| 中文摘要 | 第1-16页 |
| ABSTRACT | 第16-20页 |
| 符号说明 | 第20-22页 |
| 第一章 绪论 | 第22-61页 |
| ·引起腹泻的肠致病性大肠杆菌 | 第22-26页 |
| ·EPEC | 第22-24页 |
| ·ETEC | 第24-25页 |
| ·EIEC | 第25页 |
| ·EHEC | 第25-26页 |
| ·EA-Aggec | 第26页 |
| ·致病性大肠杆菌毒力岛 | 第26-34页 |
| ·PAI的结构研究 | 第28-31页 |
| ·PAI编码的蛋白转运系统 | 第31-34页 |
| ·肠致病性大肠杆菌的LEE | 第34-37页 |
| ·肠出血性大肠杆菌的LEE | 第37-38页 |
| ·大肠杆菌O157:H7其他的基因岛 | 第38-40页 |
| ·大肠杆菌O157:H7的K基因岛与O基因岛 | 第38-39页 |
| ·大肠杆菌O157:H7的TAI | 第39-40页 |
| ·大肠杆菌O157:H7的疫苗研究 | 第40-46页 |
| ·LPS疫苗研究 | 第41页 |
| ·LT毒素疫苗研究 | 第41页 |
| ·黏附素疫苗研究 | 第41-43页 |
| ·T3SS疫苗研究 | 第43页 |
| ·大肠杆菌ghost疫苗 | 第43-44页 |
| ·H7疫苗 | 第44页 |
| ·弱毒活疫苗研究 | 第44页 |
| ·临床应用的ETEC疫苗 | 第44-46页 |
| ·植物疫苗的研究进展 | 第46-58页 |
| ·植物生产重组疫苗 | 第47-53页 |
| ·植物疫苗的免疫原性 | 第53-54页 |
| ·植物疫苗动物模型的免疫原性研究 | 第54-56页 |
| ·植物疫苗在临床中的应用研究 | 第56-58页 |
| ·结束语—未来的挑战 | 第58-61页 |
| 第二章 大肠杆菌O157:H7 espA基因在生菜中的瞬时表达 | 第61-98页 |
| ·引言 | 第61-62页 |
| ·实验材料 | 第62-70页 |
| ·菌株和质粒 | 第62页 |
| ·主要试剂 | 第62-63页 |
| ·培养溶液的配制 | 第63-65页 |
| ·主要试剂配方 | 第65-70页 |
| ·主要实验仪器 | 第70页 |
| ·实验方法 | 第70-82页 |
| ·E.coli O157:H7 espA基因在大肠杆菌BL21中的表达 | 第70-71页 |
| ·SDS-PAGE电泳检测pET15b-espA在大肠杆菌BL21中的表达 | 第71页 |
| ·包涵体的变性与复性 | 第71-72页 |
| ·pBI121-espA重组载体的构建 | 第72-76页 |
| ·EspA在转染生菜中的瞬时表达 | 第76-77页 |
| ·Western blot检测生菜细胞中EspA重组蛋白 | 第77-79页 |
| ·BSA标准曲线的制备及EspA原核表达蛋白的定量 | 第79-80页 |
| ·ELISA试验步骤 | 第80-81页 |
| ·EspA生菜疫苗免疫小鼠 | 第81-82页 |
| ·免疫小鼠的抗体水平的检测 | 第82页 |
| ·实验结果 | 第82-93页 |
| ·重组质粒pET15b-espA在大肠杆菌BL21中的表达 | 第82-83页 |
| ·包涵体变性复性后重组蛋白EspA的定量 | 第83-84页 |
| ·重组质粒pBI121-espA载体的构建 | 第84-85页 |
| ·espA阳性克隆的筛选 | 第85-87页 |
| ·重组质粒pBI121-espA、pBI121-ΩespA转化农杆菌 | 第87页 |
| ·生菜中EspA蛋白含量的测定 | 第87-90页 |
| ·Western blot法定性分析生菜中表达的EspA重组蛋白 | 第90-92页 |
| ·小鼠免疫试验 | 第92-93页 |
| ·分析与讨论 | 第93-96页 |
| ·EspA原核表达形成包涵体的原因 | 第93页 |
| ·不同农杆菌菌株的侵染能力的分析 | 第93-94页 |
| ·生菜表达异源蛋白的糖基化 | 第94-95页 |
| ·生菜疫苗与原核表达的抗原量的分析 | 第95-96页 |
| ·小结 | 第96-98页 |
| 第三章 免疫小鼠多克隆抗体生物学特性的研究 | 第98-113页 |
| ·引言 | 第98-99页 |
| ·实验材料 | 第99-100页 |
| ·细胞株和实验动物 | 第99页 |
| ·主要试剂 | 第99页 |
| ·培养基 | 第99页 |
| ·主要试剂配方 | 第99-100页 |
| ·主要实验仪器 | 第100页 |
| ·实验方法 | 第100-104页 |
| ·HeLa细胞的培养 | 第100-101页 |
| ·大肠杆菌O157:H7突变株EspA蛋白的诱导 | 第101页 |
| ·EspA的细菌黏附性检测 | 第101-102页 |
| ·EspA的FAS试验 | 第102页 |
| ·EspA体外抗体结合试验 | 第102-103页 |
| ·大肠杆菌O157:H7的培养方式对表面抗原EspA的影响 | 第103-104页 |
| ·实验结果 | 第104-110页 |
| ·细菌黏附性检测 | 第104-106页 |
| ·FAS试验 | 第106-108页 |
| ·体外抗体结合 | 第108-110页 |
| ·分析与讨论 | 第110-112页 |
| ·小结 | 第112-113页 |
| 第四章 生菜稳定表达体系的建立及转基因生菜疫苗的研究 | 第113-134页 |
| ·引言 | 第113-114页 |
| ·实验材料 | 第114-116页 |
| ·菌株与质粒 | 第114页 |
| ·主要试剂 | 第114-115页 |
| ·实验器材 | 第115页 |
| ·溶液配制 | 第115-116页 |
| ·实验方法 | 第116-122页 |
| ·原生质体的培养 | 第116-117页 |
| ·生菜组织的诱导分化 | 第117页 |
| ·espA在生菜组织中的稳定表达 | 第117-118页 |
| ·转基因生菜总核酸的提取 | 第118-119页 |
| ·稳定表达的EspA免疫小鼠 | 第119页 |
| ·小鼠肠道病理组织切片的制作 | 第119-122页 |
| ·实验结果 | 第122-130页 |
| ·生菜原生质体的培养 | 第122-123页 |
| ·生菜愈伤组织的培养分化 | 第123-124页 |
| ·农杆菌转染的生菜组织的培养 | 第124-126页 |
| ·生菜愈伤组织中espA基因的检测 | 第126-127页 |
| ·生菜组织中EspA的ELISA检测 | 第127-128页 |
| ·生菜免疫小鼠的IgG检测 | 第128-129页 |
| ·免疫小鼠的攻毒试验及病理组织学检测 | 第129-130页 |
| ·分析与讨论 | 第130-133页 |
| ·生菜组织的培养 | 第130-132页 |
| ·转基因espA生菜的检测 | 第132-133页 |
| ·小结 | 第133-134页 |
| 第五章 E.coli O157:H7 stx-B亚单位的原核表达及EspA-Stx1B融合蛋白的研究 | 第134-144页 |
| ·引言 | 第134-135页 |
| ·实验材料 | 第135-136页 |
| ·菌株和质粒 | 第135页 |
| ·Tricine SDS-PAGE电泳试剂的配制 | 第135-136页 |
| ·实验方法 | 第136-138页 |
| ·Stx基因的扩增 | 第136页 |
| ·B亚单位表达载体及的构建EspA—B植物表达载体的构建 | 第136页 |
| ·B亚单位的原核诱导表达 | 第136-137页 |
| ·Tricine-SDS-PAGE电泳检测蛋白的表达 | 第137-138页 |
| ·生菜表达载体的构建及生菜的转染 | 第138页 |
| ·小鼠的免疫试验及抗体的检测 | 第138页 |
| ·实验结果 | 第138-143页 |
| ·分析与讨论 | 第143-144页 |
| 全文总结 | 第144-146页 |
| 参考文献 | 第146-160页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文目录 | 第160-162页 |
| 致谢 | 第162-163页 |
| 附录 | 第163-185页 |
| 学位论文评阅及答辩情况表 | 第185页 |
