| 中文摘要 | 第1-6页 |
| 英文摘要 | 第6-12页 |
| 前言 | 第12-32页 |
| 1 研究的目的和意义 | 第12-13页 |
| 2 文献综述 | 第13-32页 |
| 2．1 植物遗传转化研究进展 | 第13-23页 |
| 2．1．1 植物遗传转化的应用范围 | 第13页 |
| 2．1．1．1 植物转化是植物生理学的实验工具 | 第13页 |
| 2．1．1．2 植物转化是植物品种改良的实用手段 | 第13页 |
| 2．1．2 植物外源基因表达的工具 | 第13-20页 |
| 2．1．2．1 植物表达载体 | 第14页 |
| 2．1．2．2 报告基因 | 第14-15页 |
| 2．1．2．3 选择标记基因 | 第15-17页 |
| 2．1．2．4 植物组织特异表达启动子 | 第17-20页 |
| 2．1．3 植物遗传转化方法 | 第20-23页 |
| 2．1．3．1 农杆菌介导法 | 第20-21页 |
| 2．1．3．2 直接导入法 | 第21-23页 |
| 2．2 抗虫植物基因工程研究进展 | 第23-26页 |
| 2．2．1 用于植物转化的抗虫基因 | 第23-26页 |
| 2．2．1．1 苏云金芽孢杆菌杀虫晶体蛋白（Bt）基因 | 第24-25页 |
| 2．2．1．2 蛋白酶抑制剂基因 | 第25页 |
| 2．2．1．3 淀粉酶抑制剂基因 | 第25页 |
| 2．2．1．4 凝集素基因 | 第25-26页 |
| 2．2．2 抗虫转基因植物 | 第26页 |
| 2．3 大豆遗传转化研究进展 | 第26-32页 |
| 2．3．1 用于大豆遗传转化的再生系统 | 第27-29页 |
| 2．3．1．1 大豆体细胞胚胎发生再生系统 | 第27-28页 |
| 2．3．1．2 大豆器官发生再生系统 | 第28页 |
| 2．3．1．3 原生质体再生系统 | 第28-29页 |
| 2．3．2 大豆遗传转化方法 | 第29-32页 |
| 2．3．2．1 农杆菌介导法 | 第29页 |
| 2．3．2．2 基因枪（粒子轰击）法 | 第29-30页 |
| 2．3．2．3 原位转化法 | 第30-32页 |
| 材料和方法 | 第32-44页 |
| 1 植物材料 | 第32页 |
| 2 菌株及植物转化载体 | 第32-33页 |
| 3 细菌的转化 | 第33页 |
| 4 大豆转化 | 第33-39页 |
| 4．1 农杆菌介导法 | 第33-35页 |
| 4．1．1 菌液制备 | 第33-34页 |
| 4．1．2 外植体制备及转化程序 | 第34页 |
| 4．1．3 大豆子叶节再生系统优化 | 第34-35页 |
| 4．1．4 选择剂适宜浓度筛选 | 第35页 |
| 4．1．5 大豆基因型筛选 | 第35页 |
| 4．1．6 其它因子的优化 | 第35页 |
| 4．2 花粉管通道法 | 第35-39页 |
| 4．2．1 质粒DNA的提取 | 第35-37页 |
| 4．2．2 导入方法 | 第37页 |
| 4．2．3 后代筛选方法 | 第37-39页 |
| 4．2．3．1 GUS检测 | 第37页 |
| 4．2．3．2 PCR筛选 | 第37-38页 |
| 4．2．3．3 选择剂筛选 | 第38-39页 |
| 4．2．4 大豆自花授粉和开花时间的观察 | 第39页 |
| 4．2．5 大豆花粉萌发及花粉管通道形成过程的观察 | 第39页 |
| 5 转基因植株的检测 | 第39-43页 |
| 5．1 DNA提取 | 第39-40页 |
| 5．2 PCR扩增及扩增产物回收和纯化 | 第40页 |
| 5．3 探针标记 | 第40页 |
| 5．4 PCR-Southern杂交 | 第40-42页 |
| 5．4．1 电泳和转膜 | 第40-41页 |
| 5．4．2 预杂交和杂交 | 第41-42页 |
| 5．4．3 DAB显色 | 第42页 |
| 5．5 Southern杂交 | 第42-43页 |
| 6 被转基因的表达和遗传 | 第43-44页 |
| 结果与分析 | 第44-66页 |
| 1 农杆菌介导法转化大豆的研究 | 第44-57页 |
| 1．1 大豆子叶节再生系统的优化 | 第44-46页 |
| 1．2 大豆基因型筛选 | 第46-47页 |
| 1．3 不同选择剂用于大豆子叶节转化的适宜浓度 | 第47-48页 |
| 1．4 感染和共培养时间对转化频率的影响 | 第48-49页 |
| 1．5 乙酰丁香酮浓度和pH对大豆转化频率的影响 | 第49-51页 |
| 1．6 外植体预培养对大豆转化频率的影响 | 第51-53页 |
| 1．7 大豆子叶节转化的效果和转基因植株的获得 | 第53-55页 |
| 1．8 T_0代转基因植株的检测 | 第55页 |
| 1．9 T_1代转基因株系的鉴定及被转基因的遗传 | 第55-57页 |
| 1．10 被转基因的表达 | 第57页 |
| 2 花粉管通道法转化大豆的研究 | 第57-66页 |
| 2．1 花粉管通道法转化大豆的结果 | 第57-59页 |
| 2．2 花粉管通道法转化大豆后代筛选方法的探索 | 第59-61页 |
| 2．2．1 PCR筛选 | 第59-60页 |
| 2．2．1．1 微量样品研磨器的效果 | 第59页 |
| 2．2．1．2 两种提取缓冲液的效果比较 | 第59-60页 |
| 2．2．1．3 不同温度和处理时间对大豆模板DNA质量的影响 | 第60页 |
| 2．2．1．4 小结 | 第60页 |
| 2．2．2 选择剂喷洒筛选 | 第60-61页 |
| 2．3 大豆花粉管通道转化法的优化 | 第61-66页 |
| 2．3．1 大豆自花受粉和开花时间的观察结果 | 第61-62页 |
| 2．3．2 大豆花蕾开花前外部形态的观察 | 第62-63页 |
| 2．3．3 大豆花粉管发育及花粉管通道形成过程的观察 | 第63-64页 |
| 2．3．4 小结 | 第64-66页 |
| 讨论 | 第66-70页 |
| 1 关于大豆的遗传转化方法 | 第66-67页 |
| 2 大豆农杆菌介导转化的主要障碍及克服途径 | 第67-68页 |
| 3 原位转化法与大豆转化 | 第68页 |
| 4 大豆花粉管通道转化法的主要影响因素 | 第68-69页 |
| 5 关于大豆花粉管通道转化法DNA导入的最佳时期 | 第69页 |
| 6 关于大豆花粉管通道转化法的后代筛选策略 | 第69-70页 |
| 结论 | 第70-72页 |
| 参考文献 | 第72-91页 |
| 图版说明 | 第91-93页 |
| 图版 | 第93-98页 |
| 致谢 | 第98-99页 |
| 在读期间发表的主要论文 | 第99页 |
