| 摘要 | 第1-4页 |
| Abstract | 第4-10页 |
| 1 引言 | 第10-23页 |
| ·人偏肺病毒概述 | 第10-17页 |
| ·人偏肺病毒分类地位 | 第10页 |
| ·HMPV 基本特征 | 第10-11页 |
| ·流行病学特征 | 第11-14页 |
| ·致病机理 | 第14-15页 |
| ·症状和病理变化 | 第15-16页 |
| ·诊断及疫苗开发 | 第16-17页 |
| ·HMPV 的分子生物学 | 第17-20页 |
| ·HMPV 作为活病毒疫苗载体研究进展 | 第20页 |
| ·反向遗传操作技术 | 第20-23页 |
| ·正链 RNA 病毒的反向遗传操作 | 第21页 |
| ·负链 RNA 病毒的反向遗传操作 | 第21-22页 |
| ·双链 RNA 病毒的反向遗传操作 | 第22页 |
| ·反向遗传学技术的应用 | 第22-23页 |
| ·本研究目的和意义 | 第23页 |
| 2 实验部分 | 第23-56页 |
| ·实验一、表达绿色荧光蛋白的重组人偏肺病毒的构建和拯救 | 第23-41页 |
| ·材料 | 第23-24页 |
| ·主要试剂和仪器 | 第23-24页 |
| ·细胞系 | 第24页 |
| ·质粒 | 第24页 |
| ·引物 | 第24页 |
| ·方法 | 第24-30页 |
| ·表达 EGFP 重组 HMPV 全长基因组克隆的构建 | 第24-26页 |
| ·转染质粒的准备 | 第26页 |
| ·病毒的拯救 | 第26-27页 |
| ·救获病毒的鉴定 | 第27-28页 |
| ·重组病毒rHMPV NL/1/99-EGFP 的遗传稳定性 | 第28页 |
| ·重组病毒的滴定 | 第28页 |
| ·重组病毒生长动力学测定 | 第28页 |
| ·温度对重组病毒的影响 | 第28-29页 |
| ·免疫实验 | 第29页 |
| ·中和实验 | 第29页 |
| ·救获病毒的纯化 | 第29页 |
| ·纯化病毒的鉴定 | 第29-30页 |
| ·结果 | 第30-40页 |
| ·表达 EGFP 重组 HMPV 全长基因组克隆的构建 | 第30-32页 |
| ·从cDNA 克隆拯救感染性重组 HMPV | 第32-33页 |
| ·救获病毒的鉴定 | 第33-35页 |
| ·重组病毒rHMPV NL/1/99-EGFP 的遗传稳定性 | 第35-36页 |
| ·重组病毒的滴定 | 第36页 |
| ·重组病毒生长动力学测定 | 第36-37页 |
| ·温度对重组病毒的影响 | 第37-38页 |
| ·中和抗体检测 | 第38-39页 |
| ·救获病毒的纯化 | 第39页 |
| ·纯化病毒的鉴定 | 第39-40页 |
| ·讨论 | 第40-41页 |
| ·实验二、rHMPV NL/1/99-EGFP 和 rHMPV NL/1/00-EGFP 在 BALB/c 小鼠体内的 致病性试验 | 第41-50页 |
| ·材料 | 第41-42页 |
| ·试剂和仪器 | 第41页 |
| ·细胞株和病毒株 | 第41-42页 |
| ·实验动物 | 第42页 |
| ·方法 | 第42-44页 |
| ·病毒的纯化 | 第42页 |
| ·纯化病毒滴度的测定 | 第42页 |
| ·病毒接种 | 第42-43页 |
| ·病毒分离 | 第43页 |
| ·分离病毒滴度的测定 | 第43-44页 |
| ·分离病毒的鉴定 | 第44页 |
| ·病理学检查 | 第44页 |
| ·结果 | 第44-49页 |
| ·纯化病毒滴度的测定 | 第44页 |
| ·病毒接种 | 第44页 |
| ·BALB/c 小鼠感染重组病毒后的一般情况 | 第44-45页 |
| ·分离病毒滴度的测定 | 第45-46页 |
| ·分离病毒的鉴定 | 第46-47页 |
| ·分离病毒的病理学观察 | 第47-49页 |
| ·讨论 | 第49-50页 |
| ·实验三、rHMPV NL/1/99-EGFP 和 rHMPV NL/1/00-EGFP 在细胞上的选择性生长 | 第50-56页 |
| ·材料 | 第50页 |
| ·试剂和仪器 | 第50页 |
| ·细胞系和病毒株 | 第50页 |
| ·方法 | 第50-51页 |
| ·rHMPV NL/1/99-EGFP 和 rHMPV NL/1/00-EGFP 在不同细胞上的滴度 | 第50-51页 |
| ·两株重组病毒在各细胞上的生长特性 | 第51页 |
| ·接种于不同细胞的病毒在同一细胞上的滴度 | 第51页 |
| ·结果 | 第51-55页 |
| ·rHMPV NL/1/99-EGFP 和 rHMPV NL/1/00-EGFP 在不同细胞上的滴度 | 第51-52页 |
| ·两株重组病毒在各细胞上的生长特性 | 第52-54页 |
| ·接种于不同细胞的病毒在同一细胞上测定的滴度 | 第54-55页 |
| ·讨论 | 第55-56页 |
| 3 结论 | 第56-57页 |
| 致谢 | 第57-58页 |
| 参考文献 | 第58-64页 |
| 附录 | 第64-71页 |
| 作者简介 | 第71页 |
