| 中文摘要 | 第1-13页 |
| 第一章 文献综述 | 第13-53页 |
| 1．1 利用转基因技术进行植物遗传改良 | 第13-23页 |
| 1．1．1 利用转基因技术获得的植物性状改良 | 第14-21页 |
| 1．1．1．1 抗虫性 | 第14-15页 |
| 1．1．1．2 抗菌性 | 第15-16页 |
| 1．1．1．3 抗病毒性 | 第16-17页 |
| 1．1．1．4 抗除草剂特性 | 第17-18页 |
| 1．1．1．5 抗逆性 | 第18-19页 |
| 1．1．1．6 品质改善 | 第19页 |
| 1．1．1．7 雄性不育性 | 第19-20页 |
| 1．1．1．8 改善发育状况 | 第20-21页 |
| 1．1．1．9 改善观赏性 | 第21页 |
| 1．1．1．10 提高产量 | 第21页 |
| 1．1．2 转基因技术与常规育种手段的关系 | 第21-22页 |
| 1．1．3 植物转基因品种与传统育种品种的基因安全等同性 | 第22-23页 |
| 1．2 禾谷类作物转基因研究概况 | 第23-25页 |
| 1．3 小麦基因工程研究进展 | 第25-42页 |
| 1．3．1 小麦转基因研究概况 | 第25-27页 |
| 1．3．2 小麦遗传转化的主要方法及其问题 | 第27-34页 |
| 1．3．2．1 基因枪法 | 第27-29页 |
| 1．3．2．2 农杆菌法 | 第29-32页 |
| 1．3．2．3 花粉管通道法 | 第32-34页 |
| 1．3．3 基因表达调控元件的作用及载体构建策略 | 第34-37页 |
| 1．3．3．1 启动子 | 第34-35页 |
| 1．3．3．2 终止子 | 第35页 |
| 1．3．3．3 内含子 | 第35-36页 |
| 1．3．3．4 Ω和Kozak序列 | 第36页 |
| 1．3．3．5 poly（A）序列 | 第36页 |
| 1．3．3．6 表达载体的构建策略 | 第36-37页 |
| 1．3．4 转化体的筛选 | 第37-38页 |
| 1．3．4．1 筛选标记基因的选用及其筛选策略 | 第37-38页 |
| 1．3．4．2 利用目的性状直接进行筛选 | 第38页 |
| 1．3．5 外源基因的表达与遗传 | 第38-41页 |
| 1．3．5．1 基因沉默 | 第38-39页 |
| 1．3．5．2 外源基因在转基因植株中的表达 | 第39-40页 |
| 1．3．5．3 外源基因在转基因植株后代中的遗传 | 第40-41页 |
| 1．3．6 问题与展望 | 第41-42页 |
| 1．4 小麦抗虫育种 | 第42-52页 |
| 1．4．1 小麦虫害的严重性 | 第42-43页 |
| 1．4．2 利用转基因技术创造小麦抗虫新种质 | 第43页 |
| 1．4．3 雪花莲外源凝集素基因 | 第43-47页 |
| 1．4．3．1 植物凝集素概述 | 第43-44页 |
| 1．4．3．2 雪花莲外源凝集素的结构性质 | 第44-46页 |
| 1．4．3．3 雪花莲外源凝集素基因在植物基因工程中的应用 | 第46-47页 |
| 1．4．4 Bt杀虫晶体蛋白基因 | 第47-52页 |
| 1．4．4．1 Bt杀虫基因研究概况 | 第47-48页 |
| 1．4．4．2 Bt杀虫晶体蛋白的结构性质和杀虫机理 | 第48-50页 |
| 1．4．4．3 Bt杀虫基因在植物基因工程中的应用 | 第50-52页 |
| 1．5 本研究的目的和意义 | 第52-53页 |
| 第二章 sgna及GFM cryIA基因小麦高效表达载体的构建 | 第53-74页 |
| 2．1 材料与方法 | 第54-59页 |
| 2．1．1 材料 | 第54-55页 |
| 2．1．1．1 菌株 | 第54页 |
| 2．1．1．2 基础质粒 | 第54页 |
| 2．1．1．3 人工合成的寡核苷酸片段 | 第54页 |
| 2．1．1．4 试剂 | 第54-55页 |
| 2．1．2 方法 | 第55-59页 |
| 2．1．2．1 细菌培养用基本培养基 | 第55页 |
| 2．1．2．1．1 LB培养基 | 第55页 |
| 2．1．2．1．2 YEB培养基 | 第55页 |
| 2．1．2．2 载体的构建与鉴定 | 第55-59页 |
| 2．1．2．2．1 质粒DNA的小量提取 | 第55-56页 |
| 2．1．2．2．2 DNA的限制性酶切反应 | 第56页 |
| 2．1．2．2．3 目的DNA片段的电泳回收 | 第56-57页 |
| 2．1．2．2．4 线状DNA的去磷酸化 | 第57页 |
| 2．1．2．2．5 粘端连接 | 第57页 |
| 2．1．2．2．6 大肠杆菌感受态细胞的制备 | 第57-58页 |
| 2．1．2．2．7 质粒DNA转化大肠杆菌 | 第58页 |
| 2．1．2．2．8 转化子的快速筛选（Cracking Screen） | 第58页 |
| 2．1．2．2．9 农杆菌感受态细胞的制备 | 第58页 |
| 2．1．2．2．10 重组质粒转入农杆菌菌株LBA4404细胞 | 第58-59页 |
| 2．2 结果与分析 | 第59-73页 |
| 2．2．1 基础质粒的酶切图谱及鉴定 | 第59-63页 |
| 2．2．1．1 pAHC 20的鉴定 | 第59-60页 |
| 2．2．1．2 pG4AB的鉴定 | 第60-61页 |
| 2．2．1．3 pG4AS8的鉴定 | 第61-62页 |
| 2．2．1．4 pBll21．1的鉴定 | 第62-63页 |
| 2．2．2 质粒载体的构建、鉴定及其酶切图谱 | 第63-73页 |
| 2．2．2．1 植物表达载体pGU4ABBar的构建过程 | 第63页 |
| 2．2．2．2 中间载体pGU4AB的筛选鉴定 | 第63-64页 |
| 2．2．2．3 植物表达载体pGU4ABBar的筛选鉴定 | 第64-66页 |
| 2．2．2．4 植物表达载体pGU4AGBar的构建过程 | 第66-67页 |
| 2．2．2．5 中间载体pGGNA的筛选鉴定 | 第67-68页 |
| 2．2．2．6 中间载体pGU4AG的筛选鉴定 | 第68-69页 |
| 2．2．2．7 植物表达载体pGU4AGBar的筛选鉴定 | 第69-70页 |
| 2．2．2．8 植物表达载体pGBIU4AGBar的构建过程 | 第70-71页 |
| 2．2．2．9 中间载体pGBIUBar的筛选鉴定 | 第71-72页 |
| 2．2．2．10 植物表达载体pGBIU4AGBar的筛选鉴定 | 第72-73页 |
| 2．3 小结 | 第73-74页 |
| 第三章 利用农杆菌介导法将gna基因导入小麦的初步研究 | 第74-87页 |
| 3．1 材料与方法 | 第75-83页 |
| 3．1．1 材料 | 第75-76页 |
| 3．1．1．1 小麦材料 | 第75页 |
| 3．1．1．2 质粒 | 第75页 |
| 3．1．1．3 菌株 | 第75页 |
| 3．1．1．4 试剂 | 第75页 |
| 3．1．1．5 人工合成的寡核苷酸片段 | 第75-76页 |
| 3．1．2 方法 | 第76-83页 |
| 3．1．2．1 小麦组织培养用相关培养基 | 第76-77页 |
| 3．1．2．1．1 基本培养基MS_0和N_6 | 第76页 |
| 3．1．2．1．2 诱导培养基MSD | 第76页 |
| 3．1．2．1．3 高渗培养基MSH | 第76-77页 |
| 3．1．2．1．4 共培养培养基MSC | 第77页 |
| 3．1．2．1．5 筛选培养基MSDS | 第77页 |
| 3．1．2．1．6 分化培养基MSS | 第77页 |
| 3．1．2．1．7 壮苗培养基N_6S | 第77页 |
| 3．1．2．2 小麦的转化与鉴定 | 第77-83页 |
| 3．1．2．2．1 小麦外植体的准备 | 第77页 |
| 3．1．2．2．2 农杆菌的准备 | 第77页 |
| 3．1．2．2．3 农杆菌介导的小麦遗传转化方案 | 第77-78页 |
| 3．1．2．2．4 植物叶片DNA的提取 | 第78页 |
| 3．1．2．2．5 PCR鉴定 | 第78-79页 |
| 3．1．2．2．6 Southern bolt转膜方法 | 第79页 |
| 3．1．2．2．7 Southern杂交 | 第79-80页 |
| 3．1．2．2．8 蛋白质SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳 | 第80-81页 |
| 3．1．2．2．9 Western bolt鉴定 | 第81-83页 |
| 3．2 结果与分析 | 第83-86页 |
| 3．2．1 转基因小麦再生植株的获得 | 第83-85页 |
| 3．2．1．1 遗传转化的不同处理设置及其再生植株的获得 | 第83-84页 |
| 3．2．1．2 转化植株的PCR检测 | 第84-85页 |
| 3．2．1．3 转化植株的Southern杂交鉴定 | 第85页 |
| 3．2．2 转基因小麦植株的GNA蛋白表达 | 第85-86页 |
| 3．3 小结 | 第86-87页 |
| 第四章 利用基因枪介导法将gna基因及cry IA基因导入小麦 | 第87-96页 |
| 4．1 材料与方法 | 第87-91页 |
| 4．1．1 材料 | 第87-88页 |
| 4．1．1．1 小麦材料 | 第87-88页 |
| 4．1．1．2 质粒 | 第88页 |
| 4．1．1．3 菌株 | 第88页 |
| 4．1．1．4 试剂 | 第88页 |
| 4．1．1．5 人工合成的寡核苷酸片段 | 第88页 |
| 4．1．2 方法（前文述及者略） | 第88-91页 |
| 4．1．2．1 质粒DNA的大量制备及纯化 | 第88-89页 |
| 4．1．2．1．1 质粒DNA的大量制备 | 第88-89页 |
| 4．1．2．1．2 质粒DNA的PEG纯化 | 第89页 |
| 4．1．2．2 小麦的转化与鉴定 | 第89-91页 |
| 4．1．2．2．1 基因枪介导的小麦遗传转化方案 | 第89-91页 |
| 4．1．2．2．2 cry I A基因的PCR鉴定 | 第91页 |
| 4．2 结果与分析 | 第91-95页 |
| 4．2．1 转基因小麦再生植株的获得 | 第91-94页 |
| 4．2．1．1 遗传转化的不同处理设置及其再生植株的获得 | 第91-92页 |
| 4．2．1．2 转化植株的PCR检测 | 第92-93页 |
| 4．2．1．3 转化植株的Southern杂交鉴定 | 第93-94页 |
| 4．2．2 转基因小麦植株中目的基因的表达 | 第94-95页 |
| 4．2．2．1 转基因植株的GNA蛋白表达 | 第94页 |
| 4．2．2．2 转基因植株的Cry I A蛋白表达 | 第94-95页 |
| 4．3 小结 | 第95-96页 |
| 第五章 利用花粉管通道法将gna基因及cry I A基因导入小麦 | 第96-104页 |
| 5．1 材料与方法 | 第96-98页 |
| 5．1．1 材料 | 第96-97页 |
| 5．1．1．1 小麦材料 | 第96页 |
| 5．1．1．2 质粒 | 第96-97页 |
| 5．1．1．3 菌株 | 第97页 |
| 5．1．1．4 试剂 | 第97页 |
| 5．1．2 方法（前文述及者略） | 第97-98页 |
| 5．1．2．1 花粉管通道法介导的小麦遗传转化方案 | 第97页 |
| 5．1．2．2 Southern dot bolt转膜方法 | 第97-98页 |
| 5．2 结果与分析 | 第98-103页 |
| 5．2．1 转基因小麦植株的获得 | 第98-102页 |
| 5．2．1．1 遗传转化的不同处理设置及其种子的获得和除草剂筛选 | 第98页 |
| 5．2．1．2 除草剂抗性植株的PCR鉴定 | 第98-99页 |
| 5．2．1．3 PCR阳性植株的Southern鉴定 | 第99-102页 |
| 5．2．2 转基因小麦植株中目的基因的表达 | 第102-103页 |
| 5．2．2．1 转基因植株中GNA蛋白的表达 | 第102页 |
| 5．2．2．2 转基因植株中Cry I A蛋白的表达 | 第102-103页 |
| 5．3 小结 | 第103-104页 |
| 第六章 讨论 | 第104-109页 |
| 6．1 高渗预处理对农杆菌转化的影响 | 第104-106页 |
| 6．2 金粉用量对基因枪转化效率的影响 | 第106页 |
| 6．3 质粒大小对转化效率的影响 | 第106-107页 |
| 6．4 载体构建策略及其对目的基因表达的影响 | 第107页 |
| 6．5 正确估价花粉管通道法在小麦遗传转化中的地位 | 第107-108页 |
| 6．6 利用转基因技术创造小麦新种质的可行性 | 第108-109页 |
| 第七章 结论 | 第109-110页 |
| 7．1 农杆菌介导法的优化 | 第109页 |
| 7．2 基因枪介导法参数的优化 | 第109页 |
| 7．3 花粉管通道法在小麦遗传转化中的价值 | 第109页 |
| 7．4 新载体的获得 | 第109-110页 |
| 参考文献 | 第110-123页 |
| 个人简介 | 第123-125页 |
| 致谢 | 第125页 |
