| 摘要 | 第1-10页 |
| ABSTRACT | 第10-13页 |
| 缩略词(ABBREVIATION)表 | 第13-14页 |
| 引言 | 第14-15页 |
| 1 文献综述 | 第15-45页 |
| ·猪传染性胸膜肺炎及其危害 | 第15-18页 |
| ·猪传染性胸膜肺炎流行现状 | 第15-17页 |
| ·猪传染性胸膜肺炎的传播途径 | 第17页 |
| ·猪传染性胸膜肺炎的危害 | 第17-18页 |
| ·猪传染性胸膜肺炎病原学 | 第18-26页 |
| ·胸膜肺炎放线杆菌的发现 | 第18页 |
| ·胸膜肺炎放线杆菌的基本特征 | 第18-19页 |
| ·胸膜肺炎放线杆菌的血清型 | 第19-20页 |
| ·胸膜肺炎放线杆菌致病机理 | 第20-21页 |
| ·胸膜肺炎放线杆菌主要毒力因子 | 第21-26页 |
| ·信号标签诱变(STM)技术 | 第26-33页 |
| ·STM技术的原理 | 第27页 |
| ·STM技术的应用 | 第27-33页 |
| ·生物被膜 | 第33-38页 |
| ·生物被膜的定义 | 第34页 |
| ·生物被膜的结构 | 第34-35页 |
| ·生物被膜的形成机制 | 第35-36页 |
| ·生物被膜与毒力的关系 | 第36-37页 |
| ·生物被膜在胸膜肺炎放线杆菌中的研究 | 第37-38页 |
| ·DNA结合蛋白—H-NS蛋白 | 第38-45页 |
| ·Histone-like蛋白家族 | 第38-39页 |
| ·H-NS蛋白的结构 | 第39-41页 |
| ·H-NS与DNA间的相互作用 | 第41-42页 |
| ·H-NS蛋白质之间的相互作用 | 第42-43页 |
| ·hns基因的调节系统 | 第43-45页 |
| 2 胸膜肺炎放线杆菌1型STM突变体库的构建 | 第45-66页 |
| ·研究目的与意义 | 第45页 |
| ·材料与方法 | 第45-58页 |
| ·菌株与质粒 | 第45-46页 |
| ·培养基及抗生素的配制 | 第46-48页 |
| ·主要试剂及其配制 | 第48-50页 |
| ·主要仪器设备 | 第50页 |
| ·寡聚核苷酸引物 | 第50-51页 |
| ·菌种活化与培养 | 第51页 |
| ·胸膜肺炎放线杆菌的鉴定 | 第51-52页 |
| ·胸膜肺炎放线杆菌萘啶酸抗性的诱导 | 第52页 |
| ·质粒pLOF/Km Tag1-48的增殖及保存 | 第52-53页 |
| ·细菌的接合转移(mating) | 第53-54页 |
| ·突变株的筛选与鉴定 | 第54-55页 |
| ·Southern blot | 第55-58页 |
| ·结果与分析 | 第58-63页 |
| ·胸膜肺炎放线杆菌血清1型和血清3型的PCR鉴定 | 第58-59页 |
| ·萘啶酸抗性的诱导 | 第59页 |
| ·Mating中二亲本与三亲本接合方法的比较 | 第59-60页 |
| ·不同血清型的APP菌株接合及转座效率的比较 | 第60-61页 |
| ·STM突变体库的构建 | 第61页 |
| ·突变株的筛选与鉴定 | 第61-63页 |
| ·讨论 | 第63-66页 |
| ·关于萘啶酸抗性菌株的获得 | 第64-65页 |
| ·关于接合转移mating | 第65页 |
| ·关于STM突变株的鉴定 | 第65-66页 |
| 3 生物被膜形成突变体的筛选及插入失活基因的鉴定 | 第66-83页 |
| ·研究目的与意义 | 第66-67页 |
| ·材料与方法 | 第67-74页 |
| ·菌株 | 第67-68页 |
| ·培养基 | 第68页 |
| ·主要试剂及其它物品 | 第68页 |
| ·APP菌株的复苏与培养 | 第68页 |
| ·生物被膜形成突变体的筛选及保存 | 第68页 |
| ·试管法生物被膜的检测(Tube ring test) | 第68-69页 |
| ·反向PCR | 第69-71页 |
| ·PCR验证转座子插入的方向 | 第71-72页 |
| ·Southern blot | 第72-74页 |
| ·结果与分析 | 第74-81页 |
| ·复苏突变体的PCR鉴定 | 第74-75页 |
| ·生物被膜形成突变体的筛选 | 第75-76页 |
| ·APP参考菌株和地方分离株的生物被膜形成 | 第76-77页 |
| ·试管生物被膜形成试验 | 第77-78页 |
| ·反向PCR的结果 | 第78-79页 |
| ·hns基因BLAST结果与分析 | 第79页 |
| ·转座子插入方向的PCR鉴定 | 第79-80页 |
| ·Southern blot的结果与分析 | 第80-81页 |
| ·讨论 | 第81-83页 |
| ·关于生物被膜的形成 | 第81-82页 |
| ·被阻断基因序列的获取 | 第82-83页 |
| 4 HNS基因的结构与功能的初步研究 | 第83-115页 |
| ·研究目的与意义 | 第83-84页 |
| ·材料与方法 | 第84-99页 |
| ·菌株 | 第84页 |
| ·载体与质粒 | 第84页 |
| ·培养基 | 第84-86页 |
| ·酶和主要试剂及其配制 | 第86-87页 |
| ·主要仪器设备 | 第87-88页 |
| ·实验动物 | 第88页 |
| ·hns基因及其蛋白H-NS的生物信息学分析 | 第88页 |
| ·hns互补菌株的构建及在亲本菌中的过表达 | 第88-92页 |
| ·APP菌株的RT-PCR | 第92-95页 |
| ·生物被膜的定性分析 | 第95页 |
| ·生物被膜的定量分析 | 第95-96页 |
| ·突变菌株的溶血活性的研究 | 第96页 |
| ·突变菌株的小鼠毒力试验及LD_(50)的测定 | 第96-97页 |
| ·实时荧光定量PCR检测hns基因和毒素的表达 | 第97-98页 |
| ·重组H-NS蛋白对胸膜肺炎放线杆菌生物被膜形成的影响 | 第98-99页 |
| ·结果与分析 | 第99-111页 |
| ·H-NS的氨基酸序列的同源性比较和结构域的预测 | 第99-101页 |
| ·hns互补质粒的构建 | 第101页 |
| ·hns互补菌株的PCR鉴定 | 第101-102页 |
| ·不同方法提取RNA | 第102-103页 |
| ·RT-PCR检测hns基因的表达 | 第103-105页 |
| ·APP菌株的生物被膜形成 | 第105页 |
| ·APP不同菌株间生长特性的比较 | 第105-106页 |
| ·APP不同菌株间溶血活性的比较 | 第106-107页 |
| ·小鼠的的毒力试验 | 第107-108页 |
| ·实时荧光定量RT-PCR | 第108-109页 |
| ·hns基因的扩增、克隆及鉴定 | 第109页 |
| ·H-NS的表达与纯化 | 第109-110页 |
| ·H-NS蛋白对APP生物被膜形成的影响 | 第110-111页 |
| ·讨论 | 第111-115页 |
| ·关于RNA的提取 | 第111页 |
| ·关于内参的选择 | 第111-112页 |
| ·关于实时荧光定量RT-PCR | 第112-113页 |
| ·H-NS蛋白对APP生物被膜形成的影响 | 第113-115页 |
| 5 结论与展望 | 第115-116页 |
| ·结论 | 第115页 |
| ·展望 | 第115-116页 |
| 参考文献 | 第116-131页 |
| 致谢 | 第131-132页 |
| 附录 | 第132-133页 |
| Curriculum Vitae | 第133页 |