| 目录 | 第1-6页 |
| 中文摘要 | 第6-8页 |
| ABSTRACT | 第8-10页 |
| 英文缩略词表 | 第10-12页 |
| 第一部分:人APRIL基因的克隆、表达及抗人APRIL单抗的制备和单抗性质鉴定 | 第12-56页 |
| 一、前言 | 第12-16页 |
| 二、实验材料 | 第16-24页 |
| (一) 菌株与质粒载体 | 第16页 |
| (二) 工具酶、限制性内切酶、分子量标准及试剂盒 | 第16-17页 |
| (三) 扩增用引物 | 第17页 |
| (四) 主要试剂及抗体 | 第17-18页 |
| (五) 实验动物及细胞系 | 第18页 |
| (六) 主要仪器设备 | 第18-19页 |
| (七) DNA序列分析软件 | 第19页 |
| (八) 溶液配制 | 第19-24页 |
| 三、实验方法 | 第24-39页 |
| (一) APRIL基因的克隆及表达 | 第24-28页 |
| 1.细胞总RNA的提取 | 第24页 |
| 2.RT-PCR扩增APRIL基因 | 第24-25页 |
| 3.PCR产物的回收纯化(玻璃奶法) | 第25-26页 |
| 4.双酶切反应 | 第26页 |
| 5.连接反应 | 第26页 |
| 6.大肠杆菌感受态细胞的制备 | 第26-27页 |
| 7.外源DNA转化大肠杆菌 | 第27页 |
| 8.菌落PCR方法鉴定阳性重组子 | 第27-28页 |
| 9.质粒DNA的小量制备(碱裂解法) | 第28页 |
| 10.阳性重组子的进一步鉴定 | 第28页 |
| (二) APRIL重组蛋白的原核表达及纯化 | 第28-34页 |
| 1.重组蛋白的小量诱导表达 | 第28页 |
| 2.SDS-PAGE检测目的蛋白表达 | 第28-29页 |
| 3.Western blot检测蛋白表达情况 | 第29-30页 |
| 4.重组蛋白的大量表达 | 第30-31页 |
| 5.APRIL重组蛋白的纯化 | 第31-32页 |
| 6.蛋白浓度的检测 | 第32-34页 |
| (三) 抗人APRIL单克隆抗体的制备及性质鉴定 | 第34-39页 |
| 1.免疫动物 | 第34页 |
| 2.细胞融合 | 第34-35页 |
| 3.挑选、转移细胞克隆及再培养 | 第35页 |
| 4.筛选阳性克隆 | 第35-36页 |
| 5.阳性克隆的亚克隆制备 | 第36页 |
| 6.阳性克隆扩增、冻存与复苏 | 第36-37页 |
| 7.抗体性质分析 | 第37-39页 |
| 四、实验结果 | 第39-53页 |
| (一) APRIL基因的克隆及表达 | 第39-40页 |
| (二) EC APRIL重组蛋白的原核表达及纯化 | 第40-43页 |
| (三) sAPRIL重组蛋白的原核表达及纯化 | 第43页 |
| (四) 重组蛋白浓度的测定 | 第43-45页 |
| (五) 抗人单克隆抗体的制备 | 第45-46页 |
| (六) 单克隆抗体性质鉴定 | 第46-53页 |
| 五、讨论 | 第53-56页 |
| 第二部分:双抗夹心、BA-ELISA及免疫PCR检测抗原灵敏度的比较 | 第56-72页 |
| 一、前言 | 第56-58页 |
| 二、材料仪器 | 第58-60页 |
| (一) 主要试剂及抗体 | 第58页 |
| (二) 引物 | 第58页 |
| (三) 主要仪器 | 第58页 |
| (四) 溶液配制 | 第58-60页 |
| 三、实验方法 | 第60-67页 |
| (一) 双抗体夹心ELISA | 第60-63页 |
| (二) BA-ELISA | 第63-64页 |
| (三) 免疫PCR | 第64-67页 |
| 四、实验结果 | 第67-71页 |
| 五、讨论 | 第71-72页 |
| 小结 | 第72-73页 |
| 参考文献 | 第73-77页 |
| 综述 | 第77-85页 |
| 综述参考文献 | 第83-85页 |
| 附录 | 第85-89页 |
| 致谢 | 第89页 |