| 摘要 | 第1-7页 |
| ABSTRACT | 第7-15页 |
| 前言 | 第15-20页 |
| 第一部分 SH2B1β表达载体的构建及鉴定 | 第20-38页 |
| 1 材料 | 第20-21页 |
| ·质粒与菌株 | 第20页 |
| ·主要试剂 | 第20页 |
| ·主要仪器 | 第20页 |
| ·主要溶液的配制 | 第20-21页 |
| ·引物 | 第21页 |
| 2 方法 | 第21-25页 |
| ·引物设计 | 第21页 |
| ·脂肪干细胞(ADSC)的原代培养及分化 | 第21-22页 |
| ·RNA提取 | 第22页 |
| ·RT-PCR反应 | 第22-23页 |
| ·重组质粒SH2B1β-pET28a(+)的构建与鉴定 | 第23-25页 |
| 3 结果 | 第25-35页 |
| ·ADSC的原代培养及分化 | 第25页 |
| ·RT-PCR | 第25-26页 |
| ·SH2B1β-pET28a(+)重组表达质粒的构建、筛选及鉴定 | 第26-28页 |
| ·测序鉴定 | 第28-35页 |
| 4 讨论 | 第35-37页 |
| 5 小结 | 第37-38页 |
| 第二部分 重组蛋白的表达、纯化及鉴定 | 第38-49页 |
| 1 材料 | 第38-39页 |
| ·主要试剂 | 第38页 |
| ·主要仪器 | 第38页 |
| ·溶液及培养基配制 | 第38-39页 |
| 2 方法 | 第39-41页 |
| ·重组蛋白的诱导表达及产物的SDS-PAGE分析 | 第39-40页 |
| ·融合蛋白的表达优化 | 第40页 |
| ·融合蛋白的大量诱导表达 | 第40页 |
| ·表达产物的纯化 | 第40-41页 |
| ·表达产物Western-blot鉴定 | 第41页 |
| 3 结果 | 第41-46页 |
| ·重组质粒SH2B1β-pET28a(+)的表达 | 第41-42页 |
| ·诱导表达条件的优化 | 第42-43页 |
| ·表达产物分析 | 第43-44页 |
| ·重组表达蛋白的纯化 | 第44-46页 |
| ·表达产物鉴定 | 第46页 |
| 4 讨论 | 第46-48页 |
| 5 小结 | 第48-49页 |
| 第三部分 单克隆抗体的制备及鉴定 | 第49-60页 |
| 1 材料 | 第49-51页 |
| ·试剂 | 第49页 |
| ·细胞、组织与动物 | 第49页 |
| ·主要仪器 | 第49页 |
| ·主要试剂配制 | 第49-51页 |
| 2 方法 | 第51-54页 |
| ·抗原制备 | 第51页 |
| ·动物免疫 | 第51页 |
| ·效价测定 | 第51-52页 |
| ·细胞融合 | 第52页 |
| ·阳性克隆的筛选和克隆化 | 第52-53页 |
| ·单克隆抗体特异性鉴定 | 第53-54页 |
| ·ELISA鉴定 | 第53页 |
| ·Western-Blot鉴定 | 第53-54页 |
| ·McAb效价测定 | 第54页 |
| 3 结果 | 第54-57页 |
| ·杂交瘤细胞株的建立 | 第54-55页 |
| ·抗体的特异性鉴定 | 第55页 |
| ·单克隆抗体培养上清的效价 | 第55-57页 |
| 4 讨论 | 第57-58页 |
| 5 小结 | 第58-60页 |
| 参考文献 | 第60-64页 |
| 综述 | 第64-70页 |
| 附录:缩略词 | 第70-71页 |
| 致谢 | 第71-73页 |
| 统计学证明 | 第73页 |