| 摘要 | 第1-12页 |
| ABSTRACT | 第12-16页 |
| 缩略词表 | 第16-19页 |
| 第一部分 文献综述 | 第19-42页 |
| 1 牛体细胞克隆技术研究进展 | 第19-22页 |
| 2 体细胞克隆技术应用前景 | 第22-24页 |
| ·高产优质牛扩繁与育种 | 第22页 |
| ·转基因动物和产品生产 | 第22-23页 |
| ·医疗研究中的应用 | 第23-24页 |
| ·生殖生物学基础研究手段 | 第24页 |
| 3 体细胞克隆技术主要技术环节 | 第24-29页 |
| ·供体细胞制备 | 第25页 |
| ·受体细胞制备 | 第25-27页 |
| ·重构胚构建 | 第27页 |
| ·重构胚激活 | 第27-28页 |
| ·胚胎培养 | 第28页 |
| ·胚胎移植 | 第28-29页 |
| 4 影响体细胞克隆技术的因素 | 第29-41页 |
| ·供体细胞 | 第29-33页 |
| ·细胞类型 | 第29-30页 |
| ·细胞体外培养时间 | 第30-31页 |
| ·细胞周期同步化 | 第31-33页 |
| ·受体细胞 | 第33-39页 |
| ·卵母细胞的体外成熟培养 | 第33-35页 |
| ·卵母细胞成熟特征 | 第34-35页 |
| ·影响卵母细胞体外成熟的因素 | 第35-38页 |
| ·卵母细胞来源 | 第35页 |
| ·卵泡大小 | 第35-36页 |
| ·卵母细胞类型 | 第36页 |
| ·培养条件 | 第36-37页 |
| ·血清 | 第37-38页 |
| ·卵母细胞成熟调控机制 | 第38-39页 |
| ·重构胚构建 | 第39-41页 |
| ·融合法 | 第39-40页 |
| ·胞质内注射法 | 第40-41页 |
| ·去透明带法 | 第41页 |
| 5 实验目的意义 | 第41-42页 |
| 第二部分 实验研究 | 第42-90页 |
| 1 牛供体细胞生产影响因素研究 | 第42-68页 |
| ·前言 | 第42-43页 |
| ·材料与方法 | 第43-48页 |
| ·主要仪器设备及试剂 | 第43-44页 |
| ·牛颗粒细胞制备 | 第44页 |
| ·牛输卵管上皮细胞制备 | 第44-45页 |
| ·PI染色法检测细胞周期 | 第45页 |
| ·Annexin V/FITC染色法检测细胞凋亡 | 第45页 |
| ·实验设计 | 第45-48页 |
| ·牛颗粒细胞制备因素对细胞周期和细胞凋亡的影响 | 第45-47页 |
| ·牛输卵管上皮细胞制备对细胞周期和细胞凋亡的影响研究 | 第47-48页 |
| ·统计分析 | 第48页 |
| ·实验结果 | 第48-61页 |
| ·牛颗粒细胞制备因素对细胞周期和细胞凋亡的影响 | 第48-55页 |
| ·培养代数对细胞G0/G1的影响 | 第48-49页 |
| ·血清饥饿对细胞G0/G1期的影响 | 第49-50页 |
| ·血清饥饿时间对细胞G0/G1期的影响 | 第50-51页 |
| ·培养代数对细胞凋亡的影响 | 第51页 |
| ·血清饥饿对细胞凋亡的影响 | 第51-52页 |
| ·血清饥饿时间对细胞凋亡的影响 | 第52-53页 |
| ·z-VAD-fmk对不同浓度血清处理细胞产生凋亡的影响 | 第53-54页 |
| ·抗氧化剂对不同浓度血清培养的细胞产生凋亡的影响 | 第54-55页 |
| ·牛输卵管上皮细胞制备因素对细胞周期和细胞凋亡的影响 | 第55-61页 |
| ·培养代数对细胞G0/G1期的影响 | 第55-56页 |
| ·血清饥饿对细胞G0/G1期的影响 | 第56页 |
| ·血清饥饿时间对细胞G0/G1期的影响 | 第56-57页 |
| ·培养代数对细胞凋亡的影响 | 第57-58页 |
| ·血清饥饿对细胞凋亡的影响 | 第58-59页 |
| ·血清饥饿时间对细胞凋亡的影响 | 第59页 |
| ·z-VAD-fmk对不同浓度血清处理细胞产生凋亡的影响 | 第59-60页 |
| ·抗氧化剂对不同浓度血清培养的细胞产生凋亡的影响 | 第60-61页 |
| ·讨论 | 第61-66页 |
| ·体外培养代数和血清饥饿对细胞周期的影响 | 第61-63页 |
| ·体外培养代数和血清饥饿对细胞凋亡的影响 | 第63-64页 |
| ·血清饥饿诱导细胞产生凋亡的可能机理 | 第64-65页 |
| ·抗氧化剂对血清饥饿诱导细胞产生凋亡的影响 | 第65-66页 |
| ·结论 | 第66-68页 |
| 2 牛卵母细胞体外成熟和早期胚胎发育的影响因素研究 | 第68-82页 |
| ·前言 | 第68-69页 |
| ·材料与方法 | 第69-74页 |
| ·主要仪器设备及试剂 | 第69-70页 |
| ·收集卵巢 | 第70页 |
| ·培养液中铁和铜添加浓度的确定 | 第70页 |
| ·卵母细胞的体外成熟培养 | 第70-71页 |
| ·颗粒细胞单层制作 | 第71页 |
| ·体外受精 | 第71页 |
| ·早期胚胎培养 | 第71-72页 |
| ·早期胚胎发育评估 | 第72页 |
| ·细胞凋亡检测 | 第72页 |
| ·培养不同时期培养液中铁和铜浓度测定 | 第72页 |
| ·实验设计 | 第72-74页 |
| ·培养液中添加铁的研究 | 第72-73页 |
| ·培养液中添加铜的研究 | 第73-74页 |
| ·统计分析 | 第74页 |
| ·实验结果 | 第74-79页 |
| ·培养液中添加铁的研究 | 第74-76页 |
| ·铁对牛卵母细胞体外成熟和早期胚胎发育的影响 | 第74页 |
| ·铁对囊胚期细胞凋亡的影响 | 第74-76页 |
| ·培养不同时间培养液中铁浓度变化 | 第76页 |
| ·培养液中添加铜的研究 | 第76-79页 |
| ·铜对牛卵母细胞体外成熟和早期胚胎发育的影响 | 第76-77页 |
| ·铜对囊胚期细胞凋亡的影响 | 第77页 |
| ·培养不同时间培养液中铜浓度变化 | 第77-79页 |
| ·讨论 | 第79-80页 |
| ·结论 | 第80-82页 |
| 3 供体细胞的低渗处理在胞质直接注射体细胞克隆中的研究 | 第82-90页 |
| ·前言 | 第82-83页 |
| ·材料与方法 | 第83-86页 |
| ·主要仪器设备及试剂 | 第83-84页 |
| ·受体卵母细胞收集及其体外成熟培养 | 第84页 |
| ·供体颗粒细胞制备 | 第84页 |
| ·去核和注核 | 第84-85页 |
| ·重构胚激活 | 第85页 |
| ·重构胚培养 | 第85页 |
| ·细胞荧光染色 | 第85页 |
| ·统计分析 | 第85-86页 |
| ·实验结果 | 第86-88页 |
| ·低渗液处理颗粒细胞对重构胚构建的影响 | 第86-88页 |
| ·低渗液处理颗粒细胞对重构胚生长发育的影响 | 第88页 |
| ·讨论 | 第88-89页 |
| ·结论 | 第89-90页 |
| 总体结论 | 第90-91页 |
| 参考文献 | 第91-109页 |
| 附表 | 第109-110页 |
| 附图 | 第110-112页 |
| 致谢 | 第112页 |
