| 中文摘要 | 第1-5页 |
| 英文摘要 | 第5-7页 |
| 目录 | 第7-10页 |
| 1 前言 | 第10-29页 |
| 1．1 研究的目的和意义 | 第10页 |
| 1．2 文献综述 | 第10-28页 |
| 1．2．1 大豆的组织培养与植株再生 | 第10-19页 |
| 1．2．1．1 大豆原生质体和单细胞的组织培养与植株再生 | 第10-12页 |
| 1．2．1．2 大豆器官发生与植株再生 | 第12-15页 |
| 1．2．1．3 大豆体细胞胚胎发生与植株再生 | 第15-19页 |
| 1．2．2 大豆的遗传转化 | 第19-28页 |
| 1．2．2．1 大豆的遗传转化方法 | 第19-26页 |
| 1．2．2．2 大豆遗传转化的外源基因 | 第26-28页 |
| 1．3 大豆组织培养与遗传转化的主要障碍及可能的解决途径 | 第28-29页 |
| 2 材料与方法 | 第29-44页 |
| 2．1 大豆的组织培养与植株再生 | 第29-32页 |
| 2．1．1 大豆真叶、子叶节和下胚轴体细胞胚胎发生的诱导 | 第29-30页 |
| 2．1．2 大豆子叶节丛生芽的诱导与植株再生 | 第30页 |
| 2．1．3 大豆未成熟子叶体细胞胚胎发生的诱导 | 第30-32页 |
| 2．1．3．1 不同大豆基因型诱导未成熟子叶体细胞胚胎发生 | 第30-31页 |
| 2．1．3．2 不同培养基诱导大豆品种未成熟子叶体细胞胚胎发生 | 第31页 |
| 2．1．3．3 不同低温预处理时间诱导大豆未成熟子叶体细胞胚胎发生 | 第31页 |
| 2．1．3．4 不同生长素种类和浓度诱导大豆未成熟子叶体细胞胚胎发生 | 第31-32页 |
| 2．1．3．5 影响大豆品种未成熟子叶体细胞胚胎发生因子的试验 | 第32页 |
| 2．1．4 大豆体细胞胚性组织的诱导、增殖与再生植株 | 第32页 |
| 2．1．4．1 大豆体细胞胚性组织的诱导 | 第32页 |
| 2．1．4．2 大豆体细胞胚性组织的增殖 | 第32页 |
| 2．1．4．3 大豆体细胞胚性组织的萌发与再生植株 | 第32页 |
| 2．2 根癌农杆菌介导的大豆遗传转化 | 第32-37页 |
| 2．2．1 根癌农杆菌菌株与质粒 | 第32-35页 |
| 2．2．1．1 质粒图谱 | 第33页 |
| 2．2．1．2 农杆菌菌株与细菌转化 | 第33-34页 |
| 2．2．1．3 质粒酶切检测 | 第34-35页 |
| 2．2．2 脱菌剂的筛选 | 第35页 |
| 2．2．2．1 脱菌抗生素种类与浓度的筛选 | 第35页 |
| 2．2．2．2 大豆品种下胚轴和子叶节头孢霉素浓度的确定 | 第35页 |
| 2．2．2．3 大豆未成熟子叶头孢霉素浓度的确定 | 第35页 |
| 2．2．3 根癌农杆菌介导的大豆遗传转化 | 第35-37页 |
| 2．2．3．1 菌液的制备 | 第36页 |
| 2．2．3．2 大豆品种与根癌农杆菌间相互作用试验 | 第36页 |
| 2．2．3．3 根癌农杆菌介导大豆品种未成熟子叶的遗传转化 | 第36-37页 |
| 2．2．3．4 根癌农杆菌介导大豆胚性组织的遗传转化 | 第37页 |
| 2．2．3．5 影响根癌农杆菌介导大豆未成熟子叶遗传转化的因子 | 第37页 |
| 2．3 基因枪轰击大豆遗传转化 | 第37-39页 |
| 2．3．1 基因枪轰击大豆的转化方法 | 第37-38页 |
| 2．3．1．1 受体材料的预处理 | 第37页 |
| 2．3．1．2 微弹载体制备、装弹与轰击 | 第37-38页 |
| 2．3．2 基因枪轰击大豆的胚性组织 | 第38页 |
| 2．3．3 影响基因枪轰击大豆遗传转化因子的试验 | 第38-39页 |
| 2．4 转化体的筛选与鉴定 | 第39-44页 |
| 2．4．1 抗性选择标记（卡那霉素）适宜浓度的确定 | 第39页 |
| 2．4．1．1 大豆下胚轴、真叶和子叶节卡那霉素浓度的确定 | 第39页 |
| 2．4．1．2 大豆未成熟子叶卡那霉素浓度的确定 | 第39页 |
| 2．4．2 GUS基因的检测 | 第39页 |
| 2．4．3 PCR检测 | 第39-41页 |
| 2．4．3．1 大豆组织DNA的提取 | 第39-40页 |
| 2．4．3．2 PCR引物 | 第40页 |
| 2．4．3．3 PCR反应体系 | 第40-41页 |
| 2．4．3．4 PCR反应程序 | 第41页 |
| 2．4．3．5 PCR产物检测 | 第41页 |
| 2．4．4 PCR-Southern杂交（地高辛法） | 第41-44页 |
| 2．4．4．1 大豆组织DNA的提取 | 第41页 |
| 2．4．4．2 PCR扩增 | 第41页 |
| 2．4．4．3 质粒DNA快速纯化与回收 | 第41-42页 |
| 2．4．4．4 探针标记 | 第42页 |
| 2．4．4．5 印迹及变性处理（电转移法） | 第42-43页 |
| 2．4．4．6 预杂交与杂交 | 第43页 |
| 2．4．4．7 洗膜、染色与检测 | 第43-44页 |
| 3 结果与分析 | 第44-77页 |
| 3．1 大豆组织培养体系的优化 | 第44-59页 |
| 3．1．1 大豆真叶、子叶节和下胚轴体细胞胚胎发生的诱导 | 第44-46页 |
| 3．1．2 大豆子叶节丛生芽的诱导与植株再生 | 第46-48页 |
| 3．1．3 大豆未成熟子叶体细胞胚胎发生的诱导 | 第48-59页 |
| 3．1．3．1 基因型对大豆未成熟子叶体细胞胚胎发生的影响 | 第48-49页 |
| 3．1．3．2 培养基对大豆品种未成熟子叶体细胞胚胎发生的影响 | 第49-52页 |
| 3．1．3．3 低温预处理对大豆品种未成熟子叶体细胞胚胎发生的影响 | 第52-54页 |
| 3．1．3．4 生长素对大豆品种未成熟子叶体细胞胚胎发生的影响 | 第54-56页 |
| 3．1．3．5 影响大豆品种未成熟子叶体细胞胚胎发生的其它因子 | 第56-59页 |
| 3．2 大豆体细胞胚性组织的诱导、增殖与再生植株体系的建立 | 第59-63页 |
| 3．2．1 大豆体细胞胚性组织的诱导 | 第59-60页 |
| 3．2．2 大豆体细胞胚性组织的增殖 | 第60-61页 |
| 3．2．3 大豆体细胞胚性组织的萌发与再生植株 | 第61-63页 |
| 3．3 抗生素敏感性试验结果 | 第63-69页 |
| 3．3．1 脱菌抗生素种类与浓度的确定 | 第63-65页 |
| 3．3．2 大豆不同外植体对抗性选择标记卡那霉素的敏感性 | 第65-67页 |
| 3．3．2．1 大豆子叶节、下胚轴和真叶对卡那霉素的敏感性 | 第65-66页 |
| 3．3．2．2 大豆未成熟子叶对卡那霉素的敏感性 | 第66-67页 |
| 3．3．3 大豆不同外植体对头孢霉素的敏感性 | 第67-69页 |
| 3．3．3．1 大豆下胚轴和子叶节对头孢霉素的敏感性 | 第67-68页 |
| 3．3．3．2 大豆未成熟子叶对头孢霉素的敏感性 | 第68-69页 |
| 3．4 根癌农杆菌介导的大豆遗传转化 | 第69-75页 |
| 3．4．1 细菌转化与质粒检测 | 第69-70页 |
| 3．4．2 大豆基因型对根癌农杆菌菌株的敏感性 | 第70-71页 |
| 3．4．3 根癌农杆菌介导不同大豆品种未成熟子叶和胚性组织的遗传转化 | 第71-73页 |
| 3．4．4 影响根癌农杆菌介导大豆未成熟子叶遗传转化的主要因子 | 第73-75页 |
| 3．5 基因枪轰击的大豆遗传转化 | 第75-77页 |
| 3．5．1 基因枪轰击大豆胚性组织GUS基因的瞬时表达 | 第75页 |
| 3．5．2 影响大豆基因枪转化的主要因子 | 第75-77页 |
| 4 讨论 | 第77-83页 |
| 4．1 东北地区主栽大豆品种未成熟子叶体细胞胚胎发生与再生植株体系的建立 | 第77页 |
| 4．2 两种生长素诱导大豆体细胞胚胎发生效率的比较 | 第77-78页 |
| 4．3 低温预处理可提高大豆体细胞胚胎发生率 | 第78页 |
| 4．4 可增殖的大豆胚性组织培养体系的建立 | 第78-79页 |
| 4．5 抗生素对大豆外植体生长的抑制及对遗传转化的影响 | 第79-80页 |
| 4．6 根癌农杆菌介导大豆未成熟子叶与胚性组织的遗传转化 | 第80-81页 |
| 4．7 基因枪轰击大豆未成熟子叶与胚性组织的遗传转化 | 第81页 |
| 4．8 Bt和CpTI双价抗虫基因对大豆的遗传转化效果 | 第81-83页 |
| 5 结论 | 第83-85页 |
| 参考文献 | 第85-99页 |
| 附录 | 第99-100页 |
| 图版 | 第100-104页 |
| 图版说明 | 第104-106页 |
| 致谢 | 第106-107页 |
| 在读期间获奖及发表论文 | 第107-109页 |
