| 摘要 | 第1-5页 |
| ABSTRACT | 第5-13页 |
| 1 绪论 | 第13-24页 |
| ·概述 | 第13页 |
| ·国内外研究现状 | 第13-24页 |
| ·除虫菊的研究现状与历史 | 第13-16页 |
| ·天然除虫菊酯杀虫特点及作用机理 | 第16-17页 |
| ·除虫菊酯的提取方法 | 第17-19页 |
| ·除虫菊酯检测方法的研究现状 | 第19-23页 |
| ·除虫菊酯的市场发展前景 | 第23-24页 |
| 2 引言 | 第24-28页 |
| ·研究目的 | 第25-26页 |
| ·研究内容和技术路线 | 第26-28页 |
| ·利用反相高效液相色谱分离纯化天然除虫菊酯 6 种单一有效成 分,得到除虫菊酯 6 种单一成分的纯品,纯度达到 99% | 第26页 |
| ·利用反相高效液相色谱半制备柱大量制备天然除虫菊酯 6 种单一 成分的纯品,纯度均达 99% | 第26-27页 |
| ·利用分子偶联机制与有机化学原理制备除虫菊酯6 种单一成分的人工完全抗原，确定6 种成分的分子偶联比 | 第27页 |
| ·利用免疫学原理与 PCR 技术构建天然除虫菊酯 ScFv 单链抗体库 | 第27-28页 |
| 3 材料与方法 | 第28-41页 |
| ·天然除虫菊酯的分离纯化与鉴定 | 第28-29页 |
| ·材料 | 第28页 |
| ·主要仪器 | 第28页 |
| ·主要试剂 | 第28页 |
| ·样品前处理 | 第28页 |
| ·高效液相色谱条件 | 第28页 |
| ·气相色谱-质谱联用仪条件 | 第28-29页 |
| ·反相高效液相色谱半制备柱大量制备天然除虫菊酯六种成分纯品的研究 | 第29页 |
| ·材料、仪器与试剂(与3.1 相同) | 第29页 |
| ·样品前处理 | 第29页 |
| ·高效液相色谱条件 | 第29页 |
| ·气相色谱-质谱联用仪条件 | 第29页 |
| ·天然除虫菊酯人工抗原的合成与鉴定 | 第29-32页 |
| ·实验原理 | 第29-30页 |
| ·材料 | 第30页 |
| ·主要仪器 | 第30-31页 |
| ·主要试剂 | 第31页 |
| ·实验方法 | 第31-32页 |
| ·天然除虫菊酯的免疫与 ScFv 单链抗体库的构建 | 第32-41页 |
| ·实验原理 | 第32页 |
| ·材料 | 第32-33页 |
| ·主要仪器 | 第33页 |
| ·主要试剂 | 第33-34页 |
| ·实验方法 | 第34-35页 |
| ·间接 ELISA 测定血清效价 | 第35-36页 |
| ·脾脏细胞的制备及保存 | 第36-37页 |
| ·脾脏细胞mRNA 的提取 | 第37-38页 |
| ·cDNA 第一链的合成(反转录) | 第38-39页 |
| ·ScFv 单链抗体库的VH、VL 和linker 引物的设计 | 第39页 |
| ·扩增和纯化 VH 和 VL PCR 产物 | 第39-40页 |
| ·Linker 连接片段的PCR 制备 | 第40页 |
| ·抗除虫菊酯 ScFv 单链抗体基因库的构建 | 第40-41页 |
| 4 结果与分析 | 第41-55页 |
| ·反相 HPLC 分离纯化及鉴定天然除虫菊酯 | 第41-46页 |
| ·反相 HPLC 分离天然除虫菊酯条件的确定 | 第41-42页 |
| ·反相 HPLC 分离天然除虫菊酯条件的优化 | 第42页 |
| ·六种成分收集时间的确定及纯度鉴定 | 第42-43页 |
| ·六种成分的 GC-MS 鉴定 | 第43-46页 |
| ·RP-HPLC 半制备柱制备天然除虫菊酯六种成分纯品的研究 | 第46-48页 |
| ·反相 HPLC 半制备柱制备天然除虫菊酯条件的优化 | 第46-47页 |
| ·六种成分收集时间的确定及纯度鉴定 | 第47页 |
| ·六种成分的所得固体量 | 第47-48页 |
| ·六种成分的损失率 | 第48页 |
| ·六种成分的 GC-MS 鉴定 | 第48页 |
| ·除虫菊酯含羧基活性的6 种半抗原与载体蛋白质的偶联与鉴定 | 第48-51页 |
| ·天然除虫菊酯的免疫与 ScFv 单链抗体库的构建 | 第51-55页 |
| ·间接 ELISA 法检测血清效价结果 | 第51-53页 |
| ·脾脏细胞mRNA 的提取结果 | 第53-54页 |
| ·扩增的 VH、VL 与Linker 连接片断的电泳结果 | 第54-55页 |
| 5 讨论 | 第55-59页 |
| ·反相高效液相色谱分离纯化天然除虫菊酯的因素分析 | 第55页 |
| ·RP-HPLC 半制备柱制备天然除虫菊酯纯品的因素分析 | 第55-56页 |
| ·天然除虫菊酯人工抗原的合成与鉴定的因素分析 | 第56-57页 |
| ·构建天然除虫菊酯 ScFv 单链抗体库的因素分析 | 第57-59页 |
| 6 结论与展望 | 第59-61页 |
| ·主要结论 | 第59-60页 |
| ·后续研究工作及展望 | 第60页 |
| ·本研究的创新点 | 第60-61页 |
| 致谢 | 第61-62页 |
| 参考文献 | 第62-68页 |
| 附录 | 第68页 |
| A：作者在攻读硕士学位期间发表的论文目录 | 第68页 |
| B：作者在攻读硕士学文期间申请的专利目录 | 第68页 |
