| 摘要 | 第1-11页 |
| Abstract | 第11-14页 |
| 缩略词表（Abbreviation) | 第14-15页 |
| 第一篇 文献综述 | 第15-33页 |
| 1 副溶血弧菌研究进展 | 第15-22页 |
| ·传统方法 | 第15-16页 |
| ·国家标准方法 | 第15页 |
| ·最大可能数法(MPN) | 第15-16页 |
| ·免疫学方法 | 第16-17页 |
| ·酶联免疫吸附(ELISA)法 | 第16页 |
| ·免疫荧光抗体技术 | 第16页 |
| ·胶体金技术 | 第16-17页 |
| ·分子生物学技术 | 第17-21页 |
| ·环介导等温扩增技术(loop-mediated isothermal amplification,LAMP) | 第17页 |
| ·PCR | 第17-20页 |
| ·单一PCR法 | 第18页 |
| ·多重PCR | 第18页 |
| ·荧光定量PCR(FQ-PCR) | 第18-19页 |
| ·纳米PCR | 第19-20页 |
| ·核酸探针技术 | 第20页 |
| ·UPPCR—SSCP | 第20页 |
| ·基因芯片技术 | 第20-21页 |
| ·变性高效液相色谱(DHPLC)技术 | 第21页 |
| ·Transcription-reverse transcription concerted(TRC)方法 | 第21页 |
| ·DNA指纹图谱技术 | 第21页 |
| ·传感器技术 | 第21-22页 |
| ·、电化学技术 | 第21-22页 |
| ·电子鼻技术 | 第22页 |
| 2 溶藻弧菌研究进展 | 第22-28页 |
| ·传统方法 | 第23页 |
| ·免疫学方法 | 第23-25页 |
| ·酶联免疫吸附(ELISA)法 | 第24页 |
| ·免疫荧光抗体技术 | 第24页 |
| ·胶体金技术 | 第24-25页 |
| ·分子生物学技术 | 第25-28页 |
| ·环介导等温扩增技术(loop-mediated isothermal amplification,LAMP) | 第25页 |
| ·PCR | 第25-27页 |
| ·单一PCR法 | 第25-26页 |
| ·多重PCR | 第26页 |
| ·荧光定量PCR(FQ-PCR) | 第26页 |
| ·纳米PCR | 第26-27页 |
| ·核酸探针技术 | 第27页 |
| ·UPPCR-SSCP | 第27页 |
| ·变性高效液相色谱(DHPLC)技术 | 第27-28页 |
| ·DNA指纹图谱技术 | 第28页 |
| 3 纳米PCR技术及其研究进展 | 第28-29页 |
| 4 免疫胶体金技术及其研究进展 | 第29-33页 |
| ·免疫胶体金技术的基本原理 | 第29-30页 |
| ·免疫胶体金快速诊断技术 | 第30-32页 |
| ·斑点免疫金渗滤法(DIGFA) | 第30页 |
| ·胶体金免疫层析法(GICA) | 第30-32页 |
| ·前景与展望 | 第32-33页 |
| 第二篇 试验研究 | 第33-57页 |
| 试验一 多重PCR技术同时检测副溶血弧菌和溶藻弧菌方法的建立与初步应用 | 第33-41页 |
| 1 材料与方法 | 第33-37页 |
| ·试验菌株 | 第33页 |
| ·仪器和试剂 | 第33页 |
| ·引物设计与合成 | 第33-34页 |
| ·细菌模板最佳提取方法的选择 | 第34页 |
| ·PCR体系的建立 | 第34-36页 |
| ·常规PCR方法检测VP和VA方法的建立 | 第34-35页 |
| ·多重PCR一步法技术同时检测VP和VA方法的建立 | 第35-36页 |
| ·最佳反应条件的测定 | 第36页 |
| ·灵敏度检测 | 第36页 |
| ·特异性测定 | 第36页 |
| ·稳定性测定 | 第36页 |
| ·人工污染试验 | 第36-37页 |
| ·临床检测 | 第37页 |
| 2 结果与分析 | 第37-39页 |
| ·细菌模板提取方法比较 | 第37页 |
| ·最佳反应条件的测定 | 第37-38页 |
| ·灵敏度的测定 | 第38页 |
| ·特异性测定 | 第38-39页 |
| ·稳定性测定 | 第39页 |
| ·人工污染试验 | 第39页 |
| ·临床检测 | 第39页 |
| 3 讨论 | 第39-41页 |
| 试验二 纳米PCR技术检测副溶血弧菌的建立与初步应用 | 第41-45页 |
| 1 材料与方法 | 第41-43页 |
| ·试验材料 | 第41页 |
| ·试验菌株 | 第41页 |
| ·仪器和试剂 | 第41页 |
| ·引物设计与合成 | 第41页 |
| ·试验方法 | 第41-43页 |
| ·纳米金PCR检测VP的反应体系的建立 | 第41-42页 |
| ·最佳反应条件的测定 | 第42页 |
| ·灵敏度检测 | 第42页 |
| ·特异性测定 | 第42页 |
| ·稳定性测定 | 第42页 |
| ·与普通PCR进行比较 | 第42-43页 |
| 2 结果与分析 | 第43-44页 |
| ·最佳反应条件的测定 | 第43页 |
| ·灵敏度的测定 | 第43-44页 |
| ·特异性的测定 | 第44页 |
| ·稳定性测定 | 第44页 |
| 3 讨论 | 第44-45页 |
| 试验三 纳米PCR技术检测溶藻弧菌的建立与初步应用 | 第45-49页 |
| 1 材料与方法 | 第45-47页 |
| ·试验材料 | 第45页 |
| ·试验菌株 | 第45页 |
| ·仪器和试剂 | 第45页 |
| ·引物设计与合成 | 第45页 |
| ·试验方法 | 第45-47页 |
| ·纳米金PCR检测VA的反应体系 | 第45-46页 |
| ·最佳反应条件的测定 | 第46页 |
| ·灵敏度检测 | 第46页 |
| ·特异性测定 | 第46页 |
| ·稳定性测定 | 第46页 |
| ·与普通PCR进行比较 | 第46-47页 |
| 2 结果与分析 | 第47-48页 |
| ·最佳反应条件的测定 | 第47页 |
| ·灵敏度的测定 | 第47-48页 |
| ·特异性的测定 | 第48页 |
| ·稳定性测定 | 第48页 |
| 3 讨论 | 第48-49页 |
| 试验四 快速检测副溶血弧菌免疫胶体金层析法的研究 | 第49-57页 |
| 1 材料 | 第49-50页 |
| ·仪器与试剂 | 第49页 |
| ·菌株 | 第49页 |
| ·主要试剂溶液的配置 | 第49-50页 |
| ·抗体 | 第50页 |
| 2 方法 | 第50-52页 |
| ·胶体金的制备和金标多抗的制备 | 第50页 |
| ·玻璃器皿的清洗 | 第50页 |
| ·胶体金颗粒的烧制 | 第50页 |
| ·兔抗IgG胶体金的制备 | 第50-51页 |
| ·兔抗IgG最佳标记量的确定 | 第50-51页 |
| ·胶体金标记及纯化 | 第51页 |
| ·胶体金免疫层析试纸法(GICA) | 第51-52页 |
| ·金标快速检测试纸条的组装 | 第51-52页 |
| ·最佳封闭液的选择 | 第52页 |
| ·各成分最佳浓度和灵敏度的测定 | 第52页 |
| ·特异性试验 | 第52页 |
| ·稳定性试验 | 第52页 |
| 3 结果分析 | 第52-55页 |
| ·兔抗副溶血弧菌抗体效价检测和筛选处理及抗体纯化 | 第52-53页 |
| ·兔抗IgG-1最佳标记量的确定 | 第53-54页 |
| ·最佳封闭液的选择 | 第54页 |
| ·试纸条的最佳条件和灵敏度的确定 | 第54-55页 |
| ·试纸条的特异性 | 第55页 |
| ·试纸条的稳定性 | 第55页 |
| 4 讨论 | 第55-57页 |
| 第三篇 结论 | 第57-58页 |
| 创新点 | 第58-59页 |
| 参考文献 | 第59-66页 |
| 附录 | 第66-71页 |
| 附录1：细菌模板的提取方法 | 第66-68页 |
| 1 传统方法(酚-氯仿提取法) | 第66页 |
| 2 直接菌体加入法 | 第66页 |
| 3 反复冻融法 | 第66-67页 |
| 4 热裂解法 | 第67页 |
| 5 柱式细菌基因组DNA提取试剂盒法 | 第67-68页 |
| 附录2：细菌的培养与计数 | 第68-69页 |
| 附录3：兔抗VP多克隆抗体的制备方法 | 第69-70页 |
| 1 兔抗VP多抗血清的制备 | 第69页 |
| 2 玻片凝集试验测血清抗体效价 | 第69页 |
| 3 合格兔抗血清的处理 | 第69-70页 |
| 4 兔抗血清的纯化(饱和硫酸铵沉淀法纯化) | 第70页 |
| 附录4：胶体金颗粒的烧制 | 第70-71页 |
| 在学期间发表的论文 | 第71页 |
| 申请专利 | 第71-72页 |
| 论文思路来源 | 第72页 |
| 致谢 | 第72页 |
