| 摘要 | 第1-9页 |
| Abstract | 第9-11页 |
| 缩略词表 | 第11-12页 |
| 第一章 文献综述 | 第12-27页 |
| 1.抵抗素简介与研究进展 | 第12-19页 |
| ·抵抗素分子生物学特征 | 第12-15页 |
| ·抵抗素分子特征与组织分布 | 第12-13页 |
| ·抵抗素表达调控 | 第13-14页 |
| ·抵抗素生物学活性特征 | 第14-15页 |
| ·抵抗素作用机制 | 第15-16页 |
| ·诱发胰岛素抵抗作用机制 | 第15-16页 |
| ·参与炎症反应、内皮细胞功能障碍机制 | 第16页 |
| ·抵抗素诱发脂代谢异常机制 | 第16页 |
| ·抵抗素信号转导通路 | 第16-17页 |
| ·诱发胰岛素抵抗信号转导途径 | 第16页 |
| ·抵抗素调节脂代谢信号转导途径 | 第16-17页 |
| ·抵抗素诱发内皮细胞功能障碍信号转导途径 | 第17页 |
| ·抵抗素与相关疾病的研究进展 | 第17-18页 |
| ·抵抗素与糖尿病 | 第17-18页 |
| ·抵抗素与肥胖 | 第18页 |
| ·抵抗素与心血管类疾病 | 第18页 |
| ·抵抗素与炎症 | 第18页 |
| ·抵抗素与其它疾病 | 第18页 |
| ·猪抵抗素研究进展 | 第18-19页 |
| 2.内脏脂肪素简介与研究进展 | 第19-27页 |
| ·Visfatin分子生物学特征 | 第19-23页 |
| ·Visfatin分子特征与组织分布 | 第19-20页 |
| ·Visfatin表达调控 | 第20-22页 |
| ·Visfatin生物学活性特征 | 第22-23页 |
| ·Visfatin调节表达与作用机制 | 第23-24页 |
| ·Visfatin调节表达机制 | 第23页 |
| ·Visfatin降血糖机制 | 第23页 |
| ·NAMPT酶的作用机制 | 第23-24页 |
| ·Visfatin促进脂肪分化机制 | 第24页 |
| ·Visfatin信号转导通路 | 第24-25页 |
| ·Visfatin与疾病相关研究进展 | 第25-27页 |
| ·Visfatin与Ⅱ型糖尿病 | 第25页 |
| ·Visfatin与肥胖 | 第25-26页 |
| ·Visfatin与炎症反应 | 第26页 |
| ·Visfatin与其它疾病 | 第26-27页 |
| 第二章 猪visfatin基因的克隆与表达研究 | 第27-43页 |
| 1 目的和意义 | 第27页 |
| 2 材料和方法 | 第27-34页 |
| ·材料 | 第27-30页 |
| ·组织样品 | 第27页 |
| ·酶、Marker和试剂盒 | 第27页 |
| ·培养基 | 第27-28页 |
| ·载体和菌株 | 第28页 |
| ·主要溶液配制 | 第28-30页 |
| ·主要仪器设备 | 第30页 |
| ·引物设计 | 第30页 |
| ·方法 | 第30-34页 |
| ·猪肠系膜脂肪总RNA提取 | 第30-31页 |
| ·RT-PCR合成猪肠系膜脂肪cDNA | 第31页 |
| ·猪visfatin基因编码区克隆 | 第31-32页 |
| ·重组载体pGEX-KG-Vis和pcDNA3.1(+)-Vis构建 | 第32-33页 |
| ·Visfatin融合蛋白诱导表达与表达株筛选 | 第33-34页 |
| ·重组表达载体pGEX-KG-Vis表达研究 | 第34页 |
| ·Visfatin融合蛋白SDS-PAGE分析 | 第34页 |
| 3 结果 | 第34-40页 |
| ·猪肠系膜脂肪总RNA提取结果与分析 | 第34-35页 |
| ·猪visfatin编码区克隆结果与分析 | 第35-37页 |
| ·PCR扩增结果 | 第35页 |
| ·T载体连接鉴定结果 | 第35页 |
| ·测序鉴定结果 | 第35-36页 |
| ·核酸序列和氨基酸序列分析结果 | 第36-37页 |
| ·猪visfatin真核表达载体构建结果与分析 | 第37-38页 |
| ·重组菌PCR筛选与初步鉴定 | 第37页 |
| ·重组质粒酶切鉴定 | 第37页 |
| ·重组质粒测序鉴定 | 第37-38页 |
| ·猪visfatin原核表达载体构建结果与分析 | 第38-39页 |
| ·重组质粒PCR鉴定 | 第38页 |
| ·重组质粒酶切鉴定 | 第38页 |
| ·重组质粒测序鉴定 | 第38-39页 |
| ·猪visfatin原核表达与表达菌株筛选结果 | 第39页 |
| ·猪visfatin原核表达条件优化结果与分析 | 第39-40页 |
| ·IPTG诱导浓度优化结果 | 第39页 |
| ·诱导时间优化结果 | 第39-40页 |
| ·Visfatin重组载体pGEX-KG-Vis高效表达条件 | 第40页 |
| 4 讨论 | 第40-43页 |
| ·关于猪visfatin基因的克隆 | 第40-41页 |
| ·关于猪visfatin真核表达载体构建与原核表达 | 第41-43页 |
| 第三章 猪抵抗素基因克隆表达与多克隆抗体制备 | 第43-55页 |
| 1 目的和意义 | 第43页 |
| 2 材料和方法 | 第43-48页 |
| ·材料 | 第43-44页 |
| ·主要溶液配制 | 第43-44页 |
| ·引物设计 | 第44页 |
| ·方法 | 第44-48页 |
| ·RNA提取与RT-PCR | 第44页 |
| ·猪抵抗素编码区克隆 | 第44-45页 |
| ·重组载体pGEX-KG-Rest构建 | 第45-46页 |
| ·抵抗素融合蛋白诱导表达与表达株筛选 | 第46页 |
| ·重组表达载体pGEX-KG-Rest表达条件研究 | 第46-47页 |
| ·猪抵抗素融合蛋白SDS-PAGE分析 | 第47页 |
| ·猪抵抗素融合蛋白包涵体提取与纯化 | 第47-48页 |
| ·猪抵抗素多克隆抗体制备 | 第48页 |
| 3 结果 | 第48-53页 |
| ·猪肠系膜脂肪总RNA提取结果与分析 | 第48页 |
| ·猪抵抗素编码区克隆结果与分析 | 第48-49页 |
| ·PCR扩增结果 | 第48页 |
| ·T载体连接鉴定结果 | 第48-49页 |
| ·测序鉴定结果 | 第49页 |
| ·核酸序列和氨基酸序列比对分析结果 | 第49页 |
| ·猪抵抗素原核表达载体构建结果与分析 | 第49-50页 |
| ·重组质粒PCR鉴定 | 第49页 |
| ·重组质粒酶切鉴定 | 第49页 |
| ·重组质粒测序鉴定 | 第49-50页 |
| ·猪抵抗素原核表达与表达菌株筛选结果 | 第50页 |
| ·猪抵抗素原核表达条件优化结果与分析 | 第50-52页 |
| ·不同pH值培养基诱导表达优化结果 | 第50-51页 |
| ·不同诱导温度优化结果 | 第51页 |
| ·不同IPTG诱导浓度优化结果 | 第51页 |
| ·不同诱导时间优化结果 | 第51-52页 |
| ·猪抵抗素重组载体高效表达条件 | 第52页 |
| ·猪抵抗素原核表达蛋白包涵体提取结果 | 第52-53页 |
| ·兔抗猪抵抗素多克隆抗体制备结果 | 第53页 |
| 4 讨论 | 第53-55页 |
| ·关于猪抵抗素基因克隆与表达条件 | 第53-54页 |
| ·关于兔抗猪抵抗素多克隆抗体制备 | 第54-55页 |
| 参考文献 | 第55-62页 |
| 致谢 | 第62页 |
