| 致谢 | 第1-5页 |
| 摘要 | 第5-6页 |
| ABSTRACT | 第6-8页 |
| 目次 | 第8-10页 |
| 第一章 引言 | 第10-29页 |
| 1 稻瘟病与稻瘟病菌 | 第10-22页 |
| ·稻瘟病菌的侵染循环 | 第10-13页 |
| ·稻瘟病菌附着胞形成的相关基因及调控途径 | 第13-22页 |
| 2 植物细胞内的Ca~(2+)信号途径 | 第22-26页 |
| ·细胞的钙转移系统 | 第22-25页 |
| ·钙信号的产生、终止和传递途径 | 第25-26页 |
| 3 真菌细胞内的Ca~(2+)信号途径 | 第26-27页 |
| 4 本研究的目的和意义 | 第27-29页 |
| 第二章 材料与方法 | 第29-48页 |
| 1 CMK、PLA2和PLC基因的确定与序列比对 | 第29页 |
| 2 实验材料 | 第29-31页 |
| ·细菌菌株以及稻瘟病菌菌株 | 第29页 |
| ·培养基配制 | 第29-31页 |
| ·菌株的保存与培养 | 第31页 |
| 3 DNA相关操作 | 第31-43页 |
| ·常规PCR、长片段PCR(>4kb) | 第31-33页 |
| ·PCR产物的克隆 | 第33-34页 |
| ·序列测定 | 第34页 |
| ·DNA克隆程序 | 第34-39页 |
| ·基因组DNA提取 | 第39-40页 |
| ·Southern杂交 | 第40-43页 |
| 4 CMK、PLA2和PLC基因敲除及突变子功能分析 | 第43-45页 |
| ·基因置换载体的构建 | 第43页 |
| ·互补载体的构建 | 第43页 |
| ·稻瘟病菌原生质体的制备与转化 | 第43-45页 |
| 5 CMK、PLA2和PLC基因的GFP表达分析 | 第45页 |
| ·融合载体的构建 | 第45页 |
| ·稻瘟病菌eGFP转化子的荧光观察 | 第45页 |
| 6 稻瘟病菌突变体的形态学观察 | 第45-48页 |
| ·生长速度与产孢量 | 第45-46页 |
| ·附着胞的诱导 | 第46页 |
| ·附着胞膨压的测定 | 第46页 |
| ·水稻(大麦)叶片致病性测定 | 第46-47页 |
| ·稻瘟病菌的有性杂交 | 第47-48页 |
| 第三章 CMK基因的克隆与功能分析 | 第48-61页 |
| 1 CMK基因的克隆和序列分析 | 第48-49页 |
| 2 CMK基因敲除载体的构建及目标置换过程 | 第49-51页 |
| ·载体构建思路 | 第49-51页 |
| ·基因的目标置换过程 | 第51页 |
| 3 △CMK突变子的获得 | 第51-52页 |
| 4 △CMK互补载体的构建 | 第52-53页 |
| 5 突变体△CMK表型分析 | 第53-58页 |
| ·突变体△CMK的菌落形态和生长速度 | 第53-54页 |
| ·交配试验 | 第54页 |
| ·突变体△CMK的产孢量 | 第54-55页 |
| ·孢子萌发和附着胞形成 | 第55-56页 |
| ·附着胞膨压 | 第56-58页 |
| 6 突变体△CMK致病性 | 第58-59页 |
| ·离体接种 | 第58页 |
| ·喷雾接种 | 第58-59页 |
| 7 CMK基因时空表达分析 | 第59-61页 |
| ·载体构建 | 第59-61页 |
| 第四章 PLA2基因的克隆与分析 | 第61-69页 |
| 1 PLA2基因的克隆和序列分析 | 第61页 |
| 2 PLA2基因置换载体的构建 | 第61-62页 |
| 3 △PLA2突变子的获得 | 第62-63页 |
| 4 △PLA2互补载体的构建 | 第63页 |
| 5 突变体△PLA2表型分析 | 第63-67页 |
| ·突变体△PLA2的菌落形态和生长速度 | 第63-64页 |
| ·交配试验 | 第64-65页 |
| ·突变体△PLA2的产孢量 | 第65页 |
| ·孢子萌发和附着胞形成 | 第65-66页 |
| ·附着胞膨压 | 第66-67页 |
| 6 突变体△PLA2致病性 | 第67-68页 |
| ·离体接种 | 第67页 |
| ·喷雾接种 | 第67-68页 |
| 7 PLA2基因时空表达分析 | 第68-69页 |
| 第五章 PLC基因的克隆与分析 | 第69-72页 |
| 1 PLC基因的确定 | 第69页 |
| 2 PLC基因置换载体的构建 | 第69-70页 |
| 3 PLC突变子的获得 | 第70-71页 |
| 4 PLC基因时空表达分析 | 第71-72页 |
| 第六章 讨论与总结 | 第72-75页 |
| 参考文献 | 第75-82页 |
| 作者简历 | 第82页 |