| 致谢 | 第1-6页 |
| 中文摘要 | 第6-7页 |
| Abstract | 第7-8页 |
| 中英文对照表 | 第8-9页 |
| 目次 | 第9-13页 |
| 第一章 绪论 | 第13-22页 |
| ·肿瘤基质是肿瘤细胞的摇篮 | 第13页 |
| ·MSCs是肿瘤基质的重要组成部分 | 第13-14页 |
| ·MSCs介导肿瘤免疫耐受 | 第14-15页 |
| ·当前基于MSCs的抗肿瘤策略与问题 | 第15页 |
| ·LIGHT有强力的抗肿瘤免疫作用 | 第15-17页 |
| ·参考文献 | 第17-22页 |
| 第二章 骨髓间充质干细胞的分离和鉴定 | 第22-34页 |
| ·前言 | 第22-23页 |
| ·材料 | 第23-24页 |
| ·小鼠骨髓标本来源 | 第23页 |
| ·主要实验试剂与耗材 | 第23-24页 |
| ·实验方法 | 第24-28页 |
| ·小鼠MSCs的分离 | 第24页 |
| ·小鼠MSCs的原代培养 | 第24-25页 |
| ·小鼠MSCs的传代培养 | 第25页 |
| ·胞生长曲线测定 | 第25页 |
| ·小鼠MSCs表面标志的流式细胞术分析 | 第25-26页 |
| ·小鼠MSCs多潜能分化 | 第26-28页 |
| ·小鼠MSCs诱导向成骨细胞分化 | 第26页 |
| ·小鼠MSCs诱导向脂肪细胞分化 | 第26-28页 |
| ·结果与分析 | 第28-33页 |
| ·小鼠MSCs的原代培养及特性 | 第28-29页 |
| ·MSCs的生长动力学 | 第29-31页 |
| ·MSCs的表面抗原表达分析 | 第31-32页 |
| ·小鼠MSCs的向成骨细胞和成脂肪细胞诱导分化 | 第32-33页 |
| ·小结 | 第33-34页 |
| 第三章 骨髓间质干细胞的转染及特性分析 | 第34-54页 |
| ·前言 | 第34-35页 |
| ·T40永生化MSCs及其特性鉴定 | 第35-37页 |
| ·实验试剂与材料 | 第35页 |
| ·实验方法 | 第35-37页 |
| ·pAMpho与pSSRV69-T40质粒的转化与纯化 | 第35页 |
| ·逆转录病毒的生产 | 第35-36页 |
| ·用逆转录病毒转染MSCs建立稳定的细胞系 | 第36-37页 |
| ·通过逆转录病毒将LIGHT转入MSCs | 第37-38页 |
| ·试剂与耗材 | 第37页 |
| ·实验方法 | 第37-38页 |
| ·MSCs转入LIGHT后LIGHT表达检测 | 第38-39页 |
| ·试剂与材料 | 第38页 |
| ·实验方法 | 第38-39页 |
| ·LIGHT在MSC-L细胞表面表达测定 | 第38-39页 |
| ·永生化的MSCs以及MSC-L生长曲线测定 | 第39页 |
| ·永生化的MSCs及MSC-L同系小鼠体内成瘤实验 | 第39-40页 |
| ·小鼠品系与细胞系 | 第39页 |
| ·试剂与材料 | 第39页 |
| ·实验方法 | 第39-40页 |
| ·MSCs以及MSC-L体内外迁移实验 | 第40-42页 |
| ·试剂与材料 | 第40页 |
| ·实验方法 | 第40-42页 |
| ·Transwell实验 | 第40页 |
| ·体内迁移实验 | 第40-42页 |
| ·结果与分析 | 第42-52页 |
| ·小鼠MSCs永生化后基本特性鉴定 | 第42-46页 |
| ·MSC-L的基本特性鉴定 | 第46-49页 |
| ·MSCs与MSC-L的体内外迁移能力检测与比较 | 第49-52页 |
| ·小结 | 第52-54页 |
| 第四章 MSC-L抗肿瘤作用及机制探讨 | 第54-93页 |
| ·前言 | 第54-57页 |
| ·第一部分 MSC-L可以有效靶向性控制肿瘤生长 | 第57-63页 |
| ·前言 | 第57-58页 |
| ·试剂与材料 | 第58页 |
| ·实验方法 | 第58-59页 |
| ·MSC-L预防性抗肿瘤模型 | 第58页 |
| ·MSC-L治疗性抗肿瘤模型 | 第58-59页 |
| ·结果与分析 | 第59-62页 |
| ·MSC-L可以有效预防肿瘤形成 | 第59页 |
| ·MSC-L可有效控制肿瘤进一步生长 | 第59-62页 |
| ·小结 | 第62-63页 |
| ·第二部分 MSC-L控制肿瘤生长依赖于LIGHT激活的抗肿瘤免疫 | 第63-82页 |
| ·前言 | 第63-64页 |
| ·试剂与材料 | 第64-65页 |
| ·实验方法 | 第65-68页 |
| ·裸鼠鼠饲养与细胞系培养 | 第65页 |
| ·MSC-L预防性抗肿瘤模型(裸鼠) | 第65页 |
| ·MSC-L治疗性抗肿瘤模型(裸鼠) | 第65页 |
| ·体内细胞敲除以及LIGHT活性阻断实验 | 第65-66页 |
| ·抗CD4(GK1.5)及CD8(2.43)T细胞抗体的生产与纯化 | 第65-66页 |
| ·CD4T细胞及CD8T细胞体内敲除实验 | 第66页 |
| ·LIGHT活性体内阻断实验 | 第66页 |
| ·冰冻切片包埋 | 第66页 |
| ·免疫组织化学 | 第66页 |
| ·ELISPOT检测γ-IFN操作步骤 | 第66-68页 |
| ·结果与分析 | 第68-80页 |
| ·MSC-L控制肿瘤主要不是通过抑制肿瘤增殖,血管生成以及促进肿瘤凋亡等途径 | 第68-70页 |
| ·MSC-L活化抗肿瘤免疫导致肿瘤消退 | 第70-77页 |
| ·MSC-L介导的抗肿瘤免疫主要依赖于LIGHT | 第77-80页 |
| ·小结 | 第80-82页 |
| ·第三部分MSC-L可以协同肿瘤疫苗清除肿瘤 | 第82-93页 |
| ·前言 | 第82-83页 |
| ·试剂与材料 | 第83页 |
| ·实验方法 | 第83-86页 |
| ·腺病毒疫苗的扩增与纯化 | 第83-84页 |
| ·最后一轮大规模扩增以及氯化铯密度梯度离心纯化 | 第84页 |
| ·间接细胞酶联免疫实验(Indirect cellular ELISA)检测小鼠血清抗MSC抗体 | 第84-85页 |
| ·通过流式细胞仪单色检测淋巴细胞特异的裂解MSC作用 | 第85-86页 |
| ·结果与分析 | 第86-92页 |
| ·MSC-L可以协同肿瘤疫苗有效的排斥肿瘤 | 第86-89页 |
| ·除了激活特异性抗肿瘤细胞免疫,MSC-L尚可通过激发抗肿瘤相关间质细胞的免疫而控制肿瘤生长 | 第89-92页 |
| ·小结 | 第92-93页 |
| 5 讨论 | 第93-98页 |
| 参考文献 | 第98-111页 |
| 综述 | 第111-127页 |
| 参考文献 | 第119-127页 |
| 作者简介 | 第127页 |
