| 第一章 前言 | 第1-41页 |
| 1 人肝再生增强因子的研究现状 | 第14-27页 |
| 1．1 肝脏的生理作用与肝脏疾病 | 第14-17页 |
| 1．1．1 肝脏的生理作用 | 第14-15页 |
| 1．1．2 肝脏疾病与治疗 | 第15-17页 |
| 1．2 肝再生调控与细胞因子 | 第17-21页 |
| 1．2．1 肝再生的调控机制 | 第17-19页 |
| 1．2．2 促进肝再生的细胞因子 | 第19-21页 |
| 1．3 肝再生增强因子（ALR） | 第21-22页 |
| 1．3．1 新型促肝细胞生长因子—ALR | 第21页 |
| 1．3．2 大鼠ALR生物活性研究 | 第21-22页 |
| 1．4 人肝再生增强因子（HALR）的研究进展 | 第22-27页 |
| 1．4．1 HALR基因与HALR蛋白 | 第22-24页 |
| 1．4．2 RHALR生物活性研究 | 第24-25页 |
| 1．4．3 HALR作用机理研究进展 | 第25-27页 |
| 2 本课题研究内容 | 第27-33页 |
| 2．1 重组人肝再生增强因子的高效表达 | 第27-29页 |
| 2．2 重组人肝再生增强因子的纯化 | 第29-31页 |
| 2．3 重组人肝再生增强因子蛋白质结构及活性分析 | 第31-33页 |
| 3 研究路线 | 第33-35页 |
| 参考文献 | 第35-41页 |
| 第二章 RHALR蛋白发酵表达 | 第41-55页 |
| 引言 | 第41页 |
| 1 材料 | 第41-42页 |
| 1．1 菌株与试剂 | 第41-42页 |
| 1．2 仪器与试剂 | 第42页 |
| 2 方法 | 第42-44页 |
| 2．1 发酵表达RHALR蛋白 | 第42-44页 |
| 2．1．1 种子液制备 | 第42-43页 |
| 2．1．2 发酵表达 | 第43页 |
| 2．1．3 发酵参数控制 | 第43页 |
| 2．1．4 提取包涵体 | 第43-44页 |
| 2．2 分析方法 | 第44页 |
| 2．2．1 菌体密度与重量测定 | 第44页 |
| 2．2．2 RHALR蛋白质表达量测定 | 第44页 |
| 3 结果与分析 | 第44-49页 |
| 3．1 发酵种子液生长曲线测定 | 第44-45页 |
| 3．2 不同培养基对工程菌生长及蛋白表达的影响 | 第45-46页 |
| 3．3 初始葡萄糖浓度对工程菌生长及蛋白表达的影响 | 第46页 |
| 3．4 不同PH值对工程菌生长及蛋白表达的影响 | 第46-47页 |
| 3．5 培养时间对工程菌生长及蛋白表达的影响 | 第47页 |
| 3．6 诱导时间对工程菌生长及蛋白表达的影响 | 第47-48页 |
| 3．7 不同溶氧范围的发酵结果 | 第48-49页 |
| 3．8 包涵体洗涤工艺与包涵体体纯度结果 | 第49页 |
| 4 分析与结论 | 第49-54页 |
| 4．1 发酪表达结果 | 第49-52页 |
| 4．1．1 最佳培养基配比的确定 | 第50-51页 |
| 4．1．2 PH值对工程菌生长及蛋白表达的影响 | 第51页 |
| 4．1．3 培养时间与诱导时间对工程菌生长及蛋白表达的影响 | 第51-52页 |
| 4．1．4 溶氧对发酵结果的影响 | 第52页 |
| 4．2 包涵体提取工艺 | 第52-54页 |
| 参考文献 | 第54-55页 |
| 第三章 包涵体蛋白变性、复性与RHALR蛋白的纯化 | 第55-79页 |
| 引言 | 第55页 |
| 1 材料 | 第55-56页 |
| 1．1 试剂与缓冲液 | 第55-56页 |
| 1．2 仪器设备 | 第56页 |
| 2 方法 | 第56-58页 |
| 2．1 包涵体变性与复性 | 第56-57页 |
| 2．2 离子交换 | 第57页 |
| 2．3 凝胶过滤 | 第57页 |
| 2．4 RHALR蛋白分子量及纯度测定 | 第57页 |
| 2．5 蛋白质浓度测定 | 第57-58页 |
| 2．6 等电点测定 | 第58页 |
| 2．7 氨基酸含量分析 | 第58页 |
| 3 结果 | 第58-73页 |
| 3．1 包涵体蛋白变性与复性 | 第58-62页 |
| 3．1．1 不同变性剂变性实验 | 第58页 |
| 3．1．2 尿素变性包涵体蛋白的复性 | 第58-59页 |
| 3．1．3 盐酸胍浓度与包涵体溶解率 | 第59-60页 |
| 3．1．4 小分子添加剂对蛋白质凝聚的影响 | 第60页 |
| 3．1．5 变性时间对蛋白质复性的影响 | 第60-61页 |
| 3．1．6 蛋白浓度对复性的影响 | 第61-62页 |
| 3．3 RHALR蛋白的分离纯化 | 第62-69页 |
| 3．3．1 离子交换纯化结果 | 第62-67页 |
| 3．3．2 凝胶过滤纯化结果 | 第67-68页 |
| 3．3．3 各阶段纯度变化与收率 | 第68-69页 |
| 3．4 纯化蛋白的鉴定 | 第69-73页 |
| 3．4．1 氨基酸含量分析 | 第69-70页 |
| 3．4．2 纯化蛋白分子量测定 | 第70-71页 |
| 3．4．3 纯化蛋白等电点测定 | 第71-72页 |
| 3．4．5 纯化样品纯度检测 | 第72-73页 |
| 3．4．6 RHALR表观特征与溶解性 | 第73页 |
| 4 分析与结论 | 第73-77页 |
| 4．1 包涵体复性试验 | 第73-74页 |
| 4．2 蛋白质纯化 | 第74-75页 |
| 4．3 纯化蛋白的理化性质 | 第75-77页 |
| 参考文献 | 第77-79页 |
| 第四章 质谱分析 | 第79-101页 |
| 引言 | 第79页 |
| 1 材料 | 第79-80页 |
| 2 方法 | 第80页 |
| 2．1 RHALR分子量测定 | 第80页 |
| 2．2 RHALR蛋白酶解肽段分子量测定 | 第80页 |
| 3 结果 | 第80-87页 |
| 3．1 RHALR蛋白质分子量测定结果 | 第80-82页 |
| 3．2 RHALR蛋白质酶解肽段分子量的测定 | 第82-87页 |
| 4 分析与结论 | 第87-97页 |
| 4．1 尿素对RHALR蛋白质有修饰作用 | 第88-92页 |
| 4．2 RHALR蛋白二聚体二硫键结合情况分析 | 第92-95页 |
| 4．3 质谱结果证明RHALR蛋白C末端序列正确 | 第95-97页 |
| 参考文献 | 第97-101页 |
| 第五章 活性测定 | 第101-118页 |
| 引言 | 第101页 |
| 1 材料 | 第101-102页 |
| 1．1 试验动物与细胞株 | 第101页 |
| 1．2 仪器与试剂 | 第101-102页 |
| 2 方法 | 第102-104页 |
| 2．1 RHALR对四氯化碳致肝损伤小鼠存活率的影响 | 第102页 |
| 2．2 RHALR对四氯化碳致急性肝损伤NIH小鼠肝细胞的修复作用 | 第102页 |
| 2．3 RHALR促HTC肝癌细胞DNA合成作用 | 第102-103页 |
| 2．4 RHALR促NIH3T3细胞线粒体脱氢酶活性作用 | 第103页 |
| 2．5 FAD与RHALR蛋白的体外结合 | 第103-104页 |
| 2．6 RHALR巯基氧化酶活性检测 | 第104页 |
| 3 结果 | 第104-111页 |
| 3．1 RHALR对四氯化碳致肝损伤小鼠存活率的影响 | 第104页 |
| 3．2 RHALR对四氯化碳致肝损伤小鼠肝细胞修复作用 | 第104-107页 |
| 3．3 RHALR促HTC肝癌细胞DNA合成作用 | 第107页 |
| 3．4 RHALR促进NIH3T3细胞线粒体脱氢酶活性作用 | 第107-108页 |
| 3．5 FAD-LINKED RHALR的吸收光谱 | 第108-109页 |
| 3．6 RHALR蛋白巯基氧化酶活性测定 | 第109-110页 |
| 3．7 尿素修饰对RHALR蛋白活性影响 | 第110-111页 |
| 3．8 FAD对RHALR活性的影响 | 第111页 |
| 4 分析与结论 | 第111-116页 |
| 4．1 RHALR具有修复CCL4致急性肝损伤小鼠肝细胞、刺激HTC 肝癌细胞 DNA合成与促进NIH3T3细胞线粒体脱氢酶活性等生物活性 | 第112-113页 |
| 4．2 结合FAD的RHALR具有氧化巯基的活性 | 第113-114页 |
| 4．3 尿素修饰对RHALR活性的影响 | 第114-115页 |
| 4．4 FAD与RHALR活性的关系 | 第115-116页 |
| 参考文献 | 第116-118页 |
| 致谢 | 第118-119页 |
| 缩略词表 | 第119-121页 |
| 作者简历 | 第121页 |
