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猪瘟病毒E2基因在PK-15细胞中的表达及本体动物的免疫研究

摘要第1-6页
Abstract第6-11页
第一章 猪瘟及猪瘟病毒的研究进展第11-36页
   ·猪瘟的研究进展第11-18页
     ·猪瘟概述第11-12页
     ·猪瘟的流行和分布第12-13页
     ·猪瘟的临床症状和致病机理第13-15页
     ·猪瘟的检测第15-16页
     ·猪瘟的防控第16页
     ·猪瘟的传统疫苗第16-18页
   ·猪瘟病毒的病原学特征及研究进展第18-29页
     ·猪瘟病毒的形态及理化特性第18-19页
     ·猪瘟病毒的基因组结构及研究进展第19-22页
     ·猪瘟病毒的侵入及复制第22-23页
     ·猪瘟病毒的编码蛋白及其功能第23-26页
     ·猪瘟病毒的抗原性第26-27页
     ·猪瘟病毒的进化和遗传分型第27-29页
   ·猪瘟病毒的增殖及细胞培养第29-36页
     ·猪瘟病毒的入侵及增殖第29-31页
     ·猪瘟病毒对宿主细胞的致病机理第31-32页
     ·猪瘟病毒的细胞培养第32-36页
第二章 猪瘟病毒免疫的细胞学研究进展第36-47页
   ·CSFV 与宿主细胞的相互关系第36-37页
   ·CSFV 的免疫反应机制第37-45页
     ·抗体在抗 CSFV 感染中的作用第37-39页
     ·抗 CSFV 的细胞免疫第39-45页
   ·CSFV 的分子生物学及其免疫学性质第45-47页
第三章 新型猪瘟疫苗的研究和应用前景第47-52页
   ·CSFV 基因缺失型弱毒疫苗第47-48页
   ·CSFV 亚单位疫苗第48-49页
   ·CSFV 活载体重组疫苗第49-50页
   ·CSFV DNA 疫苗第50-51页
   ·CSFV 全长感染性cDNA 标记疫苗第51-52页
第四章 猪瘟病毒石门株 E2 基因的克隆与序列分析第52-77页
   ·材料第52-53页
     ·毒株第52-53页
     ·引物的设计与合成第53页
     ·主要试剂第53页
     ·主要仪器第53页
   ·方法第53-57页
     ·RNA 提取第53-54页
     ·RT-PCR 和nPCR第54-55页
     ·琼脂糖凝胶电泳第55页
     ·纯化回收 DNA 片段第55页
     ·纯化产物与pGEM-T Easy 连接第55页
     ·新鲜感受态细胞的制备(CaCl2 法)第55-56页
     ·连接产物的转化第56页
     ·重组质粒的提取第56-57页
     ·重组质粒的鉴定第57页
     ·计算机分析第57页
   ·结果第57-76页
     ·PCR 扩增结果第57-58页
     ·质粒 PCR 及酶切鉴定结果第58页
     ·石门株 E2 基因的核苷酸和相应的氨基酸序列第58-74页
     ·核苷酸和氨基酸序列同源性比较第74-75页
     ·石门株与其他猪瘟毒株的系统关系分析第75-76页
   ·讨论第76页
     ·石门株 CSFV E2 基因核苷酸序列及氨基酸序列的同源性第76页
     ·3 株 CSFV E2 糖蛋白抗原区氨基酸的变异第76页
     ·石门株 CSFV E2 糖蛋白的信号肽序列的分析第76页
   ·小结第76-77页
第五章 逆转录病毒载体介导的猪瘟石门株E2 基因在PK-15 细胞中的表达及动物免疫试验第77-96页
   ·材料第77-79页
     ·主要试剂第77-79页
     ·细胞系第79页
     ·实验动物第79页
     ·质粒第79页
     ·载体和菌株第79页
     ·培养基第79页
     ·主要仪器第79页
   ·方法第79-83页
     ·逆转录病毒表达质粒的构建第79-81页
     ·逆转录病毒假病毒制备第81页
     ·逆转录病毒假病毒侵染 PK-15 细胞及抗性筛选表达细胞第81页
     ·FACS 分析筛选膜表面表达 E2 蛋白的 PK-15 细胞第81-82页
     ·阳性细胞克隆的荧光染色鉴定第82页
     ·表达 E2 囊膜蛋白的 PK-15 细胞免疫 Balb/c 小鼠第82页
     ·小鼠采血及血清分离第82页
     ·小鼠血清抗体的检测第82页
     ·表达猪瘟病毒石门株 E2 蛋白的 PK-15 细胞免疫猪第82页
     ·免疫猪血清抗体的检测及比较第82-83页
     ·动物攻毒试验第83页
   ·结果第83-94页
     ·重组质粒的 PCR 鉴定结果第83页
     ·重组质粒的酶切鉴定结果第83-84页
     ·猪瘟病毒石门株 E2 基因的核苷酸和相应的氨基酸序列第84页
     ·嘌呤霉素筛选假病毒感染的 PK-15 细胞第84-85页
     ·FACS 分析检测表达 E2 囊膜蛋白的 PK-15 细胞第85页
     ·阳性细胞克隆的荧光染色鉴定第85-86页
     ·免疫小鼠血清抗体的 ELISA 检测第86页
     ·免疫猪血清抗体的 ELISA 检测第86页
     ·动物攻毒试验结果第86-94页
   ·讨论第94-95页
   ·小结第95-96页
结论第96-97页
参考文献第97-111页
致谢第111-113页
作者简介第113页

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