| 摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-8页 |
| 目录 | 第8-11页 |
| 图表 | 第11-13页 |
| 第一章 文献综述 | 第13-27页 |
| ·三七研究概况 | 第13-26页 |
| ·三七的化学成分 | 第13-15页 |
| ·三七总皂苷的生物合成 | 第15-19页 |
| ·三七皂苷的分离与检测 | 第19-23页 |
| ·三七总皂苷的药理作用 | 第23-26页 |
| ·本研究的目的和意义 | 第26-27页 |
| 第二章 三七愈伤组织的诱导及生长培养基的优化 | 第27-34页 |
| ·前言 | 第27-28页 |
| ·材料与试剂 | 第28页 |
| ·实验材料 | 第28页 |
| ·主要试剂 | 第28页 |
| ·实验方法与结果 | 第28-32页 |
| ·三七子叶愈伤组织的诱导 | 第28页 |
| ·愈伤诱导率测定方法 | 第28页 |
| ·培养基 | 第28页 |
| ·不同植物激素对三七子叶愈伤组织诱导的影响 | 第28-29页 |
| ·不同植物激素对三七愈伤组织生长的影响 | 第29-30页 |
| ·三七子叶愈伤组织中皂苷含量的检测 | 第30-32页 |
| ·小结与讨论 | 第32-34页 |
| 第三章 SS、DS基因的克隆与过表达载体的构建 | 第34-61页 |
| ·前言 | 第34-35页 |
| ·材料与试剂 | 第35-36页 |
| ·植物材料 | 第35页 |
| ·菌株和载体 | 第35页 |
| ·主要试剂 | 第35-36页 |
| ·缓冲液和培养基配方 | 第36页 |
| ·实验方法 | 第36-42页 |
| ·三七总RNA的提取及纯化 | 第36-37页 |
| ·cDNA的合成 | 第37-39页 |
| ·PCR产物胶回收 | 第39页 |
| ·T-A克隆 | 第39页 |
| ·转化大肠杆菌DH5α感受态细胞 | 第39-40页 |
| ·序列分析 | 第40页 |
| ·SDS碱裂解法提取质粒 | 第40-41页 |
| ·双酶切反应 | 第41-42页 |
| ·酶切产物胶回收 | 第42页 |
| ·连接反应 | 第42页 |
| ·转化大肠杆菌DH5α感受态细胞 | 第42页 |
| ·pCAMBIA2300S-SS和pCAMBIA2300S-DS重组体质粒的筛选和鉴定 | 第42页 |
| ·结果与分析 | 第42-59页 |
| ·三七叶和花的总RNA | 第42-43页 |
| ·SS、DS的RT-PCR | 第43-44页 |
| ·SS、DS基因的克隆 | 第44页 |
| ·SS、DS序列分析 | 第44-56页 |
| ·SDS碱裂解法提取pMD18-T-SS、pMD18-T-DS和pCAMBIA2300S载体质粒 | 第56页 |
| ·pMD18-T-SS、pMD18-T-DS和pCAMBIA2300S载体质粒双酶切 | 第56-57页 |
| ·SS、DS、pCAMBIA2300S双酶切产物胶回收 | 第57-58页 |
| ·pCAMBIA2300S-SS和pCAMBIA2300S-DS重组质粒载体的构建 | 第58-59页 |
| ·双酶切检测 | 第59页 |
| ·讨论 | 第59-61页 |
| 第四章 根癌农杆菌介导的SS基因遗传转化研究 | 第61-79页 |
| ·前言 | 第61页 |
| ·材料与试剂 | 第61-63页 |
| ·菌种与材料 | 第61页 |
| ·主要试剂 | 第61-62页 |
| ·主要仪器 | 第62页 |
| ·缓冲液和培养基配方 | 第62页 |
| ·植物培养基 | 第62-63页 |
| ·实验方法 | 第63-68页 |
| ·SDS碱裂解法提取质粒 | 第63页 |
| ·制备农杆菌感受态细胞 | 第63-64页 |
| ·CaCl_2冻融法转化农杆菌感受态细胞 | 第64页 |
| ·菌液PCR反应 | 第64页 |
| ·农杆菌的活化 | 第64页 |
| ·农杆菌介导的三七遗传转化 | 第64-65页 |
| ·CTAB法提取基因组DNA | 第65页 |
| ·PCR检测 | 第65-66页 |
| ·荧光定量PCR检测 | 第66-67页 |
| ·转基因三七细胞单体皂苷和总皂苷含量测定 | 第67-68页 |
| ·结果与分析 | 第68-77页 |
| ·SS植物表达载体转化根癌农杆菌 | 第68-69页 |
| ·愈伤组织的浸染和阳性细胞的筛选 | 第69页 |
| ·转基因愈伤细胞的基因组PCR检测 | 第69-70页 |
| ·荧光定量PCR | 第70-76页 |
| ·皂苷含量检测 | 第76-77页 |
| ·讨论 | 第77-79页 |
| 第五章 结论与展望 | 第79-81页 |
| ·结论 | 第79-80页 |
| ·展望 | 第80-81页 |
| 致谢 | 第81-82页 |
| 参考文献 | 第82-88页 |
| 附录A 攻读硕士期间发表论文目录 | 第88页 |
