| 摘要 | 第10-11页 |
| ABSTRACT | 第11页 |
| 第一章 文献综述 | 第12-21页 |
| 1.1 马梨形虫病的概述 | 第12-16页 |
| 1.1.1 生活史 | 第12-15页 |
| 1.1.2 流行病学 | 第15-16页 |
| 1.1.3 临床症状 | 第16页 |
| 1.2 马梨形虫病的诊断方法 | 第16-20页 |
| 1.2.1 病原形态学诊断方法 | 第16-17页 |
| 1.2.2 免疫学诊断方法 | 第17-18页 |
| 1.2.3 分子生物学诊断方法 | 第18-20页 |
| 1.3 本研究的目的与意义 | 第20-21页 |
| 第二章 马梨形虫病巢式PCR检测方法的建立 | 第21-34页 |
| 2.1 材料 | 第21-24页 |
| 2.1.1 标准阳性血液及标准阳性DNA样本 | 第21页 |
| 2.1.2 标准阳性质粒 | 第21页 |
| 2.1.3 临床待检样本 | 第21页 |
| 2.1.4 主要试剂 | 第21-22页 |
| 2.1.5 主要试剂盒 | 第22页 |
| 2.1.6 主要仪器 | 第22-23页 |
| 2.1.7 主要溶液的配制 | 第23-24页 |
| 2.2 方法 | 第24-30页 |
| 2.2.1 巢式PCR引物设计 | 第24-25页 |
| 2.2.2 血液样本DNA提取 | 第25-26页 |
| 2.2.3 标准阳性质粒DNA的提取与验证 | 第26-27页 |
| 2.2.4 巢式PCR反应体系的建立 | 第27-29页 |
| 2.2.4.1 目的基因的扩增 | 第27-28页 |
| 2.2.4.2 PCR产物的验证及胶回收 | 第28-29页 |
| 2.2.5 灵敏性试验 | 第29页 |
| 2.2.6 特异性试验 | 第29-30页 |
| 2.2.7 临床样品检测试验 | 第30页 |
| 2.3 结果与分析 | 第30-32页 |
| 2.3.1 标准阳性质粒PCR结果 | 第30-31页 |
| 2.3.2 灵敏性试验结果 | 第31页 |
| 2.3.3 特异性试验结果 | 第31-32页 |
| 2.3.4 临床样本检测结果 | 第32页 |
| 2.4 讨论与结论 | 第32-34页 |
| 第三章 马梨形虫病双重荧光PCR检测方法的初步建立 | 第34-41页 |
| 3.1 材料与方法 | 第34-35页 |
| 3.1.1 样本来源 | 第34页 |
| 3.1.2 主要试剂 | 第34页 |
| 3.1.3 主要仪器 | 第34-35页 |
| 3.2 方法 | 第35-37页 |
| 3.2.1 引物与探针的设计与合成 | 第35页 |
| 3.2.2 阳性虫株、临床样品DNA提取 | 第35-36页 |
| 3.2.3 荧光定量PCR反应条件优化 | 第36-37页 |
| 3.2.4 双重荧光定量PCR特异性及敏感性试验 | 第37页 |
| 3.3 结果与分析 | 第37-40页 |
| 3.3.1 双重荧光定量PCR反应体系的确定 | 第37-38页 |
| 3.3.2 双重荧光定量PCR特异性试验结果 | 第38页 |
| 3.3.3 双重荧光定量PCR敏感性试验结果 | 第38-40页 |
| 3.4 讨论与结论 | 第40-41页 |
| 第四章 马梨形虫病重组酶聚合酶检测方法的初步建立 | 第41-49页 |
| 4.1 材料 | 第41-42页 |
| 4.1.1 样本来源 | 第41页 |
| 4.1.2 主要试剂 | 第41页 |
| 4.1.3 主要仪器 | 第41-42页 |
| 4.2 方法 | 第42-45页 |
| 4.2.0 阳性血液样本DNA的提取 | 第42-43页 |
| 4.2.1 RPA引物的设计与筛选 | 第43-44页 |
| 4.2.2 RPA荧光探针的设计与优化 | 第44页 |
| 4.2.3 引物特异性试验 | 第44-45页 |
| 4.2.4 敏感性试验 | 第45页 |
| 4.3 结果与分析 | 第45-47页 |
| 4.3.1 引物筛选结果 | 第45页 |
| 4.3.2 RPA反应条件优化 | 第45-47页 |
| 4.3.3 敏感性试验结果 | 第47页 |
| 4.4 讨论与结论 | 第47-49页 |
| 结论 | 第49-50页 |
| 参考文献 | 第50-55页 |
| 致谢 | 第55-56页 |
| 英文缩略表 | 第56-57页 |