| 中文摘要 | 第1-15页 |
| 英文摘要 | 第15-18页 |
| 引言 | 第18-33页 |
| 1 产气荚膜梭菌简介 | 第18-21页 |
| 2 产气荚膜梭菌主要致病毒素的研究进展 | 第21-29页 |
| ·α毒素的结构与功能. | 第21-23页 |
| ·β毒素的结构与功能 | 第23-24页 |
| ·ε毒素结构与功能 | 第24-25页 |
| ·ι 毒素的结构与功能 | 第25-26页 |
| ·肠毒素的结构与功能 | 第26-27页 |
| ·β2 毒素的结构与功能 | 第27-29页 |
| 3 产气荚膜梭菌主要致病基因的检测 | 第29-30页 |
| 4 研究的目的及意义 | 第30-33页 |
| ·产气荚膜梭菌与食物中毒 | 第30-31页 |
| ·鱼类产气荚膜梭菌的研究现状 | 第31页 |
| ·产气荚膜梭菌的致病机理 | 第31-33页 |
| 实验一淡水鱼产气荚膜梭菌的分离和初步鉴定 | 第33-40页 |
| 1 材料与方法 | 第33-36页 |
| ·材料 | 第33-34页 |
| ·方法 | 第34-36页 |
| ·淡水鱼肠壁及肠内容物中产气荚膜梭菌的直接检查 | 第34-35页 |
| ·肠壁增菌后产气荚膜梭菌的分离培养 | 第35页 |
| ·肠内容物增菌后产气荚膜梭菌的分离培养 | 第35页 |
| ·疑似产气荚膜梭菌菌落的生化鉴定 | 第35页 |
| ·分离株的PCR 鉴定 | 第35-36页 |
| ·产气荚膜梭菌分离菌株的保存 | 第36页 |
| 2 结果与分析 | 第36-39页 |
| ·鱼肠壁及肠内容物产气荚膜梭菌的直接分离培养结果 | 第36页 |
| ·鱼肠壁及肠内容物产气荚膜梭菌的增菌培养结果 | 第36-37页 |
| ·典型菌落菌体形态和运动性观察 | 第37页 |
| ·分离菌株生化试验结果 | 第37-38页 |
| ·分离菌株 PCR 鉴定结果 | 第38-39页 |
| 3 讨论 | 第39-40页 |
| 实验二产气荚膜梭菌毒素基因PCR 检测体系的建立 | 第40-46页 |
| 1 材料和方法 | 第40-42页 |
| ·材料 | 第40-41页 |
| ·方法 | 第41-42页 |
| ·产气荚膜梭菌六种毒素基因的三步PCR 检测体系 | 第41页 |
| ·三步PCR 检测体系对标准菌株的扩增 | 第41-42页 |
| ·PCR 特异性实验 | 第42页 |
| ·三步PCR 检测体系对产气荚膜梭菌淡水鱼分离株毒素基因的检测 | 第42页 |
| 2 结果 | 第42-44页 |
| ·三步PCR 对产气荚膜梭菌参考菌株的检测结果 | 第42-43页 |
| ·PCR 特异性实验结果 | 第43页 |
| ·PCR 检测体系对产气荚膜梭菌淡水鱼分离株毒素基因的检测结果 | 第43-44页 |
| 3 讨论 | 第44-46页 |
| ·PCR 反应次数的确定 | 第44-45页 |
| ·多基因PCR 检测体系中各引物的浓度 | 第45页 |
| ·PCR 反应模板的制备方法 | 第45页 |
| ·PCR 反应程序的退火温度 | 第45-46页 |
| 实验三 山东省主要湖库淡水鱼产气荚膜梭菌分布及毒素型调查 | 第46-54页 |
| 1 材料和方法 | 第46-48页 |
| ·材料 | 第46页 |
| ·方法 | 第46-48页 |
| ·样品采集 | 第46页 |
| ·水样大肠菌群MPN 的测定 | 第46-47页 |
| ·水样、泥样、鱼肠内容物、鸭粪便中产气荚膜梭菌的分离与初步鉴定 | 第47页 |
| ·分离菌株毒素基因的检测 | 第47-48页 |
| ·扩增产物的克隆、核苷酸序列测定及序列分析 | 第48页 |
| ·鱼肉中产气荚膜梭菌α毒素基因的检测 | 第48页 |
| 2 结果 | 第48-51页 |
| ·水样大肠菌群MPN 测定结果 | 第48-49页 |
| ·产气荚膜梭菌分离结果 | 第49页 |
| ·产气荚膜梭菌分离株毒素基因检测结果 | 第49-50页 |
| ·扩增片断的克隆及核苷酸序列测定结果 | 第50-51页 |
| ·鱼肉中产气荚膜梭菌α毒素基因的检测 | 第51页 |
| 3 讨论 | 第51-54页 |
| ·水样大肠菌群MPN 测定的意义 | 第51-52页 |
| ·鱼肠内容物中产气荚膜梭菌的来源 | 第52页 |
| ·产气荚膜梭菌鱼源分离株的毒素型 | 第52页 |
| ·与人类食品安全的关系 | 第52-53页 |
| ·产气荚膜梭菌对鱼的致病性 | 第53-54页 |
| 实验四产气荚膜梭菌淡水鱼分离株与其它来源分离株的α毒素全基因序列分析 | 第54-69页 |
| 1 材料与方法 | 第54-56页 |
| ·材料 | 第54-55页 |
| ·方法 | 第55-56页 |
| ·α毒素全基因的PCR 扩增 | 第55页 |
| ·α毒素全基因的克隆及核苷酸序列测定 | 第55页 |
| ·C 型产气荚膜梭菌淡水鱼分离株与畜禽源A 型分离株α毒素全基因的同源性 | 第55-56页 |
| 2 结果 | 第56-67页 |
| ·α毒素全基因PCR 扩增 | 第56页 |
| ·α毒素全基因的克隆 | 第56-67页 |
| ·阳性斑的选取及核苷酸序列测定结果 | 第56-57页 |
| ·α毒素基因核苷酸序列分析 | 第57-58页 |
| ·产气荚膜梭菌淡水鱼分离株α毒素基因核苷酸序列与其他来源产气荚膜梭菌分离株的同源性比较 | 第58-67页 |
| 3 讨论 | 第67-69页 |
| 实验五 Repetitive-Element PCR 对产气荚膜梭菌基因相似性检测 | 第69-76页 |
| 1 材料和方法 | 第69-70页 |
| ·材料 | 第69页 |
| ·方法 | 第69-70页 |
| ·Repetitive-Element PCR 扩增 | 第69页 |
| ·Repetitive-Element PCR 结果分析 | 第69-70页 |
| 2 结果 | 第70-74页 |
| ·微山湖产气荚膜梭菌泥源、鱼源、鸭源分离株的Repetitive-Element PCR 结果 | 第70-71页 |
| ·雪野湖产气荚膜梭菌泥源、鱼源分离株的Repetitive-Element PCR 结果 | 第71-73页 |
| ·东平湖产气荚膜梭菌泥源、鱼源分离株的Repetitive-Element PCR 结果 | 第73-74页 |
| 3 讨论 | 第74-76页 |
| 实验六产气荚膜梭菌淡水鱼分离株对鱼类及小白鼠致病性实验 | 第76-82页 |
| 1 材料 | 第76页 |
| 2 方法 | 第76-78页 |
| ·产气荚膜梭菌菌液制备 | 第76页 |
| ·外毒素的粗制 | 第76-77页 |
| ·产气荚膜梭菌淡水鱼分离株对淡水鱼及小白鼠的致病性 | 第77页 |
| ·坏死性试验 | 第77页 |
| ·致死性试验 | 第77页 |
| ·参考及分离菌株粗制外毒素对小白鼠的半数致死量(LD50)的测定 | 第77页 |
| ·DPJ12、DPJ4 的粗制外毒素对鲫鱼半数致死量(LD50)的测定 | 第77页 |
| ·DPJ12、DPJ4 对鲫鱼及小白鼠的致病性比较 | 第77-78页 |
| 3 结果 | 第78-80页 |
| ·产气荚膜梭菌外毒素的浓度 | 第78页 |
| ·产气荚膜梭菌淡水鱼分离株毒素对小白鼠的坏死性实验结果 | 第78页 |
| ·产气荚膜梭菌淡水鱼分离株毒素致死性试验结果 | 第78页 |
| ·毒素半数致死量的测定结果 | 第78-79页 |
| ·DPJ12、DPJ4 的粗制外毒素对鲫鱼半数致死量(LD50)的测定结果 | 第79-80页 |
| ·统计结果 | 第80页 |
| 4 讨论 | 第80-82页 |
| 实验七产气荚膜梭菌致病机理研究 | 第82-91页 |
| 1 材料 | 第82页 |
| 2 方法 | 第82-85页 |
| ·产气荚膜梭菌菌液及外毒素培养液制备 | 第82-83页 |
| ·产气荚膜梭菌菌液致病性实验 | 第83页 |
| ·产气荚膜梭菌毒素培养液与肉汤培养菌液致病性对照实验 | 第83页 |
| ·组织器官中产气荚膜梭菌的分离及α毒素基因的检测 | 第83-84页 |
| ·病料的制备 | 第83-84页 |
| ·攻毒死亡鼠的病理组织学及毒素蛋白的免疫组织化学检查 | 第84-85页 |
| ·病理组织学检查 | 第84页 |
| ·毒素蛋白的免疫组织化学检测 | 第84-85页 |
| 3 结果 | 第85-90页 |
| ·菌液不同接种途径的致病性试验结果 | 第85页 |
| ·产气荚膜梭菌毒素培养液与菌液致病性对照实验结果 | 第85-86页 |
| ·组织器官中产气荚膜梭菌的分离结果 | 第86页 |
| ·组织中产气荚膜梭菌α毒素基因检测结果 | 第86-87页 |
| ·产气荚膜梭菌外毒素攻毒小鼠病理组织学变化及毒素蛋白的免疫组化定位 | 第87-90页 |
| 4 讨论 | 第90-91页 |
| 本论文的创新之处 | 第91-92页 |
| 参考文献 | 第92-99页 |
| 致谢 | 第99-101页 |
| 博士在读期间发表学术论文 | 第101-102页 |
| 附表：产气荚膜梭菌淡水鱼分离株毒素基因核苷酸序列 | 第102-103页 |
