| 摘要 | 第1-8页 |
| Abstract | 第8-10页 |
| 第一部分 文献综述 | 第10-24页 |
| 1. 白藜芦醇的研究进展 | 第10-12页 |
| ·白藜芦醇及其理化性质 | 第10页 |
| ·白藜芦醇的药理作用及作用机理 | 第10-11页 |
| ·白藜芦醇的生物合成 | 第11-12页 |
| 2. 白藜芦醇合酶的研究进展 | 第12-18页 |
| ·白藜芦醇合酶及其诱导 | 第12-15页 |
| ·二苯乙烯合酶 | 第12页 |
| ·RS的酶学性质 | 第12-13页 |
| ·RS的诱导 | 第13-15页 |
| ·白藜芦醇合酶基因的研究进展 | 第15-18页 |
| ·白藜芦醇合酶基因的结构 | 第15页 |
| ·葡萄RS基因 | 第15-16页 |
| ·白藜芦醇合成酶基因的转基因技术研究进展 | 第16-17页 |
| ·白藜芦醇合成酶基因在基因转导过程中的异常表达 | 第17-18页 |
| ·PR 10启动子控制下的RS基因表达及白藜芦醇积累 | 第18页 |
| 3. 酵母表达系统的研究进展 | 第18-22页 |
| ·酵母表达系统的优点 | 第19-20页 |
| ·影响酵母表达系统表达和应用的因素 | 第20-22页 |
| ·目的基因的特性 | 第20页 |
| ·启动子选择 | 第20-21页 |
| ·起始密码子 AUG的旁侧序列 | 第21页 |
| ·外源基因拷贝数 | 第21页 |
| ·表达产物的稳定性 | 第21页 |
| ·培养条件 | 第21-22页 |
| 4. 本研究的目的、意义及内容 | 第22-24页 |
| 第二部分 材料和方法 | 第24-41页 |
| 1. 主要试剂及仪器 | 第24-28页 |
| ·基本试剂及生产厂家 | 第24页 |
| ·酶及其它试剂 | 第24页 |
| ·质粒和菌株 | 第24页 |
| ·主要仪器和厂家 | 第24-25页 |
| ·培养基 | 第25-27页 |
| ·酵母培养基母液 | 第25页 |
| ·培养基 | 第25-27页 |
| ·抗生素及激素: | 第27页 |
| ·溶液配方 | 第27-28页 |
| ·质粒提取溶液 | 第27页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞制备溶液 | 第27页 |
| ·植物总DNA提取溶液 | 第27页 |
| ·酵母基因组DNA提取溶液 | 第27-28页 |
| 2. 实验材料 | 第28页 |
| 3. 实验方法 | 第28-41页 |
| ·白藜芦醇合酶基因的克隆 | 第28-32页 |
| ·CTAB法提取葡萄叶片总DNA | 第28页 |
| ·PCR引物的设计 | 第28-29页 |
| ·白藜芦醇合酶基因的扩增 | 第29-30页 |
| ·克隆载体pBS-T/RS的构建 | 第30-31页 |
| ·重组质粒pBS-T/RS的鉴定 | 第31-32页 |
| ·植物表达系统的建立及鉴定 | 第32-36页 |
| ·植物表达载体pBI 121/RS的构建 | 第32-33页 |
| ·植物表达载体pBI 121/RS的鉴定 | 第33-34页 |
| ·根癌农杆菌的的转化及鉴定 | 第34页 |
| ·转基因植物再生体系的建立 | 第34-35页 |
| ·转基因植株的初步鉴定 | 第35页 |
| ·HPLC法测定转基因植株中的Res | 第35-36页 |
| ·酵母表达系统的建立和鉴定 | 第36-41页 |
| ·酵母表达载体pPIC3.5K/RS的构建 | 第36-37页 |
| ·酵母表达载体pPIC3.5K/RS的鉴定 | 第37页 |
| ·毕赤酵母GS115的转化 | 第37-38页 |
| ·酵母重组子的鉴定 | 第38-39页 |
| ·重组酵母的诱导表达试验 | 第39-40页 |
| ·SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳法(SDS-PAGE)定性分析蛋白质 | 第40-41页 |
| 第三部分 结果与分析 | 第41-53页 |
| 1 白藜芦醇合酶基因的克隆 | 第41-46页 |
| ·CTAB法提取葡萄叶片总DNA | 第41页 |
| ·目的基因的扩增 | 第41-42页 |
| ·重组质粒pBS-T/RS的鉴定 | 第42-46页 |
| ·重组质粒pBS-T/RS的PCR及双酶切鉴定 | 第42页 |
| ·重组质粒pBS-T/RS序列测定及分析 | 第42-46页 |
| 2. 植物表达系统的建立及鉴定 | 第46-50页 |
| ·植物表达载体构建过程 | 第46页 |
| ·植物表达载体pBI 121/RS的PCR及双酶切鉴定 | 第46-47页 |
| ·农杆菌LBA4404/RS阳性克隆的PCR鉴定 | 第47-48页 |
| ·转基因植物再生体系的建立 | 第48页 |
| ·转基因植株的初步鉴定 | 第48页 |
| ·HPLC法测定转基因植株中的Res | 第48-50页 |
| 3. 酵母表达系统的建立和鉴定 | 第50-53页 |
| ·酵母表达载体构建过程 | 第50页 |
| ·酵母表达载体pPIC3.5K/RS的PCR及双酶切鉴定 | 第50-51页 |
| ·毕赤酵母GS115转化及鉴定 | 第51-52页 |
| ·SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳法(SDS-PAGE)定性分析蛋白质 | 第52-53页 |
| 第四部分 讨论 | 第53-57页 |
| 1. 转化外植体的成活率 | 第54页 |
| 2. 转基因番茄的筛选 | 第54-55页 |
| 3. 关于重组毕赤酵母 | 第55-57页 |
| ·醇氧化酶强效启动子 | 第55页 |
| ·转化子的筛选 | 第55-56页 |
| ·表达载体与宿主染色体的整合 | 第56-57页 |
| 第五部分 小结 | 第57-58页 |
| 第六部分 参考文献 | 第58-66页 |
| 图版 | 第66-67页 |
| 致谢 | 第67页 |
