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油菜花粉谷蛋白酶解肽的制备及其抗肿瘤活性研究

摘要第1-15页
ABSTRACT第15-18页
缩略语表第18-19页
第一章 综述:花粉及活性肽的研究进展第19-56页
 1 花粉的研究进展第19-42页
   ·花粉的研究历史第20-21页
   ·花粉的生理功能第21-35页
     ·降血脂和抗动脉粥样硬化作用第21-24页
     ·增强免疫功能第24-27页
     ·降血糖第27-30页
     ·抗衰老作用第30-31页
     ·抑制前列腺疾病第31-33页
     ·花粉与美容养颜第33-34页
     ·其它生理功能第34-35页
   ·油菜花粉资源第35-36页
   ·油菜花粉的生理功能第36-37页
     ·油菜花粉与前列腺疾病第36页
     ·油菜蜂花粉多糖抗肿瘤作用的研究第36-37页
     ·油菜蜂花粉黄酮类物质的抗氧化性研究第37页
     ·油菜花粉抗衰老功能药理研究第37页
   ·制约花粉利用的因素及今后发展的方向第37-40页
     ·灭菌问题第37-38页
     ·感官质量问题第38页
     ·服用剂量的问题第38页
     ·乳化问题第38-39页
     ·破壁论与不破壁论第39页
     ·油菜花粉的过敏问题第39-40页
   ·蜂花粉中的生物活性肽研究现状第40-41页
   ·进一步全面开发利用花粉资源及发展趋势第41-42页
 2. 植物源生物活性多肽的研究进展第42-55页
   ·生物活性肽的来源第43页
   ·蛋白质原料的选择第43-44页
   ·蛋白酶及酶的选择第44-46页
   ·酶法生产存在的问题及解决办法第46-47页
     ·存在的问题第46页
     ·解决办法第46-47页
   ·生物活性肽的提取、分离和纯化第47-49页
     ·酶法制备生物活性肽过程第47-48页
     ·活性肽的分离和分析检验技术第48-49页
   ·生物活性肽的摄入与吸收原理第49-53页
     ·消化道对肽吸收的阻碍作用第50-51页
     ·肽的吸收机制第51-53页
   ·肽吸收的影响因素第53-54页
   ·促进肽吸收的方法第54-55页
     ·肽的定点释放技术第54页
     ·延长肽在吸收位点的滞留时间第54页
     ·蛋白酶抑制剂和吸收增强剂的使用第54-55页
     ·肽结构的修饰第55页
 3 本研究的目的及研究内容第55-56页
第二章 油菜花粉蛋白的制备第56-66页
 引言第56页
 1 材料和方法第56-60页
   ·材料第56-57页
     ·实验材料第56-57页
     ·主要试剂第57页
     ·主要仪器第57页
   ·研究方法第57-59页
     ·油菜花粉的破壁第57-58页
     ·油菜花粉的脱脂第58页
     ·等电点沉淀最佳pH值的选择第58-59页
     ·油菜花粉中蛋白的制备第59页
   ·测定方法第59-60页
     ·水分含量测定第59页
     ·蛋白质的测定第59页
     ·脂肪的测定第59页
     ·还原糖的测定第59页
     ·维生素C的测定第59-60页
     ·微量元素的测定第60页
     ·破壁脱脂后的油菜花粉各组分蛋白含量的测定第60页
 2 结果与分析第60-65页
   ·油菜花粉的破壁第60-61页
     ·温差破壁法第60页
     ·蒜汁酶破壁法第60-61页
     ·两种破壁方法的破壁率比较第61页
   ·水分含量第61-62页
   ·破壁对新、陈油菜花粉主要营养成分的影响第62页
   ·微量元素的测定分析第62-63页
   ·原料花粉样品的确定第63页
   ·等电点沉淀最佳pH的选择第63-65页
     ·清蛋白等电点沉淀最佳pH的选择第63-64页
     ·球蛋白等电点沉淀最佳pH的选择第64页
     ·醇溶蛋白等电点沉淀最佳pH的选择第64页
     ·碱溶蛋白等电点沉淀最佳pH的选择第64-65页
   ·破壁脱脂后油菜花粉中蛋白质组分分析第65页
 3 讨论第65-66页
第三章 油菜花粉蛋白的理化性质研究及其营养价值评价第66-81页
 引言第66页
 1 材料与方法第66-71页
   ·材料第66-67页
     ·实验材料第66页
     ·主要试剂第66-67页
     ·主要仪器第67页
   ·研究方法第67-70页
     ·破壁脱脂的油菜花粉的制备第67页
     ·油菜花粉中蛋白的提取第67-68页
     ·油菜花粉蛋白功能性质的测定第68-69页
     ·油菜花粉蛋白·OH抑制率的测定第69页
     ·油菜花粉蛋白的氨基酸分析第69-70页
     ·油菜花粉蛋白的营养价值评价第70页
   ·目的蛋白的提取研究第70-71页
 2 结果与分析第71-80页
   ·油菜花粉蛋白的功能性质第71-73页
     ·吸水性第71页
     ·溶解性第71-72页
     ·吸油性第72页
     ·乳化能力和乳化稳定性第72-73页
   ·花粉蛋白抗氧化活性比较第73-74页
   ·油菜花粉蛋白氨基酸的分析第74-77页
     ·清蛋白、球蛋白、谷蛋白氨基酸的分析第74-75页
     ·氨基酸比值系数法评价结果第75-77页
   ·花粉中目的蛋白的提取研究第77-80页
     ·单因子实验分析第77-79页
     ·L_9(4~3)正交试验第79-80页
 3 讨论第80-81页
第四章 油菜花粉谷蛋白酶解肽的制备研究第81-101页
 引言第81-82页
 1 材料与方法第82-88页
   ·材料第82-83页
     ·实验材料第82页
     ·主要试剂第82-83页
     ·主要仪器第83页
   ·测定方法第83-84页
     ·蛋白含量的测定第83页
     ·游离氨基酸含量的测定第83页
     ·蛋白酶的酶活力测定第83-84页
     ·酶解液水解度(DH)的测定第84页
     ··OH抑制率的测定第84页
   ·研究方法第84-88页
     ·油菜花粉碱溶谷蛋白的制备第84页
     ·蛋白的酶解反应第84-85页
     ·蛋白酶的选择第85页
     ·单因素酶解试验第85页
     ·对底物浓度、温度和pH值的响应面实验第85-86页
     ·柱层折分离蛋白酶解物第86-87页
     ·酶解肽的抗氧化活性研究第87页
     ·酶解肽各级分的紫外光谱第87页
     ·酶解肽各级分的红外光谱第87页
     ·酶解肽的单糖组成分析第87-88页
 2 结果与分析第88-100页
   ·蛋白酶的确定第88页
   ·单因素试验第88-91页
     ·底物浓度对酶解的影响第88-89页
     ·加酶量的影响第89页
     ·pH的影响第89-90页
     ·酶解时间的影响第90页
     ·温度的影响第90-91页
   ·响应面实验第91-93页
   ·谷蛋白及酶解肽中氨基酸组成分析第93-95页
   ·谷蛋白在酶解前后的抗氧化活性比较第95-96页
   ·酶解肽的分离纯化第96页
   ·花粉谷蛋白酶解肽的基本理化性质第96-100页
     ·多肽各级分中蛋白质和总糖含量分析第96-97页
     ·酶解肽的抗氧化活性研究第97页
     ·多肽的紫外光谱第97-98页
     ·肽各级分的红外光谱第98-99页
     ·PRPG的气相色谱分析第99-100页
 3 讨论第100-101页
第五章 油菜花粉谷蛋白酶解肽的抗氧化活性第101-112页
 引言第101页
 1 材料和方法第101-105页
   ·实验材料第101-102页
     ·实验样品第101页
     ·实验动物第101-102页
     ·主要试剂第102页
     ·主要仪器第102页
   ·实验方法第102-105页
     ·PRPG还原能力的测定第102-103页
     ·PRPG清除·OH效果的测定第103-104页
     ·PRPG对H_2O_2诱导小鼠RBC氧化溶血的影响第104页
     ·PRPG对小鼠RBC自氧化溶血的影响第104页
     ·PRPG对小鼠RBC生成MDA的影响第104页
     ·PRPG对小鼠肝匀浆体外生成MDA的影响第104-105页
     ·PRPG对小鼠肝线粒体脂质过氧化的影响第105页
     ·PRPG在小鼠体内的抗氧化作用第105页
     ·统计学分析第105页
 2 结果与分析第105-111页
   ·PRPG在化学体系中的抗氧化活性第105-107页
     ·PRPG的还原能力第105-106页
     ·PRPG清除·OH的效果第106-107页
   ·PRPG在生物体系中的抗氧化活性第107-111页
     ·PRPG对H_2O_2诱导小鼠红细胞(RBC)氧化溶血的影响第107-108页
     ·PRPG对小鼠红细胞(RBC)自氧化溶血的影响第108页
     ·PRPG对小鼠RBC生成MDA的影响第108-109页
     ·PRPG对小鼠肝匀浆体外生成MDA的影响第109页
     ·PRPG对小鼠肝线粒体肿胀度的影响第109-110页
     ·PRPG在小鼠体内的抗氧化作用第110-111页
 3 讨论第111-112页
第六章 油菜花粉谷蛋白酶解肽抗肿瘤活性研究第112-135页
 引言第112-113页
 1 材料和方法第113-119页
   ·材料及仪器第113-115页
     ·实验样品第113页
     ·实验动物第113页
     ·肿瘤细胞株第113页
     ·其它材料第113-114页
     ·主要试剂第114页
     ·主要仪器第114-115页
   ·体外抑瘤实验方法第115-116页
     ·肿瘤细胞准备第115页
     ·PRPG对瘤细胞体外生长的抑制实验第115-116页
   ·体内抑瘤实验第116-119页
     ·S180细胞的小鼠体内传代培养第116页
     ·S180肿瘤鼠模型的建立第116页
     ·实验方法第116页
     ·PRPG体内抑瘤作用第116页
     ·PRPG对荷瘤鼠免疫功能的影响第116-118页
     ·PRPG对荷瘤鼠抗氧化能力的影响第118页
     ·PRPG与环磷酰胺抗癌活性和毒性的影响第118-119页
     ·PRPG对荷瘤小鼠外周血象的影响第119页
     ·PRPG对荷瘤鼠组织形态的影响第119页
     ·统计方法第119页
 2 结果与分析第119-134页
   ·PRPG的体外抑瘤作用第119-121页
     ·PRPG对瘤细胞体外生长抑制实验第119-120页
     ·PRPG对肿瘤细胞生长抑制作用的显微镜观察第120-121页
   ·PRPG的体内抑瘤作用第121-122页
   ·PRPG对荷瘤鼠免疫功能的影响第122-125页
     ·PRPG对荷瘤鼠免疫器官的影响第122页
     ·PRPG对荷瘤鼠迟发型超敏反应(DTH)的影响第122-123页
     ·PRPG对荷瘤鼠单核巨噬细胞功能的影响第123-124页
     ·PRPG对荷瘤鼠NK细胞活性的影响第124页
     ·PRPG对荷瘤鼠脾淋巴细胞转化实验的影响第124-125页
     ·PRPG对荷瘤小鼠血清溶血素形成的影响第125页
   ·PRPG对荷瘤鼠抗氧化能力的影响第125-127页
     ·PRPG对荷瘤小鼠血清MDA的影响第125-126页
     ·PRPG对荷瘤小鼠血清GSH-Px活性的影响第126页
     ·PRPG对荷瘤小鼠血清SOD活性的影响第126-127页
     ·PRPG对荷瘤小鼠血清LDH活性的影响第127页
   ·PRPG与环磷酰胺合用的效果第127-128页
     ·对环磷酰胺抗肿瘤活性的影响第127-128页
     ·对荷瘤小鼠各脏器的影响第128页
   ·PRPG对荷瘤小鼠外周血象的影响第128-129页
     ·对白细胞的影响第128-129页
     ·对红细胞、血红蛋白、血小板的影响第129页
   ·PRPG对荷瘤鼠组织形态的影响第129-134页
     ·肿瘤第129页
     ·肝第129-130页
     ·脾第130页
     ·肾第130-134页
 3 讨论第134-135页
第七章 油菜花粉蛋白酶解肽对荷瘤鼠脾细胞因子分泌及其mRNA表达的影响第135-144页
 引言第135页
 1 材料和方法第135-139页
   ·材料及仪器第135-136页
     ·实验样品第135页
     ·实验动物与肿瘤细胞株第135页
     ·主要试剂第135-136页
     ·主要仪器第136页
   ·方法第136-139页
     ·动物分组及处理第136页
     ·脾细胞培养第136-137页
     ·TNF-a活性测定第137页
     ·IL-2和IL-6活性测定第137页
     ·mRNA的抽提第137页
     ·逆转录(RT)反应合成cDNA第137-138页
     ·引物设计第138页
     ·PCR扩增第138-139页
     ·PCR产物定量第139页
   ·数据统计分析第139页
 2 结果与分析第139-142页
   ·PRPG对荷瘤鼠脾细胞分泌细胞因子TNF-a的影响第139-140页
   ·PRPG对荷瘤鼠脾细胞分泌细胞因子IL-2的影响第140-141页
   ·PRPG对荷瘤鼠脾细胞分泌细胞因子IL-6的影响第141-142页
 3 讨论第142-144页
第八章 结论第144-146页
参考文献第146-155页
致谢第155-156页
附录第156-159页

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