| 中文摘要 | 第1-7页 |
| 英文摘要(Abstract) | 第7-9页 |
| 缩略词 | 第9-14页 |
| 前言 | 第14-42页 |
| 1.病毒入侵过程中与宿主细胞之间的相互作用网络 | 第14-22页 |
| ·病毒穿膜 | 第14-18页 |
| ·病毒基因的靶向转运 | 第18-20页 |
| ·病毒诱导的信号传导 | 第20-22页 |
| 2.用于研究病毒与宿主蛋白相互作用的方法 | 第22-34页 |
| ·生物物理学方法 | 第22-29页 |
| ·分子生物学方法 | 第29-32页 |
| ·生物信息学方法 | 第32-34页 |
| 3.戊型肝炎病毒 | 第34-40页 |
| ·戊型肝炎病毒的流行 | 第34-35页 |
| ·HEV的生物学特征 | 第35-37页 |
| ·HEV的细胞培养模型研究进展 | 第37-38页 |
| ·HEV衣壳蛋白ORF2上中和表位的研究进展 | 第38-40页 |
| 4.本论文研究的目的与意义 | 第40-42页 |
| 材料与方法 | 第42-69页 |
| 1.材料 | 第42-52页 |
| ·主要仪器 | 第42-43页 |
| ·主要试剂与材料 | 第43-44页 |
| ·试剂 | 第44-45页 |
| ·培养基及常用溶液配制 | 第45-52页 |
| 2.方法 | 第52-69页 |
| ·基因克隆 | 第52-54页 |
| ·重组蛋白的表达与纯化 | 第54-55页 |
| ·蛋白质的透析复性 | 第55页 |
| ·重组蛋白的性质分析方法 | 第55-56页 |
| ·常规细胞生物学实验方法 | 第56-60页 |
| ·蛋白与细胞的吸附检测法 | 第60页 |
| ·酵母双杂交实验方法 | 第60-62页 |
| ·亲合层析操作方法 | 第62-63页 |
| ·二维电泳操作步骤 | 第63-64页 |
| ·基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS) | 第64-66页 |
| ·HepG2细胞中蛋白基因的调取 | 第66-67页 |
| ·免疫共沉淀 | 第67页 |
| ·计算机辅助设计与分析 | 第67-69页 |
| 第一部分 戊型肝炎病毒细胞吸附模型的建立及病毒吸附区域初步研究 | 第69-89页 |
| 结果与分析 | 第69-85页 |
| 1.戊型肝炎病毒细胞吸附模型的建立 | 第69-75页 |
| ·p239阻断HEV对嗜性细胞的感染 | 第69-71页 |
| ·p239对多株细胞系的特异性吸附 | 第71-72页 |
| ·p239对HepG2细胞吸附的特异性 | 第72-75页 |
| 2.病毒与受体结合区域的初步确定 | 第75-85页 |
| ·单抗表位的空间位置关系 | 第75页 |
| ·多株单抗对p239吸附HepG2细胞的阻断 | 第75-76页 |
| ·单抗的Fab段对p239吸附HepG2细胞的阻断 | 第76-77页 |
| ·线性单抗决定族的定位 | 第77页 |
| ·E2重组蛋白多肽对HepG2细胞的吸附 | 第77-78页 |
| ·p239蛋白结合位点缺失突变体的构建与鉴定 | 第78-81页 |
| ·p239及其结合位点突变体△239、233N与HepG2细胞的吸附性 | 第81-84页 |
| ·p239及其结合位点突变体△239、233N对HEV吸附HepG2细胞的影响 | 第84-85页 |
| 讨论 | 第85-89页 |
| 1.p239颗粒-HepG2细胞吸附模型 | 第85-86页 |
| ·p239具有HEV免疫优势表位 | 第85页 |
| ·p239具有HEV与嗜性细胞结合的关键表位 | 第85-86页 |
| 2.HEV与宿主细胞的相互作用区域 | 第86-87页 |
| 3.HEV细胞吸附模型的推测 | 第87-89页 |
| 第二部分 HEV嗜性组织中与HEV衣壳蛋白相互作用蛋白的初步研究 | 第89-116页 |
| 结果与分析 | 第89-107页 |
| 1.酵母双杂交筛选人肝细胞cDNA文库中与HEV衣壳蛋白相互作用蛋白 | 第89-95页 |
| ·构建表达载体BD-E2和AD-E2及酵母表达BD-E2和AD-E2的活性鉴定 | 第89-90页 |
| ·E2的表达对酵母细胞影响的检测 | 第90-91页 |
| ·E2相互作用蛋白的筛选 | 第91-92页 |
| ·生物信息学分析 | 第92-93页 |
| ·阳性克隆的体外验证 | 第93-95页 |
| 2.HepG2细胞中与戊型肝炎病毒衣壳蛋白相互作用蛋白的初步研究 | 第95-99页 |
| ·诱饵蛋白p239-CBP表达后中和表位及颗粒性的鉴定 | 第95-96页 |
| ·HepG2细胞中与p239-CBP相互作用蛋白的获取 | 第96-97页 |
| ·猴肝组织中与p239-CBP相互作用蛋白的获取 | 第97页 |
| ·目的蛋白的MALDI-TOF-MS分析 | 第97-99页 |
| ·生物信息学分析 | 第99页 |
| 3.GRP78/Bip与p239相互作用的进一步验证 | 第99-103页 |
| ·GRP78/Bip基因的获得及GRP78/Bip的真核表达 | 第100页 |
| ·HEV类病毒颗粒p239与GRP78/Bip体外免疫共沉淀 | 第100-101页 |
| ·p239与重组Grp78/Bip可直接相互作用 | 第101-103页 |
| ·GRP78/Bip与p239在细胞内的共定位 | 第103页 |
| 4.HSP90与p239相互作用的验证 | 第103-107页 |
| ·免疫共沉淀验证HSP90与p239的相互作用 | 第103-105页 |
| ·HSP90与p239的细胞共定位 | 第105-107页 |
| 讨论 | 第107-116页 |
| 1.酵母双杂交方法筛选相互作用蛋白 | 第107-110页 |
| ·酵母双杂交系统中诱饵蛋白的选择 | 第107-108页 |
| ·控制酵母双杂交系统高效性,稳定性的一些关键因素 | 第108页 |
| ·对酵母双杂交系统中的阳性与假阳性的认识 | 第108-110页 |
| 2.亲和层析筛选结合蛋白 | 第110-111页 |
| ·-DE和MALDI-TOF MS分离鉴定蛋白 | 第111页 |
| 4.蛋白相互作用的进一步验证 | 第111-112页 |
| 5.肝炎病毒与有丝分裂原激活的蛋白激酶信号传导途径(MAPK) | 第112-114页 |
| 6.热休克蛋白 | 第114-116页 |
| ·热休克蛋白70(HSP70) | 第114-115页 |
| ·热休克蛋白90(HSP90) | 第115-116页 |
| 论文小结与展望 | 第116-117页 |
| 参考文献 | 第117-139页 |
| 致谢 | 第139页 |
