| 摘要 | 第1-4页 |
| Abstract | 第4-9页 |
| 第一章 前言 | 第9-22页 |
| ·肿瘤的血管生成 | 第9-10页 |
| ·肿瘤血管生成抑制因子 | 第10-11页 |
| ·鲨鱼血管生成抑制因子 | 第11页 |
| ·鲨鱼软骨抗肿瘤活性成分及其相关机制 | 第11-13页 |
| ·鲨鱼软骨活性物质对肿瘤新生血管的抑制作用 | 第12页 |
| ·鲨鱼软骨活性物质对免疫功能的调节作用 | 第12-13页 |
| ·鲨鱼软骨活性物质对肿瘤细胞的杀伤效应 | 第13页 |
| ·SUMO 融合蛋白系统 | 第13-15页 |
| ·融合蛋白技术 | 第13-14页 |
| ·SUMO 蛋白简介 | 第14页 |
| ·SUMO 融合蛋白系统优势 | 第14-15页 |
| ·SUMO 融合蛋白系统应用 | 第15页 |
| ·高效液相色谱技术及其应用 | 第15-16页 |
| ·血管生成的相关信号通路 | 第16-19页 |
| ·VEGF-VEGFR 信号通路 | 第16-17页 |
| ·Ang-Tie 信号通路 | 第17-18页 |
| ·Dll4-Notch 信号通路 | 第18-19页 |
| ·表达谱芯片技术及其应用 | 第19-20页 |
| ·本研究主要内容及技术路线 | 第20-22页 |
| ·研究内容 | 第20-21页 |
| ·本研究技术路线 | 第21-22页 |
| 第二章 实验材料及仪器 | 第22-28页 |
| ·材料 | 第22-26页 |
| ·细胞株、质粒及菌株 | 第22页 |
| ·主要试剂与试剂盒 | 第22-23页 |
| ·层析填料及 HPLC 高效液相色谱柱 | 第23-24页 |
| ·常用缓冲液及配方 | 第24-26页 |
| ·仪器及设备 | 第26-28页 |
| 第三章 实验方法 | 第28-40页 |
| ·工程菌 BL21/PET-3C/ASAIF-SUMO 发酵罐培养条件的优化 | 第28-29页 |
| ·工程菌 BL21/PET-3C/aSAIF-SUMO 的制备 | 第28页 |
| ·发酵罐培养准备工作 | 第28页 |
| ·工程菌 BL21/PET-3C/aSAIF-SUMO 发酵罐培养生长曲线 | 第28-29页 |
| ·工程菌 BL21/PET-3C/aSAIF-SUMO 发酵罐培养条件优化 | 第29页 |
| ·ASAIF 蛋白中试纯化工艺摸索 | 第29-33页 |
| ·菌体破碎上清液的获取 | 第29页 |
| ·Q Sepharose 线性洗脱梯度摸索 | 第29-30页 |
| ·Q Sepharose 分步洗脱梯度确立 | 第30页 |
| ·Q Sepharose 载量摸索 | 第30页 |
| ·Ni Sepharose FF 亲和层析 | 第30-31页 |
| ·融合蛋白 His6-SUMO-aSAIF 的 sumo 酶切 | 第31页 |
| ·aSAIF 蛋白的纯化 | 第31页 |
| ·aSAIF 超滤脱盐及冻干 | 第31-32页 |
| ·BCA 法蛋白浓度测定 | 第32页 |
| ·融合蛋白半定量灰度扫描 | 第32页 |
| ·SDS-PAGE 电泳 | 第32-33页 |
| ·HPLC 检测融合蛋白方法的建立 | 第33-36页 |
| ·融合蛋白在不同介质上的高效液相色谱行为探索 | 第33-36页 |
| ·融合蛋白 aSAIF-SUMO 特征洗脱峰鉴定 | 第36页 |
| ·两种样品溶液下的融合蛋白检测 | 第36页 |
| ·菌体破碎上清中融合蛋白的检测 | 第36页 |
| ·ASAIF 蛋白活性及功能鉴定 | 第36-40页 |
| ·HUVEC 细胞培养 | 第36-37页 |
| ·WST-8 增殖抑制实验 | 第37页 |
| ·细胞凋亡及周期检测 | 第37-38页 |
| ·人源基因表达谱芯片检测 | 第38-39页 |
| ·IPA 生物信息学分析 | 第39-40页 |
| 第四章 结果与分析 | 第40-67页 |
| ·工程菌 BL21/PET-3C/ASAIF-SUMO 发酵罐培养条件的优化 | 第40-42页 |
| ·工程菌 BL21/PET-3C/aSAIF-SUMO 生长曲线 | 第40-41页 |
| ·工程菌 BL21/PET-3C/aSAIF-SUMO 发酵罐培养条件优化 | 第41-42页 |
| ·重组 ASAIF 中试纯化工艺摸索 | 第42-50页 |
| ·融合蛋白 His6-SUMO-aSAIF 的纯化 | 第42-46页 |
| ·融合蛋白 His6-SUMO-aSAIF 的酶切 | 第46-48页 |
| ·ASAIF 纯化工艺得率分析 | 第48-50页 |
| ·HPLC 检测融合蛋白方法的建立 | 第50-59页 |
| ·融合蛋白 aSAIF-SUMO 在不同介质上的高效液相色谱行为探索 | 第50-55页 |
| ·融合蛋白 aSAIF-SUMO 特征洗脱峰鉴定 | 第55-56页 |
| ·两种样品溶液下的融合蛋白检测情况 | 第56-58页 |
| ·菌体破碎上清中融合蛋白的检测情况 | 第58-59页 |
| ·ASAIF 蛋白活性及功能鉴定 | 第59-67页 |
| ·WST-8 细胞增殖实验 | 第59页 |
| ·细胞凋亡及周期检测 | 第59-61页 |
| ·人源全基因表达谱芯片检测 | 第61-67页 |
| 第五章 讨论 | 第67-73页 |
| ·工程菌高密度发酵优化策略 | 第67-68页 |
| ·ASAIF 纯化工艺优化策略 | 第68-69页 |
| ·ASAIF 纯化工艺得率分析 | 第69页 |
| ·HPLC 检测融合蛋白方法的建立 | 第69-70页 |
| ·ASAIF 抑制血管生成机制初探 | 第70-73页 |
| 第六章 总结和展望 | 第73-74页 |
| ·总结 | 第73页 |
| ·展望 | 第73-74页 |
| 参考文献 | 第74-80页 |
| 附录 | 第80-81页 |
| 硕士期间发表论文 | 第81-82页 |
| 致谢 | 第82页 |
