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IRES序列连接的人GDNF基因和EGFP基因逆转录病毒真核表达载体的构建

中文摘要第1-6页
英文摘要第6-9页
符号说明第9-10页
前言第10-11页
第一部分 目的基因GDNF及pIRES2-EGFP的克隆及测序第11-19页
 (一) 从人神经胶质细胞瘤组织中提取总RNA,反转录cDNA,PCR目的基因片段第11-14页
 (二) 目的基因片段GDNF和EGFP的纯化回收第14页
 (三) 制备感受态细胞第14-15页
 (四) 与T载体连接,转化感受态大肠杆菌DH5α,筛选阳性克隆第15-17页
 (五) 小量抽提质粒,并测量浓度第17-18页
 (六) 目的基因片段GDNF和pIRES2-EGFP测序第18-19页
第二部分 pLXSN-IRES2—EGFP-GDNF双表达载体的构建第19-26页
 (一) pLXSN质粒的双酶切,GDNF及pIRES2—EGFP质粒的酶切第19-21页
 (二) pLXSN、IRES2—EGFP基因片段的连接,酶切鉴定阳性克隆第21-22页
 (三) 中量抽提pLXSN-IRES2-EGFP质粒,并测量浓度和纯度第22-23页
 (四) pLXSN-IRES2—EGFP-GDNF双表达载体的构建第23-25页
 (五) 中量抽提pLXSN-IRES2-EGFP质粒,并测量浓度和纯度第25-26页
第三部分 pLXSN-IRES2-EGFP-GDNF的电转染第26-29页
讨论第29-41页
结论第41-42页
附图第42-53页
参考文献第53-59页
致谢第59-60页
攻读硕士学位期间撰写及发表的学术论文目录第60-61页

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