| 本论文的创新性研究工作 | 第1-7页 |
| 中文摘要 | 第7-9页 |
| ABSTRACT | 第9-11页 |
| 1 前言 | 第11-19页 |
| ·干扰素的研究概况 | 第11-12页 |
| ·干扰素的分类、一般特性和生物学活性 | 第11-12页 |
| ·干扰素抗病毒作用的机制 | 第12页 |
| ·家禽干扰素核酸疫苗的研究进展 | 第12-13页 |
| ·实时荧光定量PCR技术 | 第13-16页 |
| ·核酸疫苗的免疫方式 | 第16-17页 |
| ·关于鸭瘟病毒 | 第17页 |
| ·本实验的研究意义 | 第17-19页 |
| 2 试验材料 | 第19-23页 |
| ·实验动物 | 第19页 |
| ·质粒、菌株与鸭瘟强毒 | 第19页 |
| ·实验仪器与试剂 | 第19-20页 |
| ·实验试剂的配制 | 第20-21页 |
| ·引物与探针 | 第21-23页 |
| ·定量PCR检测pcDNA-SDIFN-α的引物与探针 | 第21-22页 |
| ·定量PCR检测鸭瘟病毒的引物与探针 | 第22-23页 |
| 3 试验方法 | 第23-31页 |
| ·质粒的大量提取与纯化 | 第23-24页 |
| ·质粒的大量提取 | 第23页 |
| ·质粒的纯化 | 第23-24页 |
| ·含pcDNA-SDIFN-α的基因枪子弹的制备 | 第24页 |
| ·实验鸭免疫分组设计 | 第24-25页 |
| ·采样时间与部位 | 第25页 |
| ·TaqMan探针定量PCR检测pcDNA-SDIFN-α方法的建立 | 第25-27页 |
| ·FQ-PCR引物合理性的验证 | 第25页 |
| ·引物与探针的设计 | 第25-26页 |
| ·质粒标准品的制备 | 第26页 |
| ·定量PCR检测pcDNA-SDIFN-α反应条件的建立与优化 | 第26页 |
| ·TaqMan探针定量PCR检测pcDNA-SDIFN-α重复性与特异性检测 | 第26页 |
| ·TaqMan探针定量PCR检测pcDNA-SDIFN-α标准曲线的建立 | 第26-27页 |
| ·TaqMan探针定量PCR检测pcDNA-SDIFN-α线型范围的确定 | 第27页 |
| ·样品处理及样品中模板DNA的提取 | 第27-28页 |
| ·血液样品中pcDNA-SDIFN-α模板的提取 | 第27-28页 |
| ·组织样品中pcDNA-SDIFN-α模板的提取 | 第28页 |
| ·样品中pcDNA-SDIFN-α的检测分析 | 第28页 |
| ·pcDNA-SDIFN-α体内表达产物体外抗DPV强毒效果的研究 | 第28-30页 |
| ·表达产物的提取与预处理 | 第28页 |
| ·鸭瘟种毒TCID50的检测 | 第28-29页 |
| ·抗DPV强毒效果试验设计 | 第29页 |
| ·培养鸭胚成纤维细胞及病毒含量检测 | 第29-30页 |
| ·数据处理 | 第30-31页 |
| 4 结果 | 第31-42页 |
| ·纯化的pcDNA-SDIFN-α鉴定电泳图 | 第31页 |
| ·定量PCR检测干扰素核酸疫苗在鸭体内动态分布规律方法建立 | 第31-36页 |
| ·FQ-PCR引物合理性的验证 | 第31-32页 |
| ·FQ-PCR检测干扰素核酸疫苗方法条件的优化 | 第32-33页 |
| ·FQ-PCR检测干扰素核酸疫苗重复性与特异性 | 第33-34页 |
| ·实时荧光定量PCR标准曲线的建立 | 第34-35页 |
| ·实时荧光定量PCR线性分析 | 第35-36页 |
| ·pcDNA-SDIFN-α免疫后鸭的临床表现 | 第36页 |
| ·实时荧光定量PCR对鸭体内pcDNA-SDIFN-α的定量检测 | 第36-39页 |
| ·pcDNA-SDIFN-α以不同剂量肌肉注射后在鸭体内的动态分布情况 | 第36-38页 |
| ·pcDNA-SDIFN-α以不同剂量基因枪免疫鸭后在鸭体内的动态分布情况 | 第38-39页 |
| ·pcDNA-SDIFN-α鸭体内表达产物在细胞水平上抗鸭瘟强毒能力 | 第39-42页 |
| ·肌肉注射组不同剂量不同时间表达产物抗DPV强毒能力 | 第40-41页 |
| ·基因枪轰击免疫组不同剂量不同时间表达产物抗DPV强毒能力 | 第41-42页 |
| 5 讨论 | 第42-48页 |
| ·选用实时荧光定量PCR检测技术 | 第42页 |
| ·引物的设计 | 第42-43页 |
| ·肌肉注射免疫与疫苗的分布及表达产物抗病毒能力 | 第43页 |
| ·基因枪轰击免疫与疫苗的分布及表达产物抗病毒能力 | 第43-44页 |
| ·pcDNA-SDIFN-α在组织器官中不同时间的分布规律 | 第44-45页 |
| ·研究鸭α-干扰素核酸疫苗及其在免疫鸭体内分布规律的意义 | 第45-46页 |
| ·pcDNA-SDIFN-α在鸭体内表达产物抗病毒能力的研究 | 第46页 |
| ·不同免疫途径表达产物的抗病毒效果 | 第46-48页 |
| 6 结论 | 第48-49页 |
| 参考文献 | 第49-56页 |
| 附 | 第56-68页 |
| 致谢 | 第68-69页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文目录 | 第69页 |
