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橡胶树UBI基因的克隆与表达分析

摘要第1-5页
Abstract第5-10页
1 前言第10-24页
   ·乙烯利与天然橡胶生产第10-13页
     ·乙烯利刺激橡胶树增产及其分子生物学研究第10-12页
     ·乙烯利刺激橡胶树增产的副作用第12-13页
   ·CDNA 差减文库构建及在橡胶树分子生物学研究中的应用第13-15页
     ·利用SSH(suppression subtractive hybridization)技术构建cDNA 差减文库第13页
     ·cDNA 差减文库在解析橡胶树产胶基因中的应用第13-14页
     ·cDNA 差减文库在解析茉莉酸刺激乳管分化和胶乳合成中的应用..第14页
     ·cDNA 差减文库在解析乙烯利刺激橡胶树增产过程中的应用第14-15页
   ·泛素蛋白酶体降解系统研究第15-18页
     ·泛素的结构和功能第15页
     ·泛素-蛋白酶体降解途径第15-17页
     ·泛素蛋白酶体降解系统与乙烯利刺激橡胶树增产第17-18页
   ·本研究的目的和意义第18页
   ·技术路线第18-19页
   ·相关技术图解第19-24页
     ·SSH 技术第19-20页
     ·SMART-RACE 技术第20-24页
2 乙烯利刺条件下橡胶树胶乳差异表达CDNA 文库存的构建与分析(此部分与刘宽灿合作完成)第24-39页
   ·实验材料与试剂第24页
     ·实验材料第24页
     ·菌种和质粒第24页
     ·试剂第24页
   ·实验方法第24-35页
     ·胶乳总RNA 提取第24-25页
     ·RNA 电泳检测第25页
     ·m RNA 的纯化第25-27页
     ·橡胶树胶乳差异表达分析(SSH)第27-35页
   ·结果与分析第35-39页
     ·橡胶树胶乳Total RNA 的提取结果第35-36页
     ·橡胶树胶乳的表达差异SSH 结果第36-39页
3 橡胶树UBI 基因全长CDNA 的克隆、基因结构及其表达分析第39-61页
   ·实验材料与试剂第39页
     ·菌种及质粒第39页
     ·试剂第39页
   ·实验方法第39-51页
     ·胶乳总RNA 提取(参照4.2)第39页
     ·差异片段全长cDNA 克隆第39-44页
     ·Southern 杂交第44-49页
     ·UBI 基因在乙烯刺激后不同时期的表达分析第49-51页
   ·结果与分析第51-61页
     ·NO.84 差异表达基因全长cDNA 序列克隆第51-52页
     ·cDNA 序列及其ORF 分析结果第52-58页
     ·Southern 杂交鉴定基因组中拷贝数第58-59页
     ·半定量PCR 进行初步的表达分析第59-61页
4 一种快速、高效的橡胶树胶乳总RNA 提取方法第61-66页
   ·材料与方法第61页
     ·材料第61页
     ·主要试剂第61页
     ·RNA 提取缓冲液配制第61页
     ·器皿使用及消毒第61页
   ·胶乳总RNA 提取方法及步骤第61-62页
   ·RNA 质量检测第62-63页
     ·普通琼脂糖凝胶电泳分析第62页
     ·紫外分光光度计分析第62页
     ·应用于RT-PCR 检测分析第62-63页
     ·应用于RACE 技术克隆基因第63页
   ·结果与分析第63-66页
     ·RNA 完整性分析第63页
     ·RNA 纯度检测及得率分析第63-64页
     ·RT-PCR 检测第64-65页
     ·应用本方法提取的RNA 可以满足RACE 技术操作的要求第65-66页
5 讨论第66-69页
   ·SSH CDNA 差减文库构建第66页
   ·橡胶树UBI 基因的功能及表达分析第66-67页
   ·橡胶树胶乳总RNA 提取方法的改良第67-69页
6 结论第69-70页
7 参考文献第70-74页
致谢第74页

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