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反义RNA抑制番茄DHS基因表达的研究

内容提要第1-5页
符号、缩略语词表第5-9页
第1章 绪论第9-33页
   ·脱氧羟腐胺赖氨酸合酶(DHS)与真核翻译起始因子(eIF-5A)的关系第9-23页
     ·eIF-5A的结构与保守性特征第10-11页
     ·不同同工型的eIF-5A第11-12页
     ·eIF-5A的功能第12-17页
     ·DHS对eIF-5A的作用机制第17-19页
     ·DHS的结构特征第19-21页
     ·GC7对 DHS的抑制第21页
     ·抑制DHS表达对植物的影响第21-23页
   ·反义技术第23-31页
     ·反义技术的分类第23-26页
     ·反义技术在植物中的应用第26-31页
   ·研究目的和意义第31-33页
第2章 番茄DHS基因克隆第33-59页
   ·前言第33-36页
     ·RT-PCR 反应原理第33-35页
     ·基因克隆技术原理第35-36页
   ·材料与方法第36-46页
     ·实验材料第36-39页
     ·实验方法第39-46页
   ·结果与分析第46-52页
     ·番茄总RNA提取第46-47页
     ·总RNA纯度测定结果第47页
     ·RT-PCR结果分析第47-48页
     ·大肠杆菌蓝白斑筛选结果第48-49页
     ·阳性克隆PCR鉴定结果第49页
     ·RT-PCR扩增片段测序结果第49-52页
   ·讨论第52-57页
     ·番茄总RNA提取第52-53页
     ·RT-PCR引物设计与反应条件第53-54页
     ·克隆载体的选择第54-55页
     ·RT-PCR产物与克隆载体的连接第55页
     ·大肠杆菌感受态细胞制备第55-56页
     ·重组子的蓝白斑筛选第56页
     ·RT-PCR扩增片段的测序第56-57页
   ·小结第57-59页
第3章 番茄DHS基因的反义表达载体的构建第59-73页
   ·前言第59-60页
   ·材料与方法第60-64页
     ·实验材料第60-61页
     ·实验方法第61-64页
   ·结果与分析第64-68页
     ·pMD19-DHS重组质粒的酶切第64-65页
     ·pCAMBIA1302质粒的酶切第65-66页
     ·反义表达载体的鉴定第66-68页
   ·讨论第68-71页
     ·质粒DNA的提取第68-69页
     ·限制性内切酶的酶切第69-70页
     ·pCAMBIA1302载体第70-71页
   ·小结第71-73页
第4章 农杆菌介导的番茄pCAMBIA-antiDHS遗传转化第73-85页
   ·前言第73-75页
   ·材料与方法第75-80页
     ·实验材料第75-77页
     ·实验方法第77-80页
   ·结果与分析第80-82页
     ·阳性LBA4404的PCR鉴定第80页
     ·潮霉素选择压浓度的选择第80-81页
     ·分化培养基中细胞分裂素(6-BA)和生长素(IAA)浓度的 选择第81页
     ·不同外植体的发芽率第81-82页
   ·讨论第82-83页
     ·生长素和细胞分裂素在植物器官分化中的作用第82-83页
   ·小结第83-85页
第5章 转基因番茄的实时荧光定量 PCR遗传转化鉴定及叶绿素含量测定第85-97页
   ·前言第85-87页
   ·材料与方法第87-90页
     ·试剂与仪器第87-88页
     ·实验方法第88-90页
   ·结果与分析第90-92页
     ·利用实时荧光定量 PCR对 DHS和eIF-5A基因表达水平的分析第90-91页
     ·叶绿素含量测定第91-92页
     ·抑制DHS基因表达产生的生长停滞型番茄第92页
   ·讨论第92-94页
     ·实时荧光定量 PCR是鉴定基因表达水平的有效方法第92页
     ·实时荧光定量PCR引物的设计要求第92-93页
     ·实时荧光定量PCR反应中内参的选择第93页
     ·抑制DHS基因表达对番茄的影响第93-94页
   ·小结第94-97页
第6章 总结与展望第97-99页
   ·总结第97页
   ·展望第97-99页
参考文献第99-113页
博士期间发表文章及参与科研课题第113-115页
致谢第115-116页
中文摘要第116-118页
Abstract第118-119页

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