| 中文摘要 | 第1-7页 |
| 英文摘要 | 第7-9页 |
| 前言 | 第9-27页 |
| 1． 抗菌肽概述 | 第9-10页 |
| 2． 抗菌肽活性及作用机理 | 第10-15页 |
| 3． 抗菌肽的构效关系 | 第15-19页 |
| 4． 抗菌肽基因工程表达及应用现状 | 第19-21页 |
| 5． Magainin、Melittin、Misgurin | 第21-25页 |
| 6． 论文背景、思路及技术路线 | 第25-27页 |
| 第一部分 抗菌肽MAE的高级结构模拟 | 第27-29页 |
| 第二部分 表达载体pPIC9K-mae的构建及基因在毕赤酵母中的表达 | 第29-53页 |
| 一、 实验材料 | 第29-32页 |
| 二、 实验方法 | 第32-45页 |
| 1． PCR扩增目的融合基因mae-intein-cbd | 第32-34页 |
| 2． 回收产物的酶切、纯化、浓缩 | 第34-35页 |
| 3． 质粒pPIC9K的提取、酶切、去磷酸化 | 第35-37页 |
| 4． 外源基因和载体的连接 | 第37页 |
| 5． E．coli感受态细胞的制备 | 第37页 |
| 6． 转化 | 第37-38页 |
| 7． 重组子的鉴定 | 第38-39页 |
| 8． 重组质粒导入酵母 | 第39-41页 |
| 9． 高拷贝整合转化子的筛选 | 第41页 |
| 10． 表达菌株基因组DNA的提取 | 第41-42页 |
| 11． 阳性转化子的PCR检测 | 第42页 |
| 12． 外源基因在酵母中的表达与检测 | 第42-43页 |
| 13． 表达条件的优化 | 第43-44页 |
| 14． 表达产物的纯化 | 第44-45页 |
| 15． 纯化产物抗菌活性检测 | 第45页 |
| 三、 实验结果 | 第45-53页 |
| 1． 表达载体pPIC9K-mae的构建与鉴定 | 第45-46页 |
| 2． 转化酵母重组蛋白的表达 | 第46-52页 |
| 3． 纯化产物抗菌活性的检测 | 第52-53页 |
| 第三部分 表达载体pPIC9K-mmis的构建及初步表达 | 第53-66页 |
| 一、 实验材料 | 第53-54页 |
| 二、 实验方法 | 第54-60页 |
| 1． 基因和接头的的设计和合成 | 第54页 |
| 2． misgurin基因的串连 | 第54-58页 |
| 3． 质粒pPIC9K的制备 | 第58页 |
| 4． 质粒、连接片段的EcoRⅠ、NotⅠ限制性消化、质粒的去磷酸化以及与连接片段的连接和转化 | 第58页 |
| 5． 重组子的PCR鉴定及测序鉴定 | 第58-59页 |
| 6． 重组质粒导入酵母 | 第59页 |
| 7． 阳性转化子的PGR检测 | 第59-60页 |
| 8． 外源基因在酵母中的表达与检测 | 第60页 |
| 三、 实验结果 | 第60-66页 |
| 1． 多拷贝misgurin基因重组质粒的构建 | 第60-61页 |
| 2． 基因和接头的连接 | 第61页 |
| 3． 转化子的PCR鉴定及测序 | 第61-62页 |
| 4． 转化酵母重组蛋白的表达 | 第62-66页 |
| 第四部分 讨论 | 第66-77页 |
| 1． 抗菌肽的结构模拟 | 第66页 |
| 2． 表达系统的选择 | 第66-68页 |
| 3． 融合基因mae-intein-cbd的PCR扩增 | 第68-69页 |
| 4． 表达载体的构成 | 第69-71页 |
| 5． 表达载体与宿主染色体的整合 | 第71-72页 |
| 6． 外源基因在甲醇营养型酵母中的分泌表达 | 第72-74页 |
| 7． 影响外源基因表达量的因素 | 第74-75页 |
| 8． Misgurin的多拷贝串连 | 第75-77页 |
| 小结 | 第77-78页 |
| 参考文献 | 第78-85页 |
| 附录 | 第85-87页 |
| 致谢 | 第87页 |
