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小反刍兽疫间接ELISA检测方法的优化及其应用

中文摘要第1-5页
ABSTRACT第5-7页
目录第7-12页
英文缩略词表第12-13页
第一章 小反刍兽疫研究进展第13-22页
 1. 历史和地理分布第13-16页
   ·研究历史第13页
   ·地理分布第13-15页
   ·谱系分布第15-16页
 2. 流行病学第16-17页
   ·传播方式第16页
   ·感染宿主第16-17页
 3. 病原学第17-18页
   ·形态及理化特性第17页
   ·基因组及蛋白第17-18页
 4. 临床症状第18页
 5. 病理变化第18-19页
 6. 诊断技术第19-20页
     ·E LISA 方法第19页
     ·R T-PCR 方法第19-20页
   ·病毒分离第20页
 7. 疫苗第20-22页
   ·异源疫苗第20页
   ·同源疫苗第20-22页
第二章 小反刍兽疫间接ELISA 检测方法的优化第22-52页
 前言第22-23页
 第一节 pET-PPR-N 重组菌的鉴定及其表达条件的标化第23-31页
  1. 材料与仪器第23-24页
   ·菌种第23页
   ·酶类和试剂盒第23页
   ·主要仪器第23-24页
  2. 方法第24-27页
   ·重组菌酶切和PCR 鉴定第24-25页
   ·重组菌诱导表达和条件优化第25-26页
   ·表达蛋白的纯化第26-27页
   ·蛋白含量测定与保存第27页
  3. 结果第27-30页
   ·重组菌酶切和PCR 鉴定第27-28页
   ·重组菌诱导表达和条件标化第28-30页
  4. 讨论第30-31页
 第二节 PPRV 间接ELISA 方法的改进与优化第31-44页
  1. 材料与仪器第31页
   ·抗原第31页
   ·阳性血清及其阴性血清第31页
   ·主要免疫学试剂第31页
   ·主要仪器第31页
  2. 方法第31-34页
   ·重组N 蛋白抗原最适包被浓度和抗体最佳稀释度的确定第31-32页
   ·重组N 蛋白抗原包被条件的确定第32页
   ·封闭液的确定第32页
   ·封闭时间的确定第32-33页
   ·血清稀释液的确定第33页
   ·血清反应时间的确定第33页
   ·二抗作用时间的确定第33页
   ·底物反应时间的确定第33-34页
   ·重复试验第34页
   ·交叉试验第34页
  3. 结果第34-42页
   ·最佳抗原包被浓度的确定第34-35页
   ·抗原包被条件的确定第35-36页
   ·不同封闭液的比较第36页
   ·不同封闭时间的比较第36-37页
   ·不同血清稀释液的比较第37-38页
   ·血清不同作用时间的比较第38页
   ·二抗不同作用时间的比较第38-39页
   ·底物不同反应时间的比较第39-40页
   ·重复试验第40-41页
   ·交叉试验第41-42页
  4. 讨论第42-44页
   ·反应程序与试剂的标化第42页
   ·影响因素第42-44页
 第三节 与竞争ELISA 试剂盒比较确定间接ELISA 的临界值第44-52页
  1. 材料与仪器第44页
   ·血清第44页
   ·试剂第44页
   ·主要仪器第44页
  2. 方法第44-46页
   ·用竞争ELISA 检测临床血清样品第44-45页
   ·用间接ELISA 检测临床血清样品第45-46页
   ·用TG-ROC 软件确定阴阳性血清的临界值第46页
  3. 结果第46-49页
   ·血清样品的OD 值分布第46-47页
   ·间接ELISA 阴阳性血清的测定第47页
   ·间接ELISA 阴阳性血清临界值的确定第47-48页
   ·与c-ELISA 的比较第48-49页
  4. 讨论与结论第49-52页
   ·诊断的特异性和敏感性第49-50页
   ·阴阳性血清临界值的确定第50-51页
   ·两种ELISA 方法的比较第51-52页
第三章 小反刍兽疫间接ELISA 方法的应用第52-63页
 前言第52-53页
 第一节 ELISA 方法在PPR 临床诊断中的应用第53-58页
  1. 材料与方法第53页
   ·血清第53页
   ·主要试剂及仪器第53页
   ·试验步骤第53页
  2. 结果第53-56页
   ·疫区划分第53-55页
   ·免疫监测第55-56页
  3. 讨论第56-58页
 第二节 群体抗体水平差异区分PPRV 自然感染与疫苗免疫第58-63页
  1. 材料与仪器第58页
  2. 方法第58-59页
   ·自然感染羊抗体水平第58-59页
   ·疫苗免疫羊抗体水平第59页
  3. 结果第59-62页
   ·自然感染羊群抗体水平第59-60页
   ·疫苗免疫羊抗体水平第60-61页
   ·阳性率的比较第61-62页
  4. 讨论第62-63页
第四章 西藏阿里地区小反刍兽疫流行调查研究第63-72页
 前言第63页
 1. 材料与方法第63-64页
   ·血清与组织第63-64页
   ·抗体检测第64页
   ·核酸检测第64页
 2. 结果第64-66页
   ·临床症状第64页
   ·抗体检测结果第64-65页
   ·核酸检测结果第65-66页
 3. 讨论第66-71页
   ·疫点空间分布第67页
   ·疫情的扩散第67-69页
   ·宿主特征第69-70页
   ·疫情扩散的主要方式第70-71页
 4. 小结第71-72页
参考文献第72-78页
致谢第78-79页
攻读硕士学位期间发表的学术论文第79页

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