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烟草花青素合成相关基因及转录因子基因的克隆与功能验证研究

摘要第1-7页
ABSTRACT第7-10页
目录第10-13页
第一章 文献综述第13-31页
   ·花青素的生物合成第13-18页
     ·花青素的化学成分第13-14页
     ·花青素的功能第14页
     ·花青素的合成第14-16页
     ·花青素(类黄酮)生物合成途径的调控第16页
     ·花青素(类黄酮)生物合成途径的代谢工程第16-18页
   ·碱性螺旋-环-螺旋转录因子第18-27页
     ·概述第18-19页
     ·bHLH 蛋白质的基本结构和保守氨基酸序列第19-21页
     ·bHLH 蛋白的转录调控第21-22页
     ·植物 bHLH 蛋白的进化第22-23页
     ·bHLH 蛋白与 MYB 蛋白的互作第23页
     ·植物中的 bHLH 蛋白第23-27页
   ·二氢黄酮醇 4-还原酶第27-29页
     ·概述第27页
     ·DFR 的生化性质第27-28页
     ·DFR 的遗传和调控第28-29页
   ·研究的目的意义第29-31页
第二章 烟草花青素合成相关转录因子基因的克隆与功能验证第31-71页
   ·材料与方法第32-56页
     ·普通烟草 NtAn1 cDNA 的分离与基因克隆第32-38页
     ·普通烟草基因组 NtAn1 基因克隆第38-39页
     ·毛叶烟和拟茸毛烟草 cDNA 和基因组 NtAn1 基因克隆第39-40页
     ·序列比对和进化树分析第40页
     ·NtAn1a 和 NtAn1b 基因的定量 PCR 表达分析第40页
     ·酵母反式激活(单杂交)分析第40-45页
     ·烟草原生质体反式激活分析第45-46页
     ·原生质体分离与电转化第46-49页
     ·基因组步移法分离烟草 NtAn1a 启动子第49-53页
     ·植物表达载体构建和烟草转化第53-54页
     ·花青素含量测定第54-55页
     ·类黄酮途径基因 qPCR 表达分析第55页
     ·酵母双杂交分析第55-56页
     ·原生质体中启动子激活和抑制的效应研究第56页
   ·试验结果第56-68页
     ·NtAn1a 和 NtAn1b cDNA 的克隆与进化树分析第56-58页
     ·NtAn1a 和 NtAn1b 基因起源分析第58-60页
     ·NtAn1a 和 NtAn1b 基因的时空表达第60-61页
     ·NtAn1a 和 NtAn1b 是转录激活因子验证第61-62页
     ·NtAn1 基因过表达与转基因烟草花朵中花青素的积累第62-64页
     ·NtAn1a 和 NtAn1b 对花青素途径基因的调控第64-65页
     ·NtAn1 和 NtAn2 蛋白间的互作第65-67页
     ·普通烟草营养体组织中 NtAn1 的表达与 NtAn2 的诱导第67-68页
     ·NtAn1a 和 NtAn1b 与玉米花青素调节因子 C1 互作研究第68页
   ·讨论第68-71页
第三章 普通烟草二氢黄酮醇-4-还原酶(Dfr)基因克隆及其功能验证第71-82页
   ·材料和方法第71-73页
     ·烟草 Dfr cDNAs 的分离第71-72页
     ·毛叶烟与拟茸毛烟草花朵 Dfr cDNA 的分离第72页
     ·基因产物序列比对及进化树分析第72页
     ·NtDfr 基因表达的定量 PCR 分析第72页
     ·植物表达载体的构建及其在烟草上的转化第72-73页
     ·转基因植株的分子生物学分析第73页
     ·原生质体的分离及电转化第73页
     ·原生质体中启动子激活和抑制效应研究第73页
   ·结果第73-80页
     ·NtDfr1 和 NtDfr2 基因的序列分析第73-74页
     ·烟草 Dfr 基因的时空表达第74页
     ·NtDfr1 和 NtDfr2 基因起源分析第74-77页
     ·转基因烟草过表达 NtDfr 与花朵中花青素的积累第77-78页
     ·RNA 干涉介导的 NtDfr 抑制研究第78-79页
     ·NtDfr 与 NtAn1 和 NtAn2 调控基因的关系第79-80页
   ·讨论第80-82页
第四章 结论与创新点第82-84页
   ·结论第82页
   ·创新点:第82-83页
   ·研究展望第83-84页
参考文献第84-94页
致谢第94-95页
作者简介第95页

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