| 中文摘要 | 第1-6页 |
| 英文摘要 | 第6-9页 |
| 本论文缩略词表 | 第9-11页 |
| 目录 | 第11-14页 |
| 第一章 前言 | 第14-34页 |
| 第一节 Ca~(2+)信号通路简介 | 第14-23页 |
| 一.引言 | 第14页 |
| 二.Ca~(2+)信号的起始 | 第14-16页 |
| 1.Ca~(2+)通透性通道 | 第15页 |
| 2.通过H~+／Ca~(2+)反转运子或Ca~(2+)／ATP酶介导的胞质环流系统的Ca~(2+)流动 | 第15-16页 |
| 3.CaL~(2+)泵 | 第16页 |
| 二.钙信号的解码 | 第16-20页 |
| 1.钙调素(CaM)及钙调素结合蛋白 | 第17-18页 |
| 2.其他CaM相似的含有EF-Hand的Ca~(2+)结合蛋白 | 第18-19页 |
| 3.Ca~(2+)调节的蛋白激酶 | 第19-20页 |
| 4.不含EF-Hand的Ca~(2+)结合蛋白 | 第20页 |
| 三.钙信号的特异性决定 | 第20-23页 |
| 1.亚型一特异的Ca~(2+)活化机制 | 第21页 |
| 2.磷酸化调节 | 第21页 |
| 3.磷脂调节 | 第21-22页 |
| 4.亚细胞定位和亚型特异的复合体 | 第22-23页 |
| 5.底物特异性 | 第23页 |
| 四.Ca~(2+)信号研究展望 | 第23页 |
| 第二节 植物CPK超家族蛋白激酶 | 第23-32页 |
| 一.引言 | 第23-24页 |
| 二.CPK超家族成员的分类和结构特征 | 第24-25页 |
| 1.钙依赖型蛋白激酶CPK | 第24页 |
| 2.钙调素依赖型蛋白激酶CaMK | 第24-25页 |
| 3.嵌合型钙／钙调素依赖型蛋白激酶CCaMK | 第25页 |
| 4.钙依赖性蛋白激酶相关蛋白激酶CRK | 第25页 |
| 三.CPK超家族成员的生化特征 | 第25-27页 |
| 1.钙依赖型蛋白激酶 | 第25页 |
| 2.钙调素依赖型蛋白激酶 | 第25-26页 |
| 3.钙／钙调素依赖型蛋白激酶CCaMK | 第26页 |
| 4.钙依赖性蛋白激酶相关蛋白激酶CRK | 第26-27页 |
| 四.植物CPK研究进展 | 第27-31页 |
| 1.CPK的酶活性调节 | 第27-29页 |
| 2.调控及生理功能 | 第29-31页 |
| 五.研究展望 | 第31-32页 |
| 第三节 本项研究的目的和意义 | 第32-34页 |
| 第二章 烟草钙依赖型蛋白激酶基因的克隆及序列分析 | 第34-46页 |
| 第一节 前言 | 第34-35页 |
| 第二节 材料和方法 | 第35-36页 |
| 一.文库的筛选 | 第35页 |
| 二.序列的测定 | 第35页 |
| 三.序列的同源性比较 | 第35页 |
| 四.序列的结构分析 | 第35-36页 |
| 第三节 实验结果 | 第36-44页 |
| 一.NtCPK4和NtCPK5序列的分析 | 第36-40页 |
| 二.NtCPK4和NtCPK5同其它蛋白激酶氨基酸序列的比较分析 | 第40-44页 |
| 第四节 讨论 | 第44-46页 |
| 第三章 烟草钙依赖型蛋白激酶体外表达、纯化及酶活分析 | 第46-82页 |
| 第一节 前言 | 第46-47页 |
| 第二节 材料和方法 | 第47-63页 |
| 一.实验材料与质粒图谱 | 第47-48页 |
| 二.NtCPK4和NtCPK5昆虫细胞表达载体构建 | 第48-55页 |
| 三.重组蛋白质的纯化 | 第55-60页 |
| 四.NtCPK4和NtCPK5蛋白激酶酶活分析 | 第60-62页 |
| 五.毛细管电泳分析磷酸化氨基酸 | 第62-63页 |
| 第三节 实验结果 | 第63-77页 |
| 一.NtCPK4的表达纯化以及生化分析 | 第63-69页 |
| 二.NtCPK4磷酸化氨基酸分析 | 第69-71页 |
| 三.NtCPK5的表达纯化以及生化分析 | 第71-77页 |
| 第四节 讨论 | 第77-82页 |
| 一.Sf9细胞的培养及病毒的感染 | 第77-78页 |
| 二.蛋白的纯化 | 第78页 |
| 三.激酶的自磷酸化和底物磷酸化分析 | 第78-79页 |
| 四.酶活常数的测定 | 第79-80页 |
| 五.磷酸化氨基酸的分析 | 第80-82页 |
| 第四章 烟草钙依赖型蛋白激酶表达及功能分析 | 第82-107页 |
| 第一节 前言 | 第82-83页 |
| 第二节 材料和方法 | 第83-94页 |
| 一.烟草基因组DNA的提取 | 第83-84页 |
| 二.Southern Blot | 第84-87页 |
| 三.Northern Blot | 第87-88页 |
| 四.RNA原位杂交分析 | 第88-94页 |
| 第三节 实验结果 | 第94-104页 |
| 一.NtCPK4基因是一个单拷贝基因 | 第94-95页 |
| 二.烟草NtCPK4的表达分析 | 第95-104页 |
| 第四节 讨论 | 第104-107页 |
| 一.RNA原位杂交技术进展 | 第104-105页 |
| 二.NtCPK4参与胁迫信号和激素信号转导 | 第105-107页 |
| 第五章 烟草钙依赖型蛋白激酶的亚细胞定位分析 | 第107-116页 |
| 第一节 前言 | 第107-108页 |
| 第二节 材料和方法 | 第108-111页 |
| 一.载体的构建 | 第108-111页 |
| 二.转化洋葱表皮与荧光观察 | 第111页 |
| 第三节 实验结果 | 第111-114页 |
| 一.NtCPK4和NtCPK5的亚细胞定位特征 | 第111-112页 |
| 二.突变后的NtCPK5／GFP的亚细胞定位特征 | 第112-114页 |
| 第四节 讨论 | 第114-116页 |
| 一.GFP作为小分子标记的优点 | 第114-115页 |
| 二.CPK研究亚细胞定位的进展 | 第115-116页 |
| 第六章 总讨论 | 第116-118页 |
| 第一节 关于CPK基因进化的讨论 | 第116页 |
| 第二节 关于CPK的研究展望 | 第116-118页 |
| 参考文献 | 第118-136页 |
| 附录 | 第136-141页 |
| 在读期间发表及投稿论文 | 第141-142页 |
| 致谢 | 第142页 |
