| 摘要 | 第1-4页 |
| Abstract | 第4-9页 |
| 1 绪论 | 第9-18页 |
| ·长春花及其萜类吲哚生物碱研究概况 | 第9-14页 |
| ·长春花基因组学研究 | 第10页 |
| ·影响长春花中萜类吲哚生物碱含量的因素 | 第10-11页 |
| ·长春花TIAs生物合成途径及其关键酶 | 第11-13页 |
| ·长春花中TIAs代谢途径在细胞和组织中的分布 | 第13-14页 |
| ·Gateway技术概况 | 第14-16页 |
| ·Gateway技术的工作原理 | 第15-16页 |
| ·Gateway技术的优缺点 | 第16页 |
| ·Gateway技术的应用 | 第16页 |
| ·研究目的和意义 | 第16-18页 |
| 2 目的基因入门克隆的建立 | 第18-26页 |
| ·材料和方法 | 第18-21页 |
| ·实验材料 | 第18页 |
| ·两步Gateway—PCR法扩增获得目的基因读码框 | 第18-19页 |
| ·目的基因入门克隆的构建 | 第19-20页 |
| ·Colony Cracking—快速检测质粒中插入片段 | 第20页 |
| ·重组入门质粒DNA的提取及酶切鉴定 | 第20-21页 |
| ·PCR检测入门克隆 | 第21页 |
| ·本章小结 | 第21-26页 |
| ·长春花幼苗总RNA的抽提结果 | 第21-22页 |
| ·两步Gateway-PCR结果 | 第22-23页 |
| ·入门克隆的Colony Cracking法检测结果 | 第23-24页 |
| ·入门克隆的PCR检测结果 | 第24页 |
| ·入门克隆的限制性内切酶酶切鉴定结果 | 第24-25页 |
| ·讨论 | 第25-26页 |
| 3 目的蛋白的原核表达和纯化 | 第26-35页 |
| ·实验材料和方法 | 第26-28页 |
| ·实验材料 | 第26页 |
| ·目的基因原核表达克隆的建立 | 第26页 |
| ·目的基因融合蛋白的小量诱导表达 | 第26-27页 |
| ·目的基因融合蛋白的大量表达及蛋白纯化 | 第27页 |
| ·DXR-HIS、SLS-HIS和STR-HIS融合蛋白浓度测定 | 第27-28页 |
| ·本章小结 | 第28-35页 |
| ·表达克隆的限制性内切酶酶切鉴定 | 第28-30页 |
| ·DXR融合蛋白的原核表达及纯化 | 第30-31页 |
| ·SLS融合蛋白的原核表达及纯化 | 第31-33页 |
| ·STR融合蛋白的原核表达及纯化 | 第33-34页 |
| ·讨论 | 第34-35页 |
| 4 TIAs生物合成途径中关键酶的表达特性分析 | 第35-40页 |
| ·实验材料和方法 | 第35-38页 |
| ·实验材料 | 第35-36页 |
| ·引物设计与探针标记 | 第36-37页 |
| ·样品RNA的制备及变性琼脂糖凝胶电泳 | 第37页 |
| ·Northern杂交 | 第37-38页 |
| ·本章小结 | 第38-40页 |
| ·目的基因检测探针的标记合成 | 第38页 |
| ·Northern杂交检测结果 | 第38-39页 |
| ·讨论 | 第39-40页 |
| 结论 | 第40-41页 |
| 参考文献 | 第41-48页 |
| 附录Ⅰ | 第48-49页 |
| 附录Ⅱ | 第49-53页 |
| 附录Ⅲ | 第53-57页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文 | 第57-58页 |
| 致谢 | 第58-59页 |
