猪A组轮状病毒VP7基因真核表达载体的构建及实验免疫研究
| 中文摘要 | 第1-10页 |
| 英文摘要 | 第10-12页 |
| 第一部分 前言 | 第12-27页 |
| 一 轮状病毒病流行概况 | 第12-13页 |
| 二 病原及流行病学 | 第13-15页 |
| 1 病原 | 第13页 |
| 2 流行病学 | 第13-15页 |
| ·地区血清型分布 | 第13-14页 |
| ·季节性分布 | 第14页 |
| ·年龄分布特点 | 第14-15页 |
| 三 轮状病毒的血清型、抗原转变 | 第15页 |
| ·血清型 | 第15页 |
| ·抗原转变 | 第15页 |
| 四 主要保护性抗原和特性 | 第15-17页 |
| ·VP4 | 第16页 |
| ·VP7 | 第16-17页 |
| ·VP6 | 第17页 |
| 五 关于腹泻机制的研究 | 第17-19页 |
| 六 免疫保护机理的研究 | 第19-24页 |
| ·肠局部黏膜免疫机制 | 第19-20页 |
| ·血清抗体的免疫机制 | 第20-22页 |
| ·细胞免疫机制 | 第22页 |
| ·主动免疫与被动免疫的关系 | 第22-23页 |
| ·小鼠模型研究得到的RV保护机制 | 第23-24页 |
| ·其它非免疫机制 | 第24页 |
| 七 预防及RV疫苗研究现状 | 第24-26页 |
| 1 发展RV疫苗的必要性 | 第24页 |
| 2 RV疫苗研究的现抓状 | 第24-26页 |
| ·传统疫苗 | 第24-25页 |
| ·异源疫苗 | 第25页 |
| ·亚单位疫苗 | 第25页 |
| ·核酸疫苗 | 第25-26页 |
| 八 目的和意义 | 第26-27页 |
| 第二部分 实验内容 | 第27-65页 |
| 实验一 | 第27-42页 |
| 1 材料和方法 | 第27-34页 |
| ·病毒和毒株 | 第27页 |
| ·试剂 | 第27-28页 |
| ·LB培养基的制备 | 第28页 |
| ·溶液的配置 | 第28-29页 |
| ·引物的设计 | 第29页 |
| ·轮状病毒总RNA的提取 | 第29页 |
| ·RT-PCR扩增目的基因 | 第29-30页 |
| ·VP7基因的克隆 | 第30-34页 |
| ·测序鉴定 | 第34页 |
| 2 结果 | 第34-39页 |
| ·轮状病毒的RNA提取 | 第34页 |
| ·RT-PCR扩增 | 第34页 |
| ·目的片段的回收纯化 | 第34-35页 |
| ·重组载体的鉴定 | 第35-39页 |
| 3 讨论 | 第39-42页 |
| ·A组轮状病毒VP7基因的重要作用 | 第39-40页 |
| ·关于DNA聚合酶的的选择 | 第40页 |
| ·关于限制性内切酶的应用 | 第40页 |
| ·目的基因的浓度以及连接温度的选择 | 第40-41页 |
| ·关于基因的克隆 | 第41-42页 |
| 实验二 | 第42-65页 |
| 1 材料与方法 | 第43-50页 |
| ·实验动物 | 第43页 |
| ·实验材料 | 第43页 |
| ·主要试剂 | 第43页 |
| ·细胞培养基 | 第43-44页 |
| ·淋巴细胞转化试剂 | 第44页 |
| ·重组表达载体的构建 | 第44-46页 |
| ·VP7基因真核表达质粒免疫动物与检测 | 第46-50页 |
| 2 结果 | 第50-61页 |
| ·重组表达质粒的鉴定 | 第50页 |
| ·重组质粒的酶切鉴定 | 第50-51页 |
| ·重组表达质粒的PCR鉴定 | 第51页 |
| ·荧光抗体检测结果 | 第51-53页 |
| ·抗体检测 | 第53-54页 |
| ·T淋巴细胞转化实验结果 | 第54-55页 |
| ·细胞因子检测结果 | 第55-61页 |
| 3 讨论 | 第61-65页 |
| ·表达载体的选择 | 第61页 |
| ·重组质粒的纯化 | 第61页 |
| ·关于目的蛋白的表达检测 | 第61-62页 |
| ·VP4和VP7核酸疫苗联合免疫的优点 | 第62-63页 |
| ·研究的目的和意义 | 第63-65页 |
| 第三部分 结论 | 第65-66页 |
| 第四部分 参考文献 | 第66-72页 |
| 第五部分 致谢 | 第72页 |
