第44-49页 |
| ·不同时间发酵液中GABA浓度与酶活力关系 | 第44-45页 |
| ·转化过程中底物浓度对GABA浓度的影响 | 第45页 |
| ·转化过程中PLP浓度对GABA浓度的影响 | 第45-46页 |
| ·转化过程中转化pH对GABA浓度的影响 | 第46页 |
| ·转化过程中转化温度对GABA浓度的影响 | 第46页 |
| ·正交试验设计与分析 | 第46-48页 |
| ·HX-3细胞转化生产能力的测试 | 第48-49页 |
| ·小结 | 第49-50页 |
| 第6章 产 γ-氨基丁酸乳酸菌HX-3-6发酵条件及发酵培养基的优化 | 第50-63页 |
| ·前言 | 第50页 |
| ·材料与仪器 | 第50-51页 |
| ·菌种 | 第50页 |
| ·仪器 | 第50页 |
| ·培养基 | 第50-51页 |
| ·方法 | 第51页 |
| ·菌体生物量测定 | 第51页 |
| ·发酵条件的优化 | 第51页 |
| ·不同C源、N源对GABA产量的影响 | 第51页 |
| ·多因子筛选试验的Plackett-Burman设计 | 第51页 |
| ·主要影响因子的Box-Behnken设计和响应面分析 | 第51页 |
| ·结果与讨论 | 第51-62页 |
| ·发酵条件的优化 | 第51-55页 |
| ·不同碳源、氮源对GABA产量的影响 | 第55-56页 |
| ·Plackett-Burman实验筛选主要因素 | 第56-57页 |
| ·响应面分析法确定最佳值域 | 第57-58页 |
| ·回归模型的建立及方差分析 | 第58-62页 |
| ·小结 | 第62-63页 |
| 第7章 高产 γ-氨基丁酸乳酸菌谷氨酸脱羧酶基因的克隆 | 第63-69页 |
| ·引言 | 第63页 |
| ·菌株来源 | 第63页 |
| ·培养基 | 第63页 |
| ·主要试剂 | 第63页 |
| ·引物 | 第63页 |
| ·主要实验设备 | 第63-64页 |
| ·常用生物分析相关软件及网站 | 第64页 |
| ·方法 | 第64-65页 |
| ·基因组DNA的提取 | 第64页 |
| ·GAD酶基因的扩增(PCR) | 第64-65页 |
| ·PCR扩增产物基因序列测定结果与分析 | 第65-68页 |
| ·Enterococcus faecium HX-3-6 gad gene PCR扩增结果 | 第65页 |
| ·Enterococcus faecium HX-3-6 gad gene基因序列 | 第65-67页 |
| ·Enterococcus faecium HX-3-6 gad gene基因序列分析 | 第67-68页 |
| ·小结 | 第68-69页 |
| 第8章 结论与建议 | 第69-71页 |
| ·结论 | 第69页 |
| ·建议 | 第69-71页 |
| 参考文献 | 第71-75页 |
| 攻读硕士期间发表论文 | 第75-76页 |
| 致谢 | 第76页 |
